讲稿课程名称：药物分析课程编号：H17035授课学期：第六学期11级药学、制剂授课班级：霍文任课教师：河北联合大学药学院1
1 讲 稿 课程名称： 药物分析 课程编号： H17035 授课学期： 第六学期 授课班级： 11 级药学、制剂 任课教师： 霍文 河北联合大学 药学院
首页课程名称：《药物分析》第_8周，第15讲次摘要第七章老苯乙胺类药物的分析Phenethylamine授课题目（章、节）第一节典型药物的结构和性质第二节鉴别试验第三节特殊杂质检查第四节含量测定第五节体内药物分析【目的要求】通过本讲课程的学习，熟悉苯乙胺类药的结构和性质，掌握苯乙胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。熟悉本类药物杂质的结构检查方法与限度。了解体内样品分析与监测。【重点】苯乙胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。【难点】苯乙胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。内容【本讲课程的引入】拟肾上腺素类药物，分子结构中大都具有苯乙胺基本结构。临床上应用广泛，本章主要介绍苯乙胺类拟肾上腺素药的性质及分析。板书“苯乙胺类Phenethylamine药物的分析”。写出章节的题目，参照讲稿列出标题：根据需要在每个标题下适当写出需解释的内容或强调重点、难点等。【本讲课程的内容】（一）苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质1.基本结构与典型药物R-CH-CH—NH-ROH R3由于R1，R2，R3取代基的不同构成本类药物，药典收载的本类药物有20种，书中列举出14各品种的典型药物。例如：肾上腺素、去甲肾上腺素2.主要化学性质（1）弱碱性：烃氨基侧链，其氮为仲胺氮，故显弱碱性。（2）酚羟基特性：易氧化，可与金属离子络合呈色。邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色：在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深：在碱性溶液中更易变色。（3）光学活性：具有旋光活性。（4）苯环取代基特性：根据苯环取代基的电负性，最大吸收波长以254nm为中心2
2 首页 课程名称：《药物分析》 第 8 周，第 15 讲次 摘 要 授课题目（章、节） 第七章 苯乙胺类药物的分析 Phenethylamine 第一节 典型药物的结构和性质 第二节 鉴别试验 第三节 特殊杂质检查 第四节 含量测定 第五节体内药物分析 【目的要求】通过本讲课程的学习，熟悉苯乙胺类药的结构和性质，掌握苯乙胺类药物鉴别和 含量测定的基本原理与方法。熟悉本类药物杂质的结构检查方法与限度。了解体内样品分析与 监测。 【重 点】苯乙胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。 【难 点】苯乙胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。 内 容 【本讲课程的引入】拟肾上腺素类药物，分子结构中大都具有苯乙胺基本结构 。临床上应用广泛，本章主要介绍苯乙胺类拟肾上腺素药的性质及分析。 板书“苯乙胺类 Phenethylamine 药物的分析”。写出章节的题目，参照讲稿列出标 题；根据需要在每个标题下适当写出需解释的内容或强调重点、难点等。 【本讲课程的内容】 （一）苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质 1．基本结构与典型药物 R CH CH NH R OH R 1 2 3 由于 R1, R2, R3 取代基的不同构成本类药物，药典收载的本类药物有 20 种， 书中列举出 14 各品种的典型药物。 例如：肾上腺素、去甲肾上腺素 2．主要化学性质 （1）弱碱性：烃氨基侧链，其氮为仲胺氮，故显弱碱性。 （2）酚羟基特性：易氧化，可与金属离子络合呈色。邻苯二酚（或苯酚）结 构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化， 色泽变深；在碱性溶液 中更易变色。 （3）光学活性：具有旋光活性。 （4）苯环取代基特性：根据苯环取代基的电负性，最大吸收波长以 254nm 为中心
红移或者蓝移；紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。（二）鉴别试验1.与三氯化铁反应2.与甲醛-硫酸反应3．氧化反应酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色。4.紫外特征吸收与红外吸收光谱5.与亚硝基铁氰化钠反应（Rmini试验）为脂肪族伯胺的专属性反应。6.双缩脲反应为盐酸麻黄碱专属性的鉴别反应。盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱，芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲特征反应。例：Chp2010，鉴别盐酸麻黄碱方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸铜试液2滴与20%氢氧化钠液1ml，即显蓝紫色，加乙醚1ml振摇、放置，乙醚层显紫红色，水层变为蓝色。盐酸去氧肾上腺素的鉴别：乙醚层不显色，可与盐酸麻黄碱区别（三）特殊杂质的检查1.酮体检查所有的典型药物中都要检查酮体。生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。例如：肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素和盐酸甲氧明等2.光学纯度检查大多数苯乙胺类拟肾上腺素药物分子结构中存在手性碳原子通过比旋度测定控制药物的质量。手性药物光学纯度检查的最佳方法是实现对映体分离分析，目前常用的方法为色谱法和电泳法。例：重酒石酸去甲肾上腺素的光学纯度检查：称取重酒石酸去甲肾上腺素消旋体约50mg溶于5ml蒸馏水中，滴加氨水调pH为7~8：以乙酸乙酯萃取3次，所得乙酸乙酯层用蒸馏水洗涤2次，再用1g硫酸钠脱水，过滤除去硫酸钠，得到溶液置于50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得手性分离系统适用性溶液。同法制备（R)-重酒石酸去甲肾上腺素供试品溶液。取20μl注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定。用ChiralpakAD-H色谱柱，；以正已烷-乙醇-乙醇胺（800：200:2)为流动相；检测波长为280nm；流速0.8ml/min。对映体的分离因子为7.2。通3
3 红移或者蓝移 ；紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。 （二）鉴别试验 1．与三氯化铁反应 2．与甲醛-硫酸反应 3．氧化反应 酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色。 4．紫外特征吸收与红外吸收光谱 5．与亚硝基铁氰化钠反应（Rmini 试验） 为脂肪族伯胺的专属性反应。 6．双缩脲反应 为盐酸麻黄碱专属性的鉴别反应。盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄 碱，芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲特征反应。 例：Chp2010，鉴别盐酸麻黄碱 方法：取本品 1%水溶液 1ml，加硫酸铜试液 2 滴与 20%氢氧化钠液 1ml， 即显蓝紫色，加乙醚 1ml 振摇、放置，乙醚层显紫红色，水层变为蓝色。 盐酸去氧肾上腺素的鉴别：乙醚层不显色，可与盐酸麻黄碱区别 (三)特殊杂质的检查 1． 酮体检查 所有的典型药物中都要检查酮体。 生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。 例如：肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素 和盐酸甲氧明等 2. 光学纯度检查 大多数苯乙胺类拟肾上腺素药物分子结构中存在手性碳原子， 通过比旋度测定控制药物的质量。手性药物光学纯度检查的最佳方法是实现对映体 分离分析，目前常用的方法为色谱法和电泳法。 例：重酒石酸去甲肾上腺素的光学纯度检查：称取重酒石酸去甲肾上腺素消旋体 约 50mg 溶于 5ml 蒸馏水中，滴加氨水调 pH 为 78；以乙酸乙酯萃取 3 次，所得乙 酸乙酯层用蒸馏水洗涤 2 次，再用 1g 硫酸钠脱水，过滤除去硫酸钠，得到溶液置 于 50ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得手性分离系统适用性溶液。同 法制备(R)-重酒石酸去甲肾上腺素供试品溶液。取 20 l 注入液相色谱仪，照高效 液相色谱法测定。用 Chiralpak AD-H 色谱柱，；以正己烷-乙醇-乙醇胺(800∶200 ∶ 2)为流动相；检测波长为 280 nm；流速 0.8 ml/min。对映体的分离因子为 7.2。通
过手性高效液相色谱法分离，按峰面积归一化法，可以测定重酒石酸去甲肾上腺素的光学纯度3.有关物质的检查盐酸去氧肾上腺素和硫酸沙丁醇等药物列此项检查。TLC法检查有关物质例：盐酸去氧肾上腺素检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加甲醇稀释成每1ml中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇一氯仿一浓氨溶液（80:5:15)为展开剂，展开后，晾干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查有关双胍取本品1.00g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法（附录VA）试验，精密吸取上述溶液0.2ml，分别点于两张色谱滤纸条（7.5cm×50cm）上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条，样点直径均为0.5～1cm：照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以醋酸乙酯一乙醇一水（6:3:1）为展开剂，展开至前沿距下端约7cm处，取出，晾干，用显色剂（取10%铁氰化钾溶液1ml，加10%亚硝基铁氰化钠溶液与10%氢氧化钠溶液各1ml，摇匀，放置15min，加水10ml与丙酮12ml，混匀）喷其中一张点样纸条（有关双胍显红色带，Rf值约为0.1），参照此色谱带，在另一张点样及空白纸条上，剪取其相应部分并向外延伸1cm，并分剪成碎条，精密吸取甲醇各20ml分别进行萃取后，照分光光度法（附录IVA)，在232nm的波长处测定吸收度，不得过0.48。（四）含量测定√原料：非水溶液滴定法、溴量法制剂：比色法、提取容量法、紫外分光光度法、高效液相色谱法一、非水溶液滴定法非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行的酸碱滴定测定法。主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐以及有机酸碱金属盐类药物的含量。也用于测定某些有机弱酸的含量。非水滴定法表7-7中给出10种原料药的非水溶液测定法。①惰性溶剂：氯仿，甲苯，丙酮4
4 过手性高效液相色谱法分离，按峰面积归一化法，可以测定重酒石酸去甲肾上腺素 的光学纯度 3. 有关物质的检查 盐酸去氧肾上腺素和硫酸沙丁醇等药物列此项检查。 TLC 法检查有关物质 例：盐酸去氧肾上腺素 检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每 1ml 含 20mg 的溶液，作为供试品溶 液；精密量取上述溶液适量，加甲醇稀释成每 1ml 中含 0.10mg 的溶液，作为对照 溶液。吸取上述两种溶液各 10μl，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以异丙醇－氯 仿－浓氨溶液(80:5:15)为展开剂，展开后，晾干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。 供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。 盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查 有关双胍 取本品 1.00g ，置 10ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照 纸色谱法（附录Ⅴ A）试验，精密吸取上述溶液 0.2ml ，分别点于两张色谱滤纸条 (7.5cm ×50cm) 上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条，样点直径均为 0.5 ～ 1cm ；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以醋酸乙酯－乙醇－水(6:3:1) 为展开剂，展开至前沿距下端约 7cm 处，取出，晾干，用显色剂（取 10％铁氰化 钾溶液 1ml ，加 10％ 亚硝基铁氰化钠溶液与 10％氢氧化钠溶液各 1ml ，摇匀， 放置 15min，加水 10ml 与丙酮 12ml，混匀）喷其中一张点样纸条（有关双胍显红 色带，Rf 值约为 0.1 ），参照此色谱带，在另一张点样及空白纸条上，剪取其相应 部分并向外延伸 1cm ，并分剪成碎条，精 密吸取甲醇各 20ml 分别进行萃取后，照 分光光度法（附录Ⅳ A），在 232nm 的波长处测定吸收度，不得过 0.48。 （四）含量测定 ✓ 原料：非水溶液滴定法、溴量法 ✓ 制剂：比色法、提取容量法、紫外分光光度法、高效液相色谱法 一、非水溶液滴定法 非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行的酸碱滴定测定法。主要用来测定有机碱 及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐以及有机酸碱金属盐类药物的含量。也用于测定某 些有机弱酸的含量。 非水滴定法 表 7-7 中给出 10 种原料药的非水溶液测定法。 ① 惰性溶剂：氯仿，甲苯，丙酮
②酸性溶剂：冰醋酸③碱性溶剂：DMF④两性溶剂：甲醇·非水溶液滴定法一弱碱性以冰醋酸为溶剂醋酸汞消除氢卤酸的干扰指示剂（终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并将滴定结果用空白试验校正）若碱性较弱则加醋酐使突跃明显BHA'+HCIO4→BHCIO4'+HA1.基本原理：式中BH+·A-表示游离碱类盐；HA表示被置换出的弱酸。由于被置换出的HA的酸性强弱不同，因而对滴定反应的影响也不同。当HA酸性较强时，反应不能定量完成，根据化学反应平衡的原理，必须采取措施，除去或降低滴定反应产生的HA的酸性，使反应顺利地完成。因此，必须根据不同情况采用相应的测定条件。2，一般方法取经适当方法干燥的供试品适量（其量一般以消耗标准液约8ml为度），加冰醋酸10ml~30ml（必要时可温热使溶解，放冷）。若供试品为氢卤酸盐，应再加5%醋酸汞的冰醋酸溶液3ml~5ml，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定至终点，并将滴定结果用空白试验校正。3.问题讨论（1）适用范围本法主要用于Kb氢溴酸>硫酸>盐酸>硝酸若在滴定过程中被置换出的HA，其酸性较强，则反应将不能进行到底，如测定杂环类药物氢卤酸盐时，由于被置换出的氢卤酸的酸性相当强，影响滴定终点，不能直接滴定，需要进行处理。一般处理方法是加入定量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其生成在醋酸中难解离的卤化汞，以消除氢卤酸对滴定的干扰与不良影响：2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX25
5 ② 酸性溶剂：冰醋酸 ③ 碱性溶剂：DMF ④ 两性溶剂：甲醇 • 非水溶液滴定法－弱碱性 以冰醋酸为溶剂 醋酸汞消除氢卤酸的干扰 指示剂（终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并将滴定结果用空白试验校正 ） 若碱性较弱则加醋酐使突跃明显 1.基本原理： BH+ ·A - + HClO4 → BH+ ·ClO4 - + HA 式中 BH+·A-表示游离碱类盐；HA 表示被置换出的弱酸。由于被置换出的 HA 的酸 性强弱不同，因而对滴定反应的影响也不同。当 HA 酸性较强时，反应不能定量完 成，根据化学反应平衡的原理，必须采取措施，除去或降低滴定反应产生的 HA 的 酸性，使反应顺利地完成。因此，必须根据不同情况采用相应的测定条件。 2．一般方法 取经适当方法干燥的供试品适量（其量一般以消耗标准液约 8ml 为度），加冰 醋酸 10ml~30ml（必要时可温热使溶解，放冷）。若供试品为氢卤酸盐，应再加 5% 醋酸汞的冰醋酸溶液 3ml~5ml，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至终点，并将滴 定结果用空白试验校正。 3．问题讨论 （1）适用范围 本法主要用于 Kb＜10-8 的有机碱盐，如有机酸盐、氢卤酸盐、磷 酸盐、硫酸盐、硝酸盐及有机酸碱金属盐类的含量测定。 （2）酸根的影响 本类药物盐中被置换出的无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下 列排序递减：高氯酸＞氢溴酸＞硫酸＞盐酸＞硝酸 若在滴定过程中被置换出的 HA，其酸性较强，则反应将不能进行到底，如 测定杂环类药物氢卤酸盐时，由于被置换出的氢卤酸的酸性相当强，影响滴定 终点，不能直接滴定，需要进行处理。一般处理方法是加入定量的醋酸汞冰醋 酸溶液，使其生成在醋酸中难解离的卤化汞，以消除氢卤酸对滴定的干扰与不 良影响：2B·HX + Hg(Ac)2 → 2B·HAc + HgX2
当醋酸汞加入量不足时，可影响滴定终点，而使测定结果偏低，但过量的醋酸汞(1~3倍）并不影响测定结果。（3）滴定剂的稳定性本类药物的非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有挥发性，且膨胀系数较大，因此温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。若滴定样品时与标定高氯酸溶液时的温差超过10℃时，则应重新标定。（4）终点指示方法非水溶液滴定法的终点确定，常用电位法和指示剂法。中国药典收载的本类药物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点。二、溴量法利用分子结构中的酚羟基的邻、对位活泼氢能与过量溴发生定量取代反应，再用碘量法测定剩余剩余的溴。盐酸去氧肾上腺素测定方法：取本品约0.1g，精密称定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L)50ml，再加盐酸5ml，立即密塞，放置15分钟并时时振摇，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mo1/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml漠滴定液（0.1mo1/L）相当于3.395mg的C9H13N02·HC1。三、亚硝酸钠法盐酸克仑特罗分子结构中含有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐，可用永停滴定法测定方法：取本品约0.25g，精密称定，置100ml烧杯中，加盐酸溶液（1-2)25ml使溶解，再加水25ml，照永停滴定法，用亚硝酸钠滴定液(0.05mo1/L)滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液（0.05mo1/L）相当于15.68mg的C12H18C12N20-HC）四、紫外分光光度法&比色法利用分子结构中的酚羟基与铁离子络合呈色，测定盐酸异丙肾上腺素和盐酸多巴胺注射液；利用重氮化-偶合反应呈色，测定盐酸克伦特罗栓剂。盐酸甲氧明注射液含量测定：精密量取本品适量（约相当于盐酸甲氧明100mg），置250ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在290nm的波长处测定吸光度，按C11H17N03-HC1的吸收系数（）为137计算，即得6
6 当醋酸汞加入量不足时,可影响滴定终点,而使测定结果偏低,但过量的醋酸汞 (1～3 倍)并不影响测定结果。 （3）滴定剂的稳定性 本类药物的非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有挥发 性，且膨胀系数较大，因此温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。若滴定样品时与 标定高氯酸溶液时的温差超过 10℃时，则应重新标定。 （4）终点指示方法 非水溶液滴定法的终点确定，常用电位法和指示剂法。中国 药典收载的本类药物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点。 二、溴量法 利用分子结构中的酚羟基的邻、对位活泼氢能与过量溴发生定 量取代反应，再用碘量法测定剩余剩余的溴。 盐酸去氧肾上腺素测定方法：取本品约 0.1g，精密称定，置碘瓶中，加水 20ml 使 溶解，精密加溴 滴定液(0.1mol/L)50ml，再加盐酸 5ml,立即密塞，放置 15 分钟并 时时振摇，注意微开瓶 塞，加碘化钾试液 10ml ，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸 钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至 近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失， 并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 溴滴定液(0.1mol/L)相当于 3.395mg 的 C9H13NO2·HCl。 三、亚硝酸钠法 盐酸克仑特罗分子结构中含有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠定量发生 重氮化反应，生成重氮盐，可用永停滴定法 测定方法： 取本品约 0.25g，精密称定，置 100ml 烧杯中，加盐酸溶液(1→2)25ml 使 溶解，再加水 25ml，照永停滴定法，用亚硝酸钠滴定液(0.05 mol/L)滴定。每 1ml 亚硝酸钠滴定液(0.05 mol/L)相当于 15.68mg 的 C12H18Cl2N2OHCl 四、紫外分光光度法&比色法 利用分子结构中的酚羟基与铁离子络合呈色，测定盐酸异丙肾上腺素和盐酸多巴胺 注射液；利用重氮化-偶合反应呈色，测定盐酸克伦特罗栓剂。 盐酸甲氧明注射液含量测定：精密量取本品适量(约相当于盐酸甲氧明 100mg)，置 250ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取 10ml，置 100ml 量瓶中，加水稀 释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在 290nm 的波长处测定吸光度，按 C11H17NO3HCl 的吸收系数( )为 137 计算，即得
五、高效液相色谱法高效分离，高灵敏度和高选择性一可用于制剂常规分析，临床药物监测和体内药物动力学研究。例1：重酒石酸去甲肾上腺素注射液分析色谱条件：色谱柱：ODS流动相：0.14%庚烷基磺酸钠溶液一甲醇（65:35），用磷酸调pH至3.0土0.1，流速：1.Oml/min，检测波长：280nm测定方法：精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1→25）稀释至刻度，摇匀，取2u1注入液相色谱仪，记录色谱图：另取重酒石酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋酸溶液（1-→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。其他方法：提取酸碱滴定法苯法主要用于硫酸苯丙胺及其制剂的含量测定。荧光分光光度法利用本类药物分子结构中的邻苯二酚，可被弱氧化剂氧化而产生荧光。因此可采用此法测定其含量。体内药物分析(Bioanalysis)动物组织中的盐酸克伦特罗残留的测定一瘦肉精1.提取称取动物肝脏组织样品5g土0.05g于带盖的聚四氟乙烯离心管中，加入乙酸乙酯15ml，再加入10.0%碳酸钠溶液3ml，然后以10000r/min以上的速度匀质60秒，盖上盖子以5000r/min的速度离心2分钟，吸取上层有机溶剂于离心管中，在残渣中再加入乙酸乙酯10ml，在涡旋混合器上混合1分钟，离心后吸取有机溶剂并合并提取液。在收集的有机溶剂中加入0.10mo1/L的盐酸溶液5ml，涡旋混合30秒，以5000r/min的速度离心2分钟，吸取下层水溶液，同样步骤重复萃取一次，合并两次萃取液，用2.5mo1/L氢氧化钠溶液调节pH至5.2。2.净化SCX小柱依次用甲醇5ml、水5ml和30mmol/L盐酸5ml活化，然后将上述萃取液上样至固相萃取小柱中依次用水5ml和甲醇5ml淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，抽干SCX小柱，再用4%氨化甲醇溶液5ml洗脱，收集洗脱液3.测定(1)衍生化：在50℃水浴中用氮气吹干上述洗脱液，加入甲苯100μl和BSTFA（双三甲基硅烷三氟乙酰胺)100μl，试管加盖后于涡旋混合器上振荡30秒，在80℃的烘箱中加热衍生1小时（盖住盖子）：同时吸取标准工作液0.5ml加入到4%氨化甲醇溶液4.5ml中，用氮气吹干后同样品操作，待衍生结束后加入甲苯0.3ml转入进样小瓶中，进行气相色谱-质谱（GC/MS)分析。(2)GC/MS测定参数：色谱柱HP-5MS5%苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.25mm（内径），0.25μum（膜厚）：进样口温度220℃；进样方式不分流：进样体积1μl：柱温70℃（保持0.6分钟），以25℃/min升温至200℃（保持6分钟），以25℃/min升温至280℃7
7 五、高效液相色谱法 高效分离，高灵敏度和高选择性－可用于制剂常规分析，临床药物监测和体内药物 动力学研究。 例 1：重酒石酸去甲肾上腺素注射液分析 色谱条件：色谱柱：ODS 流动相：0.14%庚烷基磺酸钠溶液－甲醇(65:35)，用磷酸调 pH 至 3.0±0.1，流速： 1.0ml/min，检测波长：280nm 测定方法：精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素 4mg），置 25ml 量 瓶中， 加醋酸溶液（1→25）稀释至刻度，摇匀，取 2μl 注入液相色谱仪，记录 色谱图；另取重酒石 酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋酸溶液（1→25） 制成每 1ml 中含 0.16mg 的溶液， 同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。 其他方法： 提取酸碱滴定法 苯法主要用于硫酸苯丙胺及其制剂的含量测定。 荧光分光光度法 利用本类药物分子结构中的邻苯二酚，可被弱氧化剂氧化而 产生荧光。因此可采用此法测定其含量。 体内药物分析 (Bioanalysis) 动物组织中的盐酸克伦特罗残留的测定—瘦肉精 1.提取 称取动物肝脏组织样品 5g0.05g 于带盖的聚四氟乙烯离心管中，加入乙 酸乙酯 15ml，再加入 10.0%碳酸钠溶液 3ml，然后以 10 000r/min 以上的速度匀质 60 秒，盖上盖子以 5000r/min 的速度离心 2 分钟，吸取上层有机溶剂于离心管中， 在残渣中再加入乙酸乙酯 10ml，在涡旋混合器上混合 1 分钟，离心后吸取有机溶剂 并合并提取液。在收集的有机溶剂中加入 0.10mol/L 的盐酸溶液 5ml，涡旋混合 30 秒，以 5000r/min 的速度离心 2 分钟，吸取下层水溶液，同样步骤重复萃取一次， 合并两次萃取液，用 2.5mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH 至 5.2。 2.净化 SCX 小柱依次用甲醇 5ml、水 5ml 和 30mmol/L 盐酸 5ml 活化，然后将上述 萃取液上样至固相萃取小柱中依次用水 5ml 和甲醇 5ml 淋洗柱子，在溶剂流过固相 萃取柱后，抽干 SCX 小柱，再用 4%氨化甲醇溶液 5ml 洗脱，收集洗脱液。 3.测定 (1)衍生化：在 50℃水浴中用氮气吹干上述洗脱液，加入甲苯 100l 和 BSTFA(双 三甲基硅烷三氟乙酰胺)100l，试管加盖后于涡旋混合器上振荡 30 秒，在 80℃的 烘箱中加热衍生 1 小时(盖住盖子)；同时吸取标准工作液 0.5ml 加入到 4%氨化甲醇 溶液 4.5ml 中，用氮气吹干后同样品操作，待衍生结束后加入甲苯 0.3ml 转入进样 小瓶中，进行气相色谱-质谱(GC/MS)分析。 (2)GC/MS 测定参数：色谱柱 HP-5MS 5%苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.25mm(内径)， 0.25m(膜厚)；进样口温度 220℃；进样方式不分流；进样体积 1l；柱温 70℃(保 持 0.6 分钟)，以 25℃/min 升温至 200℃(保持 6 分钟)，以 25℃/min 升温至 280℃
（保持5分钟）：载气氢气：流速0.9ml/min（恒流）；GC/MS传输线温度280℃：溶剂延迟8分钟：EM电压高于调谐电压200V：离子源（EI）温度200℃：四极杆温度160℃；选择离子监测（m/z)86、212、262、277。4.定性定量方法(1)定性：样品峰与标样的保留时间之差不多于2秒，并人工比较选择离子的丰度，其中试样峰的选择离子相对强度（与基峰的比例)不超过标准相应选择离子相对强度平均值的±20%（m/z262)和±50%（m/z212、277)。(2)定量方法：选择试样峰（m/z86)的峰面积进行单点或多点校准定量。当单点校准定量时根据样品液中盐酸克仑特罗含量情况，选择峰面积相近的标准工作溶液进行定量，同时标准工作溶液和样品液中盐酸克仑特罗响应值均应在仪器检测线性范围内。5.分析结果计算试样中盐酸克仑特罗的含量按下式计算：式中，X为试样中克仑特罗残留含量（ug/kg)：A为样液中经衍生化盐酸克仑特罗的峰面积：As为标准工作液中经衍生化盐酸克仑特罗的峰面积：C为标准工作液中盐酸克仑特罗的浓度（ug/L)：V为样品最终定容体积(ml)：m为最终样液所代表的试样量（g）。【本讲课程的小结】今天我们主要讲了苯乙胺类药物的典型结构特点、理化性质和鉴别和含量测定的基本原理与方法。希望同学们重点学习。还讲了本类药物的体内分析方法。【本讲课程的作业】1.肾上腺素常用鉴别方法是A.三氯化铁显色法B.甲醛-硫酸显色法C.色谱法D.红外光谱法2.直接能与FeCl3产生颜色反应的药物有A水杨酸B盐酸普鲁卡因C.异丙基肾上腺素D.阿斯匹林3.能发生双缩循脲反应的药物是A盐酸麻黄碱B.阿司匹林C.对氨基水杨酸钠D.盐酸普鲁卡因4.简述非水滴定法的原理、适用范围以及如何消除氢卤酸的干扰。5.肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是A水杨醛B.间氨基酚C.对氨基酚D.酮体6
8 (保持 5 分钟)；载气氦气；流速 0.9ml/min(恒流)；GC/MS 传输线温度 280℃；溶剂 延迟 8 分钟；EM 电压高于调谐电压 200V；离子源(EI)温度 200℃；四极杆温度 160℃； 选择离子监测(m/z)86、212、262、277。 4.定性定量方法 (1)定性：样品峰与标样的保留时间之差不多于 2 秒，并人工比较选择离子的 丰度，其中试样峰的选择离子相对强度(与基峰的比例)不超过标准相应选择离 子相对强度平均值的20％(m/z 262)和50％(m/z 212、277)。 (2)定量方法：选择试样峰(m/z 86)的峰面积进行单点或多点校准定量。当单 点校准定量时根据样品液中盐酸克仑特罗含量情况，选择峰面积相近的标准工 作溶液进行定量，同时标准工作溶液和样品液中盐酸克仑特罗响应值均应在仪 器检测线性范围内。 5.分析结果计算 试样中盐酸克仑特罗的含量按下式计算： 式中，X 为试样中克仑特罗残留含量(g/kg)；A 为样液中经衍生化盐酸克仑 特罗的峰面积；AS 为标准工作液中经衍生化盐酸克仑特罗的峰面积；CS 为标准 工作液中盐酸克仑特罗的浓度(g/L)；V 为样品最终定容体积(ml)；m 为最终 样液所代表的试样量(g)。 【本讲课程的小结】今天我们主要讲了苯乙胺类药物的典型结构特点、理化 性质和鉴别和含量测定的基本原理与方法。希望同学们重点学习。还讲了本 类药物的体内分析方法。 【本讲课程的作业】1．肾上腺素常用鉴别方法是 A.三氯化铁显色法 B.甲醛-硫酸显色法 C.色谱法 D.红外光谱法 2. 直接能与FeCl3产生颜色反应的药物有 A. 水杨酸 B. 盐酸普鲁卡因 C. 异丙基肾上腺素 D. 阿斯匹林 3. 能发生双缩脲反应的药物是 A. 盐酸麻黄碱 B. 阿司匹林 C. 对氨基水杨酸钠 D. 盐酸普鲁卡因 4.简述非水滴定法的原理、适用范围以及如何消除氢卤酸的干扰。 5．肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是 A.水杨醛 B. 间氨基酚 C. 对氨基酚 D.酮体
课程名称：《药物分析》第_8周，第_16讲次摘要第八章对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的分析授课题目（章、节）第一节典型药物的结构和性质第二节鉴别试验第三节特殊杂质检查第四节含量测定第五节体内药物分析【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。熟悉本类药物杂质的结构，危害，检查方法与限度。了解：影响药物稳定性的主要因素，体内样品与临床监测【重点】对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的鉴别含量测定的基本原理与方法。【难点】对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的鉴别含量测定的基本原理与方法。内容【本讲课程的引入】对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物是临床常用的一类局麻药，能在用药部位可逆性阻断感觉神经冲动发生与传导。板书“对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的分析”。写出章节的题目，参照讲稿列出标题；根据需要在每个标题下适当写出需解释的内容或强调重点、难点等。【本讲课程的内容】（一）对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质1.典型药物的结构本类药物均系苯胺的酰基衍生物，其结构共性是具有芳酰氨基R,HN2.主要化学性质（1）芳伯氨基特性：显重氮化-偶合反应。具有芳伯氨基（除盐酸丁卡因外）故显重氮化-偶合反应；与芳醛缩合成Schiff碱反应；易氧化变色等。（2）水解特性：酯键或酰胺键的水解。（3）弱碱性：脂烃胺侧链叔胺氮原子具有碱性，（二）酰胺类药物的基本结构与主要化学性质1．典型药物的结构（1）水解后芳伯氨基特性结构中具有芳酰氨基，在酸性溶液中也可水解为芳伯氨基化合物，而显芳伯氨基特性反应。9
9 课程名称：《药物分析》 第 8 周，第 16 讲次 摘 要 授课题目（章、节） 第八章 对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的分析 第一节 典型药物的结构和性质 第二节 鉴别试验 第三节 特殊杂质检查 第四节 含量测定 第五节体内药物分析 【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的鉴别和含量测定 的基本原理与方法。熟悉本类药物杂质的结构,危害,检查方法与限度。了解: 影响药物稳定性 的主要因素,体内样品与临床监测 【重 点】对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的鉴别含量测定的基本原理与方法。 【难 点】对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的鉴别含量测定的基本原理与方法。 内 容 【本讲课程的引入】对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物是临床常用的一类局麻药， 能在用药部位可逆性阻断感觉神经冲动发生与传导。 板书“对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类药物的分析”。写出章节的题目，参照讲稿列 出标题；根据需要在每个标题下适当写出需解释的内容或强调重点、难点等。 【本讲课程的内容】 （一）对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质 1．典型药物的结构 本类药物均系苯胺的酰基衍生物，其结构共性是具有芳酰氨基 2．主要化学性质 （1）芳伯氨基特性：显重氮化-偶合反应。具有芳伯氨基(除盐酸丁卡因外)， 故显重氮化-偶合反应；与芳醛缩合成 Schiff 碱反应；易氧化变色等。 （2）水解特性：酯键或酰胺键的水解。 （3）弱碱性：脂烃胺侧链叔胺氮原子具有碱性。 （二）酰胺类药物的基本结构与主要化学性质 1．典型药物的结构 （1）水解后芳伯氨基特性 结构中具有芳酰氨基，在酸性溶液中也可水解为芳伯氨基化合物，而显芳伯氨 基特性反应。 R3 R4 R1 H N R2 O O R1HN OR2
（2）水解产物易酯化（3）酚羟基的特性（4）弱碱性：脂烃胺侧链叔胺氮原子具有碱性。（5）与金属离子发生沉淀反应（三）鉴别试验1.重氮化-偶合反应盐酸普鲁卡因、苯佐卡因可直接发生重氮化偶合反应；对乙酰基酚可水解后发生此反应。分子结构中具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生重氮化反应，生成的重氮盐可与碱性β萘酚偶合生成有色的偶氮染料。盐酸丁卡因分子结构中不具有芳伯氨基，无此反应，但其分子结构中的芳香仲胺在酸性溶液中与亚硝酸钠反应，生成N-亚硝基化合物的乳白色沉淀，可与具有芳伯氨基的同类药物区别。盐酸普鲁卡因ChP(2010)取供试品约50mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。2.与金属离子的反应盐酸利多卡因可与铜、钴、汞离子反应而显色；盐酸普鲁卡因可与三氯化铁反应生成羟酸铁。盐酸利多卡因的鉴别方法取本品0.2g，加水20ml溶解后，取溶液2ml，加硫酸铜试液0.2ml与碳酸钠试液1ml，即显蓝紫色：加三氯甲烷2ml，振摇后放置，三氯甲烷层显黄色。说明：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普鲁卡因和盐酸丁卡因等，在同样条件下不发生此反应。盐酸利多卡因在酸性溶液中与氯化钴试液反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。盐酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞试液煮沸，显黄色：对氨基苯甲酸酯类药物显红色或橙黄色，可与之区别。盐酸普鲁卡因胺的鉴别方法取本品0.1g，加水5ml，加三氯化铁试液与浓过氧化氢溶液各1滴，缓缓加热至沸，溶液显紫红色，随即变为暗棕色至棕黑色。羟酸铁盐反应3.水解产物的反应盐酸普鲁卡因碱水解可生成二乙氨基乙醇蒸汽均有碱性；苯佐卡因水解后生成乙醇可发生典仿反应。对氨基苯甲酸酯类药物分子中有些具有酯键结构，在碱性条件下可水解，利用其水解产物的特性或与某些试剂的反应可进行鉴别。盐酸普鲁卡因ChP（2010)取本品约0.1g，加水2mL溶解后，加10%氢氧化钠溶液1mL，即生成白色沉淀：加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。10
10 （2）水解产物易酯化 （3）酚羟基的特性 （4）弱碱性：脂烃胺侧链叔胺氮原子具有碱性。 （5）与金属离子发生沉淀反应 （三）鉴别试验 1．重氮化-偶合反应 盐酸普鲁卡因、苯佐卡因可直接发生重氮化偶合反应； 对乙酰基酚可水解后发生此反应。分子结构中具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药 物，均可发生重氮化反应，生成的重氮盐可与碱性 β-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。 盐酸丁卡因分子结构中不具有芳伯氨基，无此反应，但其分子结构中的芳香仲胺在 酸性溶液中与亚硝酸钠反应，生成 N-亚硝基化合物的乳白色沉淀，可与具有芳伯氨 基的同类药物区别。 盐酸普鲁卡因 ChP（2010） 取供试品约 50mg，加稀盐酸 1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加 0.1mo1/L 亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性 β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红 色沉淀。 2．与金属离子的反应 盐酸利多卡因可与铜、钴、汞离子反应而显色；盐酸 普鲁卡因可与三氯化铁反应生成羟肟酸铁。盐酸利多卡因的鉴别方法 取本品 0.2g，加水 20ml 溶解后，取溶液 2ml，加硫酸铜试液 0.2ml 与碳酸钠 试液 1ml，即显蓝紫色；加三氯甲烷 2ml，振摇后放置，三氯甲烷层显黄色。 说明：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普鲁卡因和盐酸丁卡因等，在同样条 件下不发生此反应。 盐酸利多卡因在酸性溶液中与氯化钴试液反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。盐 酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞试液煮沸，显黄色；对氨基苯甲酸酯 类药物显红色或橙黄色，可与之区别。 盐酸普鲁卡因胺的鉴别方法 取本品 0.1g，加水 5ml，加三氯化铁试液与浓过 氧化氢溶液各 1 滴，缓缓加热至沸，溶液显紫红色，随即变为暗棕色至棕黑色。羟 肟酸铁盐反应 3．水解产物的反应 盐酸普鲁卡因碱水解可生成二乙氨基乙醇蒸汽均有碱性； 苯佐卡因水解后生成乙醇可发生典仿反应。对氨基苯甲酸酯类药物分子中有些具有 酯键结构，在碱性条件下可水解，利用其水解产物的特性或与某些试剂的反应可进 行鉴别。 盐酸普鲁卡因 ChP（2010） 取本品约 0.1g，加水 2mL 溶解后，加 10％氢氧化钠溶液 1mL，即生成白色沉 淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝 色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀