相差、暗室野和荧光显 微镜的基本使用方法 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment
5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 4 相差、暗室野和荧光显 微镜的基本使用方法
+实验目的 1、了解光学显微镜的基本成像原理 2、掌握相差显微镜的原理和基本使用方法 3、了解暗视野显微镜的成像原理和使用方 法 4、学习荧光显微镜的成像原理和基本操作 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment
5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 5 实验目的 1、了解光学显微镜的基本成像原理 2、掌握相差显微镜的原理和基本使用方法 3、了解暗视野显微镜的成像原理和使用方 法 4、学习荧光显微镜的成像原理和基本操作
背景知识 microtubules ar envelope Nucleus uclear pore centriole 显微镜的级别划分 vesicle smooth Mitochondrion Microtubule Kinesin Amino acid 1A 1nm 10nm 100nm ur 10um 0.1mm Atomic Molecular Sub-cellular Cellular 电子显微镜 超分辨率显微锦传统的光学显微镜 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 6 www.3dchem.com;wikipediaorg/wiki/kinesin;cvcweb.icesutexas.edu;Fotinetal.,Nature2004;hrsbstaff.ednet.ns.ca;www.ebi.ac.uk
背景知识 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 6 显微镜的级别划分 Atomic Molecular Sub-cellular Cellular www.3dchem.com; wikipedia.org/wiki/Kinesin; cvcweb.ices.utexas.edu; Fotin et al., Nature 2004; hrsbstaff.ednet.ns.ca; www.ebi.ac.uk 1Å 1nm 10nm 100nm 1µm 10µm 0.1mm 1Å 1nm 10nm 100nm 1µm 10µm 0.1mm 1Å 1nm 10nm 100nm 1m 10m 0.1mm Amino Acid Microtubule Mitochondrion Kinesin 电子显微镜 超分辨率显微镜 传统的光学显微镜
口相差显微镜 Phase Contrast Light Pathways 时问 Condense ↑叛帽 时问 初始光束 出射波 干涉光 n≥n(n.m:屈折率) 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 77
5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 7 相差显微镜 7
」暗视野显微镜 dark field microscope 根据丁达尔效应原理设计的一种在 黑色背景条件下观察被检物体的显 Objective lens 微镜。 ◆聚光镜中央有挡光片,照明光线不 直接进入物镜,只允许被标本反射 Condenser 和衍射的光线进入物镜,因而视野 背景是黑的,物体边缘是亮的。 Dark-field stop ◆可观察4~200nm的微粒子,分辨率 比普通显微镜高50倍。 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment
5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 8 暗视野显微镜 dark field microscope 根据丁达尔效应原理设计的一种在 黑色背景条件下观察被检物体的显 微镜。 聚光镜中央有挡光片，照明光线不 直接进入物镜，只允许被标本反射 和衍射的光线进入物镜，因而视野 背景是黑的，物体边缘是亮的。 可观察 4~200nm的微粒子，分辨率 比普通显微镜高50倍
荧光显微镜 Fluorescence microscope 特点 暗背景、强反差 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment
5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 9 荧光显微镜 Fluorescence microscope 特点： 暗背景、强反差
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实验材料 洋葱 酵母细胞 刚毛藻 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment
实验材料 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 11 洋葱 酵母细胞 刚毛藻
实验内容 1、取新鲜洋葱鳞状叶内表皮约1cm2或更小,放在干净的载玻片上,加 小滴水,将盖玻片倾斜盖上,并注意不出现气泡,即制成水封片。 2、取一块黑纸,把它剪成暗视野显微镜用的遮光板,并放入普通光学 显微镜的聚光器下的光阑上,制成暗视野显微镜。(须反复调整遮光 板的尺寸以得到最佳效果)。 3、把制成的水封片放在暗视野显微镜下用10倍物镜观察,可以看到在 明亮的细胞壁与半透明的细胞核之间有很多极小而明亮的“质点”或 颗粒,仔细观察,可以看出这些正作有向的运动(速度很慢),水封 片中多加些水会促进这种运动。 4、学习相差显微镜,荧光显微镜和倒置显微镜的使用方法和有关操作 技术。 5、取酵母悬液制作临时裝片,比较普通光学显微镜和相差显微镜下不 同的观察效果 6、制作刚毛藻临时装片,光学显微镜和荧光显微镜下观察 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 12
实验内容 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 12 1、取新鲜洋葱鳞状叶内表皮约1cm2 或更小，放在干净的载玻片上，加 一小滴水，将盖玻片倾斜盖上，并注意不出现气泡，即制成水封片。 2、取一块黑纸，把它剪成暗视野显微镜用的遮光板，并放入普通光学 显微镜的聚光器下的光阑上，制成暗视野显微镜。（须反复调整遮光 板的尺寸以得到最佳效果）。 3、把制成的水封片放在暗视野显微镜下用10倍物镜观察，可以看到在 明亮的细胞壁与半透明的细胞核之间有很多极小而明亮的“质点”或 颗粒，仔细观察，可以看出这些正作有向的运动（速度很慢），水封 片中多加些水会促进这种运动。 4、学习相差显微镜，荧光显微镜和倒置显微镜的使用方法和有关操作 技术。 5、取酵母悬液制作临时装片，比较普通光学显微镜和相差显微镜下不 同的观察效果 6、制作刚毛藻临时装片，光学显微镜和荧光显微镜下观察
忘讨论 DIC 相差 暗视野 酵母 洋葱表皮 HeLa细胞 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment
讨论 5/03/2019 细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 13