第2节微生物的培养技术及应用 第1课时微生物的基本培养技术 学案设计 ■■■■学习目标 1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。 2阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。 3.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室进行微生物分离和纯化的常用方法。 ■■自主预习 一、培养基的配制 1培养基 (1)概念：人们按照 对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营 类 (2)作用：用以 鉴定、保存微生物或积累其代谢物， (3)类型 标陪养基种 培养基特点 作用 加凝固剂如琼脂 微生物的分离与鉴定，活菌计数 培养基 保藏菌种 容器放倒不致流出，剧烈震动 观察微生物的运动、分类鉴定 倍养基 则破散。 体培养 不加凝固剂 常用于工业生产 续表 标培养基种 培养基特点 作用 根据某种微生物的特殊营养要求配制 选择分 培养基 加入能与目的南的代谢产物发生显色反 培养基 应的指示剂 天然培养 含化学成分不明确的天然物质 业 料 基 来 合成培养 用己知的化学物质配制 分类 2.培养基的配制 )营养成分：水、无机盐
第 2 节 微生物的培养技术及应用 第 1 课时 微生物的基本培养技术 学案设计 学习目标 1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。 2.阐明无菌技术是在操作过程中,保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。 3.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室进行微生物分离和纯化的常用方法。 自主预习 一、 培养基的配制 1.培养基 (1)概念:人们按照 对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营 养 。 (2)作用:用以 、 、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 (3)类型 标 准 培养基种 类 培养基特点 作用 物 理 状 态 培养基 加凝固剂,如琼脂 微生物的分离与鉴定,活菌计数, 保藏菌种 培养基 容器放倒不致流出,剧烈震动 则破散 观察微生物的运动、分类鉴定 液体培养 基 不加凝固剂 常用于工业生产 续表 标 准 培养基种 类 培养基特点 作用 功 能 培养基 根据某种微生物的特殊营养要求配制 选择分 离 培养基 加入能与目的菌的代谢产物发生显色反 应的指示剂 鉴定 原 料 来 源 天然培养 基 含化学成分不明确的天然物质 工业生 产 合成培养 基 用已知的化学物质配制 分类鉴 定 2.培养基的配制 (1)营养成分:水、无机盐、 、
1000mL牛肉膏蛋白陈培养基的营养组成 阻分含量 提供的主要营养 牛肉 灰、磷酸盐和雄 10g 源和维生素等 NaCI 5g 无机盐 定容至1000 (2)还需满足微生物生长对 、特殊营养物质、氧气的需求。例如，在培养乳酸杆菌时 需要在培养基中添加维生素：在培养霉菌时，需要将培养基调至酸性：在培养细菌时，需要将培 养基调至中性或弱碱性，在培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件 二、无菌技术 1获得 的微生物培养物的关键是」 。无茵技术主要包括 和 2.消毒 指使用较为 的物理、化学或生物等方法杀死物体 一或内部 微生物 题治→10℃煮沸5-6mi 巴氏正法+6265℃消毒30min或80-90℃处理30s-1min 化药物围→用酒精擦拭双手、用氧气清寿水群等 外线清圉一种家，接种箱或超净工作台可用紫外线飘 3灭南 指使用 的理化方法杀死物体内外 的微生物，包括 和 工灭一买热23，常用于玻器，金 均烧灭菌一→常用于接种环、 接种针、试管口等的灭菌 4.比较 类型 适用范国操作方法 煮沸消毒 62-65℃消毒煮30 min或 S090℃处理30s nin 学药
1 000 mL 牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉 膏 5 g 碳源、磷酸盐和维生 素等 蛋白 胨 10 g 氮源和维生素等 NaCl 5 g 无机盐 H2O 定容至 1 000 mL 水 (2)还需满足微生物生长对 、特殊营养物质、氧气的需求。例如,在培养乳酸杆菌时, 需要在培养基中添加维生素;在培养霉菌时,需要将培养基调至酸性;在培养细菌时,需要将培 养基调至中性或弱碱性;在培养厌氧微生物时,需要提供无氧的条件。 二、无菌技术 1.获得 的微生物培养物的关键是 。无菌技术主要包括 和 。 2.消毒 指使用较为 的物理、化学或生物等方法杀死物体 或内部 微生物。 3.灭菌 指使用 的理化方法杀死物体内外 的微生物,包括 和 。 4.比较 类型 适用范围操作方法 消 毒 煮沸消毒 法 62~65 ℃消毒煮 30 min 或 80~90 ℃处理 30 s~1 min 化学药物 消毒
紫外线消 为烧灭菌 热灭菌 (1)概念：由 繁殖所获得的微生物群体称为 获得纯培养物的过程 就是 (2)步骤：①配制 ② (培养基和器具)，③微生物接种，④ ⑤恒温箱中培养。 2.探究实践 ()原理：微生物葫 或 _成单个细胞，单个细胞紫殖 菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定 形态结构的 ,这就是菌落。 2)方法·采用 将单个微生物分散在固体培养基上之后经 培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的 (3)步骤 a配制培养基 ①配制培养基 称取去皮马铃薯200g,切成小块加水1000mL,加热煮沸至马铃薯软烂用纱布过滤。向 滤液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000mL。 正黄 将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽 灭菌锅中，在压力为 、温度为 _的条件下，灭菌15-30min。将5~8套培养皿 包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h。 ③作倒平板 待培养基冷却至 左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 倒平板注意事项 温度：50℃左右：操作：在酒精灯火焰附近：冷凝后平板 b.接种和分离酵母菌 通计 在固体培养基表面连续别线的操作将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基 表面。经过数次划线后培养，可以分离得到 c.培养酵母菌 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入 左右的恒温培养箱中培养 四、微生物的数量测定 1稀释涂布平板法 (1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中 一。通过统计平板上的 就能推测出样品中大约含有多少活 菌。 (2)计数原则：平板上菌落数应在 个，同一稀释度下，应至少对 个平板进 行重复计数然后求出
紫外线消 毒 灭 菌 灼烧灭菌 干热灭菌 三、微生物的纯培养 1.纯培养 (1)概念:由 繁殖所获得的微生物群体称为 ,获得纯培养物的过程 就是 。 (2)步骤:①配制 ;② (培养基和器具);③微生物接种;④ ; ⑤恒温箱中培养。 2.探究实践 (1)原理:微生物群 或 成单个细胞,单个细胞繁殖 。 菌落:分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定 形态结构的 ,这就是菌落。 (2)方法:采用 和 将单个微生物分散在固体培养基上,之后经 培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的 。 (3)步骤 a.配制培养基 ①配制培养基 称取去皮马铃薯 200 g,切成小块,加水 1 000 mL,加热煮沸至马铃薯软烂,用纱布过滤。向 滤液中加入 20 g 葡萄糖(也可用蔗糖代替)、15~20 g 琼脂,用蒸馏水定容至 1 000 mL。 ②灭菌 将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加棉塞,包上牛皮纸,并用皮筋勒紧,再放入高压蒸汽 灭菌锅中,在压力为 、温度为 的条件下,灭菌 15~30 min。将 5~8 套培养皿 包成一包,用几层牛皮纸包紧,放入干热灭菌箱内,在 160~170 ℃灭菌 2 h。 ③倒平板 待培养基冷却至 左右时,在酒精灯火焰附近倒平板。 倒平板注意事项: 温度:50 ℃左右;操作:在酒精灯火焰附近;冷凝后平板 。 b.接种和分离酵母菌 通过 在固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基 表面。经过数次划线后培养,可以分离得到 。 c.培养酵母菌 完成平板划线后,待菌液被培养基吸收,将接种后的平板和一个未接种的平板倒置,放入 左右的恒温培养箱中培养 。 四、微生物的数量测定 1.稀释涂布平板法 (1)原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中 的 。通过统计平板上的 ,就能推测出样品中大约含有多少活 菌。 (2)计数原则:平板上菌落数应在 个,同一稀释度下,应至少对 个平板进 行重复计数,然后求出
(3)不足：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是 个菌落，所以统计 的菌落数往往比活菌的实际数日」 2,显微镜直接计数法 (1)计数工具：显微镜 2)不足：由于计数结果是 的总和，所以一般比活菌的实际数目■ ■■■■课堂探究 为什么培养基需要氮源？ 二、无菌技术除用于防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？ 三、1培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培 养基的温度？ 2.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 3.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？ 4.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需 要灼烧接种环吗？为什么？ ■■■■■■核心素养专练 1下列关于制备牛肉音蛋白陈固体培养基的叙述错误的是( A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、 灭菌 B将称好的牛肉音连同称量纸一同放入烧杯 C,待培养基冷却至50℃左右时倒平板 D.待培养基冷却凝固后将平板倒过来放置 2.下列关于灭菌和消毒的说法不正确的是( A灭菌是指杀死环境中的所有微生物，包括芽孢和孢子 B灭菌和消毒实质上是相同的 C.接种环用灼烧法灭菌 D.常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、湿热灭菌等
(3)不足:当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是 个菌落,所以统计 的菌落数往往比活菌的实际数目 。 2.显微镜直接计数法 (1)计数工具:显微镜、 。 (2)不足:由于计数结果是 的总和,所以一般比活菌的实际数目 。 课堂探究 一、为什么培养基需要氮源? 二、无菌技术除用于防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么作用? 三、1.培养基灭菌后,需要冷却到 50 ℃左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培 养基的温度? 2.平板冷凝后,为什么要将平板倒置? 3.怎么确定所倒平板未被杂菌污染? 4.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需 要灼烧接种环吗?为什么? 核心素养专练 1.下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述,错误的是( ) A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 C.待培养基冷却至 50 ℃左右时倒平板 D.待培养基冷却凝固后将平板倒过来放置 2.下列关于灭菌和消毒的说法不正确的是( ) A.灭菌是指杀死环境中的所有微生物,包括芽孢和孢子 B.灭菌和消毒实质上是相同的 C.接种环用灼烧法灭菌 D.常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、湿热灭菌等
3.下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，据图分析不正确的 是 甲 乙 A获得图甲效果的接种方法是稀释涂布平板法 B.获得图乙效果的接种方法是平板划线法 C若在纯化土城 时菌液浓度过高，培养基上的菌落可能会连成一片 D.在接种前要对培养基进行消毒处理 4.下列有关微生物营养物质的叙述中，正确的是() A是碳源的物质不可能同时是氮源 B凡碳题都提供能量 C除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氯源也能提供能量 5养殖池中存在的有毒物质，主要是氨及亚硝酸，这两种物质可被硝化细菌吸收利用。在 “养殖池底泥中硝化细菌的分离与计数”实验中，说法正确的是() A需要配制添加一定浓度氨盐的牛肉音蛋白陈培养基以筛选硝化细南 B,应对采集底泥使用的工具进行灭菌，全部接种过程均需在酒精灯火焰旁进行 C可以采用平板划线法进行接种，还需与未接种的空白培 同时培养 D.应将接种后的培养基放在光照培养箱中培养，原因是硝化细菌为生产者 6如表所示为某微生物培养基的配方。下列说法中不正确的是( HPO.KCIMgSO.7H 0.5 0.5 g 定 1万单位 mL A.此培养基属于固体培养基，其中的碳源是(CHO) B配制培养基时，溶化后分装前必须要进行的是灭南 C接种时应在酒结打火焰附近操作 D.若用孩培养基选择培养纤维素分解蘭应除去青霉素加入纤维素粉 7.下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的示意图，有关叙述错误的是
3.下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图,据图分析不正确的 是( ) A.获得图甲效果的接种方法是稀释涂布平板法 B.获得图乙效果的接种方法是平板划线法 C.若在纯化土壤细菌时菌液浓度过高,培养基上的菌落可能会连成一片 D.在接种前要对培养基进行消毒处理 4.下列有关微生物营养物质的叙述中,正确的是( ) A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 5.养殖池中存在的有毒物质,主要是氨及亚硝酸,这两种物质可被硝化细菌吸收利用。在 “养殖池底泥中硝化细菌的分离与计数”实验中,说法正确的是( ) A.需要配制添加一定浓度氨盐的牛肉膏蛋白胨培养基,以筛选硝化细菌 B.应对采集底泥使用的工具进行灭菌,全部接种过程均需在酒精灯火焰旁进行 C.可以采用平板划线法进行接种,还需与未接种的空白培养基同时培养 D.应将接种后的培养基放在光照培养箱中培养,原因是硝化细菌为生产者 6.如表所示为某微生物培养基的配方。下列说法中不正确的是( ) 成 分 NaNO3K2HPO4 KCl MgSO4·7H2O 含 量 3 g 1 g 0.5 g 0.5 g 成 分 FeSO4 (CH2O) H2O青霉素 含 量 0.01 g 30 g 定 容 至 1 000 mL 0.1 万单位 A.此培养基属于固体培养基,其中的碳源是(CH2O) B.配制培养基时,溶化后分装前必须要进行的是灭菌 C.接种时应在酒精灯火焰附近操作 D.若用该培养基选择培养纤维素分解菌,应除去青霉素,加入纤维素粉 7.下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的示意图,有关叙述错误的是 ( )
学公@-凸 ①色②套韩禁养牙衰艦防 A在配制步骤②、③的培养基时，应先调pH值后高压蒸汽灭菌 B步磨③钟化分解尿素细黄的原理是将聚生的细黄分散可以获得单细胞黄茨 C.步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉音蛋白胨培养基中加入尿素 D.步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力 ■口参考答案 自主预习 1.(1)微生物基质(2)培养分离(3)固体半固体选择鉴别 2.(1)碳源氮源(2)pH 二、1纯净防止杂菌污染消毒灭菌 2.温和表面一部分 3强列所有葬孢孢子 4日常生活 1O0℃煮沸5-6min巴氏消毒法不耐高温的液体生物活体、水源等 如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等接种室、接种箱或超净工作台紫外线照射30m 接种工具、试管口或瓶口直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧玻璃器皿、金属用具用 干热灭菌箱湿热灭菌培养基、培养皿用高压蒸汽灭菌锅 三、1.(1)单一个体纯培养物纯培养(2)①培养基②灭菌④分离 2.()分离分散单个菌落子细胞群体(2)平板划线法稀释涂布平板法纯培养 (3)a②100kPa 121 ③50℃倒置 b,接种环单菌落 c.28℃2448h 四、1.(1)一个活菌菌落数(2)30-3003平均值(3)一少 2.(1)细菌计数板或血细胞计数板(2)活南数与死南数多 课堂探究 、氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。 二、还能有效避免操作者被微生物感染 三、1，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶感觉温度下降到刚刚不烫手即可。 2.平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既 可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 3.将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12-24h.观察是否有菌落存在以确定是否被污 染或灭菌是否彻店 4操作前的第 一步灼烧是杀死接种环上原有的微生物：每次划线前灼烧的目的是杀死 次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数 目逐渐减少，直至得到单个细胞。在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环，是为了杀死接种环 上残留的菌种避免细菌污染环境和感染操作者。 核心素养专练 1-5 ABDDB 67 AC 第2课时 微生物的选择培养和计数
A.在配制步骤②、③的培养基时,应先调 pH 值后高压蒸汽灭菌 B.步骤③纯化分解尿素细菌的原理是将聚集的细菌分散,可以获得单细胞菌落 C.步骤③采用涂布平板法接种,并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素 D.步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种,比较细菌分解尿素的能力 参考答案 自主预习 一、1.(1)微生物 基质 (2)培养 分离 (3)固体 半固体 选择 鉴别 2.(1)碳源 氮源 (2)pH 二、1.纯净 防止杂菌污染 消毒 灭菌 2.温和 表面 一部分 3.强烈 所有 芽孢 孢子 4.日常生活 100 ℃煮沸 5~6 min 巴氏消毒法 不耐高温的液体 生物活体、水源等 如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等 接种室、接种箱或超净工作台 紫外线照射 30 min 接种工具、试管口或瓶口 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 玻璃器皿、金属用具 用 干热灭菌箱 湿热灭菌 培养基、培养皿 用高压蒸汽灭菌锅 三、1.(1)单一个体 纯培养物 纯培养 (2)①培养基 ②灭菌 ④分离 2.(1)分离 分散 单个菌落 子细胞群体 (2)平板划线法 稀释涂布平板法 纯培养 物 (3)a.②100 kPa 121 ℃ ③50 ℃ 倒置 b.接种环 单菌落 c.28 ℃ 24~48 h 四、1.(1)一个活菌 菌落数 (2)30~300 3 平均值 (3)一 少 2.(1)细菌计数板或血细胞计数板 (2)活菌数与死菌数 多 课堂探究 一、氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。 二、还能有效避免操作者被微生物感染。 三、1.可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉温度下降到刚刚不烫手即可。 2.平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既 可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。 3.将所倒平板放入 37 ℃的恒温箱中培养 12~24 h,观察是否有菌落存在以确定是否被污 染或灭菌是否彻底。 4.操作前的第一步灼烧是杀死接种环上原有的微生物;每次划线前灼烧的目的是杀死上 次划线时残留菌种,使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端,从而使每次划线时菌种数 目逐渐减少,直至得到单个细胞。在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环,是为了杀死接种环 上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。 核心素养专练 1—5 ABDDB 6—7 AC 第 2 课时 微生物的选择培养和计数
学案设计 ■■■■学习目标 1.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。 2,概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。 ■■■■自主预习 一、选择培养基 1实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 193年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出」 进而从这种菌中 提取出 的 。这种酶目前己被广泛用于 扩增 (PCR) 高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件 下不能生存。 2实验室中微生物的箭洗 人为根批 目的菌生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其 他微生物生长 在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长 的培养基，称为 3总结 ①加入青霉素的培养基→分离酵母菌、莓菌等真菌 ②不加氮源的无氮培养基一分离固氮菌 ③不加含碳有机物的 无碳培养基一分离自养型微生物 ④加高浓度食盐 +金黄色萄萄球菌 ⑤金黄色葡萄球菌→能消除石油污染的微生物 二、微生物的选择培养 分离土壤中分解尿素的细菌的原理是什么？ 原理通过对+样讲行充分 再终 涂布到制备好的选择培养基上，即可 得到能分解尿素的细菌的 稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列 稀释然后将不同稀释度的菌液分别涂布 到 的 ,进行培养。 1稀释涂布平板法的操作过程 ①铲取士样将样品转入纸袋中（取土样用的小铁铲和成土样的纸袋在使用前把 ②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液 加入盛有9m 的试管中，依 稀释 。③取0.1mL菌液，滴加到 4将 _浸在盛有酒精的烧杯中。⑤将涂布器放在火焰上 待酒精燃尽、涂布 器冷却后，再进行涂布。⑥用涂布器将 均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培 养皿使涂布均匀。 2.菌种培养 待涂布的菌液被培养基吸收后，将 放入30-37℃的恒温培养箱中培养12 3.菌种观察 在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的_
学案设计 学习目标 1.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。 2.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。 自主预习 一、选择培养基 1.实例:寻找耐高温的 DNA 聚合酶 1973 年,科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出 ,进而从这种菌中 提取出 的 。这种酶目前已被广泛用于 扩增 DNA 片段的 (PCR)。 筛选原因:水生栖热菌能在 高温条件下生存,而绝大多数微生物在此条件 下不能生存。 2.实验室中微生物的筛选 人为提供 目的菌生长的条件(包括营养、温度、pH 等),同时抑制或阻止其 他微生物生长。 在微生物学中,将允许 种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长 的培养基,称为 。 3.总结 ①加入青霉素的培养基→分离酵母菌、霉菌等真菌; ②不加氮源的无氮培养基→分离固氮菌; ③不加含碳有机物的无碳培养基→分离自养型微生物; ④加高浓度食盐→金黄色葡萄球菌; ⑤金黄色葡萄球菌→能消除石油污染的微生物。 二、微生物的选择培养 分离土壤中分解尿素的细菌的原理是什么? 原理:通过对土样进行充分 ,再将 涂布到制备好的选择培养基上,即可 得到能分解尿素的细菌的 。 稀释涂布平板法:是将菌液进行一系列 稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布 到 的 ,进行培养。 1.稀释涂布平板法的操作过程 ①铲取土样,将样品装入纸袋中(取土样用的小铁铲和盛土样的纸袋在使用前都 要 )。②将 10 g 土样加入盛有 90 mL 无菌水的锥形瓶中,充分摇匀。取 1 mL 上清液 加入盛有 9 mL 的试管中,依次 稀释。③取 0.1 mL 菌液,滴加到 。 ④将 浸在盛有酒精的烧杯中。⑤将涂布器放在火焰上 ,待酒精燃尽、涂布 器冷却后,再进行涂布。⑥用涂布器将 均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培 养皿,使涂布均匀。 2.菌种培养 待涂布的菌液被培养基吸收后,将 ,放入 30~37 ℃的恒温培养箱中培养 1~2 d。 3.菌种观察 在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的
三、微生物的数量测定 1.计数方法 ()稀释涂布平板法统计结果一般用 而不是用 来表示 般统计的菌落数比活菌的实际数目 因为当两个或多个细胞连在一起时 平板上观察到的只是 计算公式：每毫升样品中的菌落数=(C÷门×M,其中C代表某一稀释度下平板上生长 ,V代表涂布平板时所用的 mL)M代 (2)显微镜直接计数法：是一种常用的 的测定微生物数量的方法。 统计的结果一般是 和 的总和。 (3)两种计数方法的比较 方法微镜直接计数法 稀释涂布平板法 生要用显微镜、细菌计数板 或血细胞计数板 计数依 培养基上 数 优点计数方便、操作简单 计数的是 点 操作较复杂 不能区分 且有一定误若 每毫升原液含菌落数=400x1000x每小格平均 每毫升原液含菌落数（平均菌落数÷所用涂布 式 南落数×稀释倍数 液体积)×稀释倍数 2.探究实践 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)土壤取 细菌适宜在 接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3~8cm的 土壤层。因此，取样时一般要铲去 (2)制备培养基 培养基作为」 氨源的 培养基做实验组，用来判断」 是否具有选择作用 (3)样品的稀程 在酒精灯火焰旁称取10g土壤，放入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，振荡使土壤与水充分 混合，将细菌分散，制成10倍土壤稀释液。用一支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注 入盛有9mL无菌水的试管中，吹吸三次，充分混匀，制成10倍的土壤稀释液。依次类推，制成 103、10 、10倍的土壤稀释液 (4)培养与观察 将平板倒置于 _的温度下培养1~2d,每隔24h统计一次菌落数目。 (⑤)南落计数 当南落数目稳定时洗取菌落数在 的平板进行计数，同一稀释度下至少计 数3个平板，求出 并根据所对应的稀释度计算出样品」 ■■■■课堂探究 一、1，如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来培养基的 配方该如何设计？
三、微生物的数量测定 1.计数方法 (1)稀释涂布平板法:统计结果一般用 而不是用 来表示。 一般统计的菌落数比活菌的实际数目 ,因为当两个或多个细胞连在一起时, 平板上观察到的只是 。 计算公式:每毫升样品中的菌落数=(C÷V)×M,其中 C 代表某一稀释度下平板上生长 的 ,V 代表涂布平板时所用的 (mL),M 代 表 。 (2)显微镜直接计数法:是一种常用的、 的测定微生物数量的方法。 统计的结果一般是 和 的总和。 (3)两种计数方法的比较 方法 显微镜直接计数法 稀释涂布平板法 主要用 具 显微镜、细菌计数板 或血细胞计数板 计数依 据 培养基上 数 优点 计数方便、操作简单 计数的是 缺点 不能区分 操作较复杂 且有一定误差 计算公 式 每毫升原液含菌落数=400×1 000×每小格平均 菌落数×稀释倍数 每毫升原液含菌落数=(平均菌落数÷所用涂布 液体积)×稀释倍数 2.探究实践——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)土壤取样 细菌适宜在 接近中性的潮湿土壤中生长,绝大多数分布在距地表3~8 cm的 土壤层。因此,取样时一般要铲去 。 (2)制备培养基 用 培养基作为 ,用以 为 氮源的 培养基做实验组,用来判断 是否具有选择作用。 (3)样品的稀释 在酒精灯火焰旁称取10 g土壤,放入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中,振荡使土壤与水充分 混合,将细菌分散,制成 101 倍土壤稀释液。用一支 1 mL 无菌吸管从中吸取 1 mL 土壤悬液注 入盛有 9 mL 无菌水的试管中,吹吸三次,充分混匀,制成 102 倍的土壤稀释液。依次类推,制成 103、104、 、 、107 倍的土壤稀释液。 (4)培养与观察 将平板倒置于 的温度下培养 1~2 d,每隔 24 h 统计一次菌落数目。 (5)菌落计数 当菌落数目稳定时,选取菌落数在 的平板进行计数,同一稀释度下至少计 数 3 个平板,求出 ,并根据所对应的稀释度计算出样品中 。 课堂探究 一、1.如果让你配制一种培养基,将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来,培养基的 配方该如何设计?
2该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 二、1根据选择培养基的原理如何筛选出耐酸菌 2.分离细菌常用的接种方法有哪些？ ■核心素养专练 1含氨苄西林的LB培养基在基因工程中有很重要的应用。该培养基能杀死一切不抗氨 苄西林的细菌，只有对氨苄西林具有抗性的细茵才能正常生长繁殖。由其作用可知该培养基 是一种) A固体培养基B合成培养基 C天然培养基D.选择培养基 2若要通过稀释涂布平板法分离纯化土壤中的微生物，其正确操作步骤是( ①士壤取样②称取1g土壤加入盛有99mL无菌水的锥形瓶中，制备1×10？倍稀释的士 壤稀释液③吸取0.1mL土壤稀释液进行平板涂布④依次将土壤稀释液稀释为1×103、 1×10、1×105、1×10、 1x10?倍稀释的溶液 A.①②③ B.①③②④ C.①②④③ D.①④②③ 3.下列关于分离培养某种微生物的实验的叙述，正确的是( A倒平板时为防止培养基溅到皿盖上，应打开培养皿将皿盖放到一边 B.接种时为防止杂菌污染，接种前将涂布器在酒精中浸泡灭菌 C.若菌液浓度过高无法得到单 菌落，则需要稀释后 再进行涂布 D接种后，将涂布器灼烧灭菌后，立即放入盛有酒精的烧杯中 4.用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时() ①可以用相同的培养基②都需要使用接种针进行接种③都需要在火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌 40 B.③O D.② 5.下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是( A微生物培养基中加入牛肉音和蛋白胨可以同时提供碳源和氮源 B测定土瑰样品中的活菌数目常用平板别线法 格差基不一定都使田高压荒汽灭菌 D.以尿素作为哈 一氮源的培 养 可以分离得到能分解尿素的细菌 6.用稀释涂布平板法测定微生物数量时，统计到的菌落数与实际活菌数的关系是() A菌落数等于或大于实际活菌数 B菌落数等于或小于实际活菌数
2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点? 二、1.根据选择培养基的原理,如何筛选出耐酸菌? 2.分离细菌常用的接种方法有哪些? 核心素养专练 1.含氨苄西林的 LB 培养基在基因工程中有很重要的应用。该培养基能杀死一切不抗氨 苄西林的细菌,只有对氨苄西林具有抗性的细菌才能正常生长繁殖。由其作用可知该培养基 是一种( ) A.固体培养基 B.合成培养基 C.天然培养基 D.选择培养基 2.若要通过稀释涂布平板法分离纯化土壤中的微生物,其正确操作步骤是( ) ①土壤取样 ②称取1 g土壤加入盛有99 mL无菌水的锥形瓶中,制备1×102 倍稀释的土 壤稀释液 ③吸取 0.1 mL 土壤稀释液进行平板涂布 ④依次将土壤稀释液稀释为 1×103、 1×104、1×105、1×106、1×107 倍稀释的溶液 A.①②③④ B.①③②④ C.①②④③ D.①④②③ 3.下列关于分离培养某种微生物的实验的叙述,正确的是( ) A.倒平板时为防止培养基溅到皿盖上,应打开培养皿将皿盖放到一边 B.接种时为防止杂菌污染,接种前将涂布器在酒精中浸泡灭菌 C.若菌液浓度过高无法得到单菌落,则需要稀释后再进行涂布 D.接种后,将涂布器灼烧灭菌后,立即放入盛有酒精的烧杯中 4.用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时( ) ①可以用相同的培养基 ②都需要使用接种针进行接种 ③都需要在火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌 A.①② B.③④ C.①③ D.②④ 5.下列关于微生物分离和培养的叙述,错误的是( ) A.微生物培养基中加入牛肉膏和蛋白胨可以同时提供碳源和氮源 B.测定土壤样品中的活菌数目,常用平板划线法 C.培养基不一定都使用高压蒸汽灭菌 D.以尿素作为唯一氮源的培养基可以分离得到能分解尿素的细菌 6.用稀释涂布平板法测定微生物数量时,统计到的菌落数与实际活菌数的关系是( ) A.菌落数等于或大于实际活菌数 B.菌落数等于或小于实际活菌数
C.菌落数大于或小于实际活菌数 D.菌落数等于实际活菌数 7.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目时，在某稀释度下某同学做了若干个平板 并统计每个平板的菌落数，最接近样品中活菌数真实值的是( A.菌落数最多的平相 B南落数最少的平板 C菌落数话中的平板 D.若干个平板菌落数的平均信 8在样品 稀释和平板涂布步骤中，下列不需要的是( ) A酒精 B.培养皿 C显微镜 D.无菌水 9.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是() AKH-PO.NaHPO. MgSO47HO、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B.KHPO4、NaHPC 4、 MgSO+7H 、葡萄糖 、琼脂、水 C.KHzPO4、NaHPO:、MgSO4-7HO、尿素、琼脂、水 D.KPO4、Na:HPO.、MgSO47HO、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水 10.用来判断选择培养基是否起到了选择作用的对照是(） A未接种的洗择培养基 B未接种的牛肉音蛋白胨培养基 C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D.接种了的选择培养基 11某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌的数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。 下列操作错误的是( A利用平板划线法对细菌进行计数 B用以石油为唯 碳源的培养基筛选 C.采用稀释涂布平板法分离菌种 D.称取和稀释土壤样品时应在酒精灯火焰旁 12.为验证“手机屏幕比马桶按钮单位面积上的细菌多“的真假，某科学小组利用微生物培 养技术进行实验，过程及结果如下。下列叙述错误的是( 性纸实 手机屏马桶按细 10mL悬液 周定面积用无菌棉取样 手机屏帮马桶按红 A该实验采用稀释涂布平板法接和 B.该实验不需要设置对照组 C.该实验使用的培养基应含有水、碳源、氮源和无机盐 D两个结果不同，可能是因为取样环境不同 13(多选)为了降解废水中的苯酚，研究人员从士壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细 菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，其中①为土壤样品。下列相关叙述错误的是(
C.菌落数大于或小于实际活菌数 D.菌落数等于实际活菌数 7.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目时,在某稀释度下某同学做了若干个平板 并统计每个平板的菌落数,最接近样品中活菌数真实值的是( ) A.菌落数最多的平板 B.菌落数最少的平板 C.菌落数适中的平板 D.若干个平板菌落数的平均值 8.在样品稀释和平板涂布步骤中,下列不需要的是( ) A.酒精灯 B.培养皿 C.显微镜 D.无菌水 9.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( ) A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水 C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水 D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水 10.用来判断选择培养基是否起到了选择作用的对照是( ) A.未接种的选择培养基 B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 C.接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D.接种了的选择培养基 11.某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌的数量,并从中筛选出能分解石油的细菌。 下列操作错误的是( ) A.利用平板划线法对细菌进行计数 B.用以石油为唯一碳源的培养基筛选 C.采用稀释涂布平板法分离菌种 D.称取和稀释土壤样品时应在酒精灯火焰旁 12.为验证“手机屏幕比马桶按钮单位面积上的细菌多”的真假,某科学小组利用微生物培 养技术进行实验,过程及结果如下。下列叙述错误的是( ) A.该实验采用稀释涂布平板法接种 B.该实验不需要设置对照组 C.该实验使用的培养基应含有水、碳源、氮源和无机盐 D.两个结果不同,可能是因为取样环境不同 13.(多选)为了降解废水中的苯酚,研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细 菌菌株,筛选的主要步骤如下图所示,其中①为土壤样品。下列相关叙述错误的是( )