第三章 分子发光分析法 ◼ 第一节 荧光分析法 ◼ 第二节 磷光分析法 ◼ 第三节 化学发光分析法
第三章 分子发光分析法 ◼ 第一节 荧光分析法 ◼ 第二节 磷光分析法 ◼ 第三节 化学发光分析法
第一节 荧光分析法（Fluorescence） 一 概述 (一)、分子发射光谱与分子能级结构 吸光 无辐射跃迁 系间跨越 单重线态 三重线态 荧光 磷光 E0 E1 E2 振动弛豫 内部转换
第一节 荧光分析法（Fluorescence） 一 概述 (一)、分子发射光谱与分子能级结构 吸光 无辐射跃迁 系间跨越 单重线态 三重线态 荧光 磷光 E0 E1 E2 振动弛豫 内部转换
(二)、分子吸收光谱与分子荧光光谱 吸光 荧光 250 300 350 400 450 蒽乙醇溶液吸收和荧光光谱
(二)、分子吸收光谱与分子荧光光谱 吸光 荧光 250 300 350 400 450 蒽乙醇溶液吸收和荧光光谱
300 400 500 •荧光光谱与吸收光谱镜像对称 •荧光光谱较吸收光谱简单 硫酸奎宁在稀硫酸中的荧光光谱与吸收光谱
300 400 500 •荧光光谱与吸收光谱镜像对称 •荧光光谱较吸收光谱简单 硫酸奎宁在稀硫酸中的荧光光谱与吸收光谱
(三)、荧光量子产率（荧光效率） 发荧光的两个必要条件 • 分子能吸收光子而跃迁至激发态 • 激发态分子能以光的形式释放能量 荧光效率（f）= 发出光子数 吸收光子数 如果一个分子将吸收的光子全部 释放，则其量子产率为100%
(三)、荧光量子产率（荧光效率） 发荧光的两个必要条件 • 分子能吸收光子而跃迁至激发态 • 激发态分子能以光的形式释放能量 荧光效率（f）= 发出光子数 吸收光子数 如果一个分子将吸收的光子全部 释放，则其量子产率为100%
化合物 荧光效率 溶剂 荧光素 0.92 （0.1MNaOH） 曙红 0.19 （ 0.1MNaOH） 罗丹明B 0.97 （乙醇） 蒽 0.31 （己烷） 核黄素 0.26 （水，pH7） 菲 0.10 （乙醇） 萘 0.12 （乙醇） 酚 0.22 （水） 叶绿素 0.32 （苯） 某些化合物的荧光效率
化合物 荧光效率 溶剂 荧光素 0.92 （0.1MNaOH） 曙红 0.19 （ 0.1MNaOH） 罗丹明B 0.97 （乙醇） 蒽 0.31 （己烷） 核黄素 0.26 （水，pH7） 菲 0.10 （乙醇） 萘 0.12 （乙醇） 酚 0.22 （水） 叶绿素 0.32 （苯） 某些化合物的荧光效率
(四)、量子产率与分子结构 荧光通常发生在具有刚性结构和平面结构的 -电子共轭体系分子中，任何有利于提高-电子共轭 度的结构改变，都将提高荧光量子产率，或使荧光 波长向长波长方向移动。 化合物 荧光效率 平均波长 苯 0.07 283 联苯 0.18 316 对联三苯 0.93 342
(四)、量子产率与分子结构 荧光通常发生在具有刚性结构和平面结构的 -电子共轭体系分子中，任何有利于提高-电子共轭 度的结构改变，都将提高荧光量子产率，或使荧光 波长向长波长方向移动。 化合物 荧光效率 平均波长 苯 0.07 283 联苯 0.18 316 对联三苯 0.93 342
化合物 荧光效率 平均波长 苯 0.07 283 萘 0.23 334 蒽 0.36 402 苯 0.07 283 甲苯 0.17 285 乙苯 0.18 286
化合物 荧光效率 平均波长 苯 0.07 283 萘 0.23 334 蒽 0.36 402 苯 0.07 283 甲苯 0.17 285 乙苯 0.18 286
(五)、荧光分析的特点 1、灵敏度高 2、选择性好 3、仪器简单 4、应用范围广
(五)、荧光分析的特点 1、灵敏度高 2、选择性好 3、仪器简单 4、应用范围广
二 荧光定量分析基础 If = f Ia= f ( Io -I ) If : 荧光强度 Io : 所吸收的辐射强度； f ：荧光效率 A o I I I I A − = = 10 lg 0 (一)、荧光强度与浓度
二 荧光定量分析基础 If = f Ia= f ( Io -I ) If : 荧光强度 Io : 所吸收的辐射强度； f ：荧光效率 A o I I I I A − = = 10 lg 0 (一)、荧光强度与浓度