第和章 高数液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography, HPLC
High Performance Liquid Chromatography, HPLC 第11章 高效液相色谱法
11.1 高致液相色谱佐橇述 高效液相色谱与其他仪器相比特点： (1)高压 (2)高速 (3)高效 (4)高灵敏度
高效液相色谱与其他仪器相比特点： （1）高压 （2）高速 （3）高效 （4）高灵敏度 11.1 高效液相色谱法概述
1机1高数液相色谱法橇述 经典的液相色谱法与现代液相色谱法的比较 1.流动相的输送形式不同。 2.分析周期不同。 3.柱效不同。 液相色谱与气相色谱的比较 相同点：液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、 分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论： 塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致。 根据保留值定性、根据峰高或峰面积定量
11.1 高效液相色谱法概述 经典的液相色谱法与现代液相色谱法的比较 1.流动相的输送形式不同。 2.分析周期不同。 3.柱效不同。 液相色谱与气相色谱的比较 相同点：液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、 分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论： 塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致。 根据保留值定性、根据峰高或峰面积定量
不同点： (1)应用范围不同 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不 分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、 热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分 离、分析较为困难。 液相色谱则测不受样品挥发度和热稳定性的限 制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥 发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物 的分离分析
不同点： （1）应用范围不同 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不 分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、 热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分 离、分析较为困难。 液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限 制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥 发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物 的分离分析
(2)液相色谱能完成难度较高的分离工作 气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与 分配平衡过程。 液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分 子，为提高选择性增加了一个因素。 液相色谱固定相类型多，作为分析时选择余地 大； 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一 般有利于色谱分离条件的选择。 (3)液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容 易，而且回收是定量的，适合于大量制备。但液 相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价 格昂贵。在实际应用中，这两种色谱技术是互相 补充的
（2）液相色谱能完成难度较高的分离工作 气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与 分配平衡过程。 液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分 子，为提高选择性增加了一个因素。 液相色谱固定相类型多，作为分析时选择余地 大； 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一 般有利于色谱分离条件的选择。 （3）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容 易，而且回收是定量的，适合于大量制备。但液 相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价 格昂贵。在实际应用中，这两种色谱技术是互相 补充的
11.3 高效液相色谱法的主要类型 及其分离原理 按分离机理不同分为：液液分配色谱、液固 色谱、离子交换色谱、离子对色谱、离子 对色谱、离子色谱法和空间排阻色谱
11.3 高效液相色谱法的主要类型 及其分离原理 按分离机理不同分为：液液分配色谱、液固 色谱、离子交换色谱、离子对色谱、离子 对色谱、离子色谱法和空间排阻色谱
分离系统由两相一固定相和流动相组成 液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键 合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、 离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶 剂。 根据各组分在固定相及流动相中的吸附能 力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小 的差异进行分离
分离系统由两相—固定相和流动相组成 液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键 合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、 离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶 剂。 根据各组分在固定相及流动相中的吸附能 力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小 的差异进行分离
液液分配色清法 在液液色谱中，一个液相作为流动相，而另一 个液相则涂渍在很细惰性载体或硅胶上作为固定 相。流动相与固定相应互不相溶，两者之间应有 一明显的分界面。分配系数(K)或分配比() 小的组分，保留值小，先流出柱
液液分配色谱法 在液液色谱中，一个液相作为流动相，而另一 个液相则涂渍在很细惰性载体或硅胶上作为固定 相。流动相与固定相应互不相溶，两者之间应有 一明显的分界面。分配系数（K）或分配比（k） 小的组分，保留值小，先流出柱
正相液液色谱法Normal phase Chromatography):流 动相极性小于固定相极性，又称为正相洗脱或正 相冲洗。 极性小的先流出色谱柱，极性大的后流出色谱柱， 适合于分离极性化合物。 反相液液色谱法(Reversed phase Chromatography): 流动相极性大于固定相极性，又称为反相洗脱或 反相冲洗。 极性小的后流出色谱柱，极性大的先流出色谱柱， 适合于分离芳烃、稠环芳烃及烷烃等化合物
正相液液色谱法(Normal phase Chromatography)：流 动相极性小于固定相极性，又称为正相洗脱或正 相冲洗。 极性小的先流出色谱柱，极性大的后流出色谱柱， 适合于分离极性化合物。 反相液液色谱法(Reversed phase Chromatography)： 流动相极性大于固定相极性，又称为反相洗脱或 反相冲洗。 极性小的后流出色谱柱，极性大的先流出色谱柱， 适合于分离芳烃、稠环芳烃及烷烃等化合物
正相色谱固定相：硅胶、三氧化铝以及载有醇 基、氨基和氰基的固定相。流动相选用非极性 流动相，如：正已烷或环已烷 正相色谱依据溶剂极性差别达到分离目的。 反相色谱固定相：非极性载体。固定相以硅胶 为基质，将不同疏水基团通过化学键合到硅胶 表面的游离羟基上（如键合C18烷基的非极性 固定相，为C18柱) 大多数有机化合物都存在疏水基团，因此，反 相色谱较为普遍
正相色谱固定相：硅胶、三氧化铝以及载有醇 基、氨基和氰基的固定相。流动相选用非极性 流动相，如：正已烷或环已烷 正相色谱依据溶剂极性差别达到分离目的。 反相色谱固定相：非极性载体。固定相以硅胶 为基质，将不同疏水基团通过化学键合到硅胶 表面的游离羟基上（如键合C18烷基的非极性 固定相，为C18柱） 大多数有机化合物都存在疏水基团，因此，反 相色谱较为普遍