第五节酶的免疫化学测定 二十世纪70年代以来,随着免疫学技术 的发展,酶的定量分析技术中出现了许多利 用酶蛋白的抗原性,通过抗原抗体反应直接 测定酶的免疫化学测定法。与经典的测定酶 活性方法比较,这些方法不仅灵敏度高,而 且能测定一些以前不易测定或测定条件不易 掌握的酶
第五节 酶的免疫化学测定 二十世纪70年代以来，随着免疫学技术 的发展，酶的定量分析技术中出现了许多利 用酶蛋白的抗原性，通过抗原抗体反应直接 测定酶的免疫化学测定法。与经典的测定酶 活性方法比较，这些方法不仅灵敏度高，而 且能测定一些以前不易测定或测定条件不易 掌握的酶
(_)测定原理 放射免疫测定(R|A分为直接法与间接法。 直接法是将放射性核素标记的酶分子与相应 抗体作用产生沉淀,然后将沉淀分离并进行定量 测定。 间接法是将样品中无放射性的酶蛋自与放射 性标记的标准酶共同对有限量的抗体进行竞争, 根据其竞争程度来定量样品中的酶蛋白量。以间 接法为最常用
(一)测定原理 放射免疫测定(RIA)分为直接法与间接法。 直接法是将放射性核素标记的酶分子与相应 抗体作用产生沉淀，然后将沉淀分离并进行定量 测定。 间接法是将样品中无放射性的酶蛋白与放射 性标记的标准酶共同对有限量的抗体进行竞争， 根据其竞争程度来定量样品中的酶蛋白量。以间 接法为最常用
另外还有免疫抑制法、化学发光免疫测定 (CLIA)、酶免疫测定(EIA)、荧光酶免疫测定(FEIA) 等。 报告方式有两类: 类是酶活性浓度单位,如免疫抑制法测定 k-mB酶活性(actiyity),结果常以U/L报告; 另一类是用质量浓度单位,如用免疫学方法测 定CK-MB酶质量(mass)(即蛋白量),结果常直接用 ng/ml或6μg/L报告
另外还有免疫抑制法、化学发光免疫测定 (CLIA)、酶免疫测定(EIA)、荧光酶免疫测定(FEIA) 等。 报告方式有两类： 一类是用酶活性浓度单位，如免疫抑制法测定 CK-MB酶活性(actiyity)，结果常以U／L报告； 另一类是用质量浓度单位，如用免疫学方法测 定CK-MB酶质量(mass)(即蛋白量)，结果常直接用 ng／ml或6μg／L报告
(二)免疫化学测定的优缺点 血清酶活性变化分为酶蛋白质量和酶活 性同步变化及酶蛋白质量未变而酶活性变化 两种情况。酶在一些病理条件下或受操作条 件等影响而失活,一些激活剂或抑制剂对酶 活性也有影响,因而酶活性常不能正确反映 酶的情况,出现酶活性与酶蛋白绝对量不 致,有时甚至出现两者变化完全相反的情况
(二)免疫化学测定的优缺点 血清酶活性变化分为酶蛋白质量和酶活 性同步变化及酶蛋白质量未变而酶活性变化 两种情况。酶在一些病理条件下或受操作条 件等影响而失活，一些激活剂或抑制剂对酶 活性也有影响，因而酶活性常不能正确反映 酶的情况，出现酶活性与酶蛋白绝对量不一 致，有时甚至出现两者变化完全相反的情况
与传统的酶活性测定法相比,免疫化 学测定法的优点主要有: ①灵敏度高,能测定其他方法不易测 出的少量或痕量酶; ②特异性高,不受体液中其他物质, 如酶抑制剂、激活剂等的影响 ③能用于一些不表现酶活性的酶蛋白 如各种酶原或去辅基酶蛋白,或因遗传变 异而导致合成无活性的酶蛋白的酶测定; ④特别适用于同工酶的测定
与传统的酶活性测定法相比，免疫化 学测定法的优点主要有： ①灵敏度高，能测定其他方法不易测 出的少量或痕量酶； ②特异性高，不受体液中其他物质， 如酶抑制剂、激活剂等的影响； ③能用于一些不表现酶活性的酶蛋白， 如各种酶原或去辅基酶蛋白，或因遗传变 异而导致合成无活性的酶蛋白的酶测定； ④特别适用于同工酶的测定
酶的免疫化学测定也有其局限性。主要有 ①要制备足够量的提纯酶作为抗原和具有免 疫化学性质的抗血清常常是很困难的,而且 工作量很大; ②测定步骤多,操作繁琐; ③测定成本高
酶的免疫化学测定也有其局限性。主要有： ①要制备足够量的提纯酶作为抗原和具有免 疫化学性质的抗血清常常是很困难的，而且 工作量很大； ②测定步骤多，操作繁琐； ③测定成本高
第六节同工酶及其亚型测定
第六节 同工酶及其亚型测定
、概念 同工酶是同一种属中由不同基因或等位基因所 编码的多肽链单体、纯聚体或杂化体,具有相同的 催化功能,但其分子组成、空间构象、理化性质、 生物学性质以及器官分布和细胞内定位不同的一类 酶。 亚型某些酶或同工酶从组织进入体液后,可进 步变化为数个不同类型即所谓“亚型,也称为同 工型(isoform)”。即指基因在编码过程中由于翻译 后修饰的差异所形成的多种形式的一类酶。亚型往 往在基因编码产物从细胞内释入血浆时因肽酶作用 降解而形成
一、概 念 同工酶 是同一种属中由不同基因或等位基因所 编码的多肽链单体、纯聚体或杂化体，具有相同的 催化功能，但其分子组成、空间构象、理化性质、 生物学性质以及器官分布和细胞内定位不同的一类 酶。 亚型 某些酶或同工酶从组织进入体液后，可进 一步变化为数个不同类型即所谓“亚型，也称为同 工型(isoform)”。即指基因在编码过程中由于翻译 后修饰的差异所形成的多种形式的一类酶。亚型往 往在基因编码产物从细胞内释入血浆时因肽酶作用 降解而形成
表6-8人体中几种重要的同工酶 酶同工酶种类 相关疾病 CKCK-BB,Ck-m,k-mm(Ck,CK2,K)心梗、肌病、颅脑损伤、肿瘤 LD LD, LD2, LD3, LD4, LDs 心梗、肌病、肺梗死、肝病、肿瘤 ALP肝型,小肠型,骨型,胎盘型,肾型 肝胆疾病、骨病、妊娠、结肠炎、肿瘤 ACP红细胞型前列腺型,溶酶体型 前列腺癌、血液病、骨肿瘤 y-GT y-GT1, y-GT2, Y-GT3, y-GT4 肝癌、梗阻性黄疸 amyp-amyp,2,3),-amys2,S,S4)急、慢性胰腺炎、腮腺炎 ALT ALTs, ALTm 心梗、肝病 AST ASTs, ASTm 心梗、肝病 GP GP-BB, GP-LL, GP-MM(, GP2, GP3) GST 、、 心梗、脑损伤、肾病、肌病 T和2(s-a),s(st-),ST4和肺癌、肝炎 GSTS(GST-) ALD ALD-A, ALD-B, ALD-C 肝癌、肝炎、神经细胞癌 NAG NAG-A, NAG-B, NAG-I 肝病、肾病
三、分析方法 临床同工酶的分析大致可分为两步,即 首先精确地分离出某酶的各同工酶组分,然 后测定酶的总活性和各同工酶或亚型组分的 活性
三、分析方法 临床同工酶的分析大致可分为两步，即 首先精确地分离出某酶的各同工酶组分，然 后测定酶的总活性和各同工酶或亚型组分的 活性