第四节 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography, HPLC 一、概述 气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳 定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用气相色 谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物 活性、热稳定性差的物质。所以，HPLC的应用范围已 经远远超过气相色谱。 通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、 分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类。其实， 有些液相色谱方法并不能简单地归于这四类
第四节 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography, HPLC 一、概述 气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳 定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用气相色 谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物 活性、热稳定性差的物质。所以，HPLC的应用范围已 经远远超过气相色谱。 通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、 分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类。其实， 有些液相色谱方法并不能简单地归于这四类
吸附色谱 吸附能，氢键 异构体分离、族分离，制备 分配色谱 疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制 备 凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离，分子量及其分布的测 定 离子交换色谱 库仑力 无机离子、有机离子分析 手性色谱 立体效应 手性异构体分离，药物纯化 类 型 主要分离机理 主要分析对象或应用领域 亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离，生物和医药 分析
吸附色谱 吸附能，氢键 异构体分离、族分离，制备 分配色谱 疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制 备 凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离，分子量及其分布的测 定 离子交换色谱 库仑力 无机离子、有机离子分析 手性色谱 立体效应 手性异构体分离，药物纯化 类 型 主要分离机理 主要分析对象或应用领域 亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离，生物和医药 分析
二、高效液相色谱仪
二、高效液相色谱仪
检测器 高压输液泵 高压输液泵 输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 数据处理系统
检测器 高压输液泵 高压输液泵 输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 数据处理系统
1、输液系统 (1) 高压输液泵 高压输液泵是 液相色谱仪的关键部 件，其作用是将流动 相以稳定的流速或压 力输送到色谱系统。 输液泵的稳定 性直接关系到分析结 果的重复性和准确性。 高压输液泵 在线脱气装置
1、输液系统 (1) 高压输液泵 高压输液泵是 液相色谱仪的关键部 件，其作用是将流动 相以稳定的流速或压 力输送到色谱系统。 输液泵的稳定 性直接关系到分析结 果的重复性和准确性。 高压输液泵 在线脱气装置
(2)在线脱气装置 在线脱气装置用于脱去流动相中的溶解气体， 流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。 除在线脱气装置外，目前也采用超声脱气、 真空脱气等方式。 脱气不好时有气泡，导致流动相流速不稳 定，造成基线飘溢，噪音增加
(2)在线脱气装置 在线脱气装置用于脱去流动相中的溶解气体， 流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。 除在线脱气装置外，目前也采用超声脱气、 真空脱气等方式。 脱气不好时有气泡，导致流动相流速不稳 定，造成基线飘溢，噪音增加
（3）梯度洗脱装置 通过两个输液泵流速的变化，改变流动相的 洗脱能力，其作用与气相色谱的程序升温类似。 A B A B C C
（3）梯度洗脱装置 通过两个输液泵流速的变化，改变流动相的 洗脱能力，其作用与气相色谱的程序升温类似。 A B A B C C
2、进样系统 通常采用六通伐进样： 色谱柱 色谱柱 泵 泵 1 2 进 样
2、进样系统 通常采用六通伐进样： 色谱柱 色谱柱 泵 泵 1 2 进 样
3、色谱柱 Normal column 5-um、4.6-um Narrow bore column 1-3 um Micro column < 1 um 色谱柱是实现分离的核心部件，要求 柱效高、柱容量大和性能稳定。柱性能与柱 结构、填料特性、填充质量和使用条件有关
3、色谱柱 Normal column 5-um、4.6-um Narrow bore column 1-3 um Micro column < 1 um 色谱柱是实现分离的核心部件，要求 柱效高、柱容量大和性能稳定。柱性能与柱 结构、填料特性、填充质量和使用条件有关
4、检测器 作用—— 用来连续监测经色谱柱分离后的流出 物的组成和含量变化的装置。 目前最常用的检测器主要有： 紫外-可见检测器 荧光检测器 电化学检测器 蒸发光散射检测器 质谱检测器
4、检测器 作用—— 用来连续监测经色谱柱分离后的流出 物的组成和含量变化的装置。 目前最常用的检测器主要有： 紫外-可见检测器 荧光检测器 电化学检测器 蒸发光散射检测器 质谱检测器