第二章研究细胞的方法 第一节显微镜技术
第二章 研究细胞的方法 第一节 显微镜技术
显微镜与分辨率 1.明视距离 物体在人眼视网膜上成像的大小和 物体与眼睛的距离有关。物体离眼睛 的距离越近,枧网膜上的物像就越大 但眼睛的曲光度就随之增大,眼部肌 肉就越发疲劳。经测试在物体离人眼 25cm时,看物体又清楚,眼肌也不疲 劳,因此把人眼正常工作距离定为 25cm,称之为明视距离
一、显微镜与分辨率 1.明视距离： 物体在人眼视网膜上成像的大小和 物体与眼睛的距离有关。物体离眼睛 的距离越近，视网膜上的物像就越大， 但眼睛的曲光度就随之增大，眼部肌 肉就越发疲劳。经测试在物体离人眼 25cm时，看物体又清楚，眼肌也不疲 劳，因此把人眼正常工作距离定为 25cm，称之为明视距离
a1 Normal eye (6)Myopic (ye ()Hyperopic eye Defect of vision
2、分辨力和光镜的分辨极限 分辨力( Resolution):又叫分辨本 领,是指将邻近两点清晰区分辨认的 能力。 microscop cone of ill n and therefore on both he cond the objective lens. It is he formula s a co where 0= half the angular width of the cone of ondenser lens from a typical point in the specimen ses a con since the maximum width is 180 rays each point of the ns the refractive index of the medium specimen usually air or oil) separating the LIGHT specimen from the objective and ondenser lenses 2. the wavelength of light used (for white light, a figure of 0.53 um is commonly assumed) NUMERICAL APERTURE: n sin e in the aperture, the greater the resolution and the quation above is called the numerical aperture brighter the image (brightness is important in of the lens (NA) and is a function of its fluorescence microscopy ). However this advan collecting ability For dry lenses this cannot be tago is obtained at the exponse of vory shor more than 1, but for oil-immersion lenses it can working distances and a very small depth of field be as high as 1. 4. The higher the numerical
2、分辨力和光镜的分辨极限 分辨力（Resolution）：又叫分辨本 领，是指将邻近两点清晰区分辨认的 能力
分辨极限( Limit of resolution) 对可见光来说,能清楚分辨出相邻两点 之间的最小间隔为02um R=0.61/n.sin0 =0.61×0.5um/1.5×1 0.2um
分辨极限（Limit of resolution） 对可见光来说，能清楚分辨出相邻两点 之间的最小间隔为0.2m。 R ＝ 0.61 / n .sin ＝ 0.61×0.5 m / 1.5×1 ＝ 0.2 m
数值孔径NA(9 ZEISS tn-NEOFLU 0X/10c 440480 ZEIS FLUAR 0×/050 数值孔径的大小代表了光镜的会聚 能力。数值孔径越高,光镜的分辨 力越大,所呈影像的亮度越强
数值孔径N.A（ n .sin ） 数值孔径的大小代表了光镜的会聚 能力。数值孔径越高，光镜的分辨 力越大，所呈影像的亮度越强
二、光学显微镜技术 DMRB光学显微镜 Leic DMA
二、光学显微镜技术
日镜 1、普通光学显微镜技术 显微镜结构: ①机械部分:镜座、镜柱、镜臂 镜筒、调焦装置 载物台(物镜转换器 物镜 ②照明部分:反光镜、聚光镜 光③光学部分:目镜、物镜 放大倍数: 目镜的放大倍数×物镜的放大倍数
1、普通光学显微镜技术 显微镜结构： ① 机械部分：镜座、镜柱、镜臂 镜筒、调焦装置、 载物台（物镜转换器） ② 照明部分：反光镜、聚光镜 ③ 光学部分：目镜、物镜 放大倍数： 目镜的放大倍数×物镜的放大倍数
2、生物样品制备的过程 ①固定:可使生物大分子交联,蛋白质 成分凝固,防止细胞自溶和破坏而产 生人工假象。 常用固定剂:甲醛、戊二醛、乙醇 ②包埋:为了便于切片,防止样品移位 常用包埋剂:石蜡
2、生物样品制备的过程 ① 固定：可使生物大分子交联，蛋白质 成分凝固，防止细胞自溶和破坏而产 生人工假象。 常用固定剂：甲醛、戊二醛、乙醇 ② 包埋：为了便于切片，防止样品移位 常用包埋剂：石蜡
③切片:由于生物样品太厚,不能直接 用光镜观察,需切成1~10μm的薄片 movement of microtome arm specimen embedded in wax or resi ribbon of ribbon of sections on and mounted under condenser a cover slip 2222 EXAMINATION WITH LIGHT MICROSCOPE
③ 切片：由于生物样品太厚，不能直接 用光镜观察，需切成1～10μm的薄片