第十三章 基因工程与蛋白质工程 一、基因工程的定义及主要内容 二、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴 定 三、克隆基因的表达 四、基因工程的成就和展望 五、蛋白质工程
第十三章 基因工程与蛋白质工程 一、基因工程的定义及主要内容 二、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴 定 三、克隆基因的表达 四、基因工程的成就和展望 五、蛋白质工程
一、基因工程定义及主要内容 基因工程也称基因重组技术、基因克隆或分 子克隆 是指利用DNA重组技术生产或改造生物产品、 创建或改良动植物品种以及开发特殊用途的 微生物等 是生物工程的重要内容之一 返回
一、基因工程定义及主要内容 基因工程也称基因重组技术、基因克隆或分 子克隆 是指利用DNA重组技术生产或改造生物产品、 创建或改良动植物品种以及开发特殊用途的 微生物等 是生物工程的重要内容之一 返回
主要步骤： 1.带有目的基因的DNA片段的获得 2、构建DNA重组分子 3、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定 4、基因的表达 一、基因工程定义及主要内容 返回
主要步骤： 1.带有目的基因的DNA片段的获得 2、构建DNA重组分子 3、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定 4、基因的表达 一、基因工程定义及主要内容 返回
返回 基 因 工 程 基 本 程 序 真核染色体DNA 克隆载体 （质粒） 限制酶切割 限制酶切割并 分离所需片断 重组载体 细菌宿主细 胞的转化 细胞分离 培养增值
返回 基 因 工 程 基 本 程 序 真核染色体DNA 克隆载体 （质粒） 限制酶切割 限制酶切割并 分离所需片断 重组载体 细菌宿主细 胞的转化 细胞分离 培养增值
构建DNA重组分子 工具酶 目的基因的制备 克隆载体 DNA分子的体外重组 返回
构建DNA重组分子 工具酶 目的基因的制备 克隆载体 DNA分子的体外重组 返回
工具酶 限制性内切酶是基因工程中最主要的工具酶 DNA连接酶（DNA ligase）、DNA聚合酶 Ⅰ（DNA polymeraseⅠ）、末端转移酶 （terminal transferase）、逆转录酶 （reverse transcriptase）、核酸酶S1 （nuclease S1）和核酸外切酶Ⅶ （exonucleaseⅦ） 返回
工具酶 限制性内切酶是基因工程中最主要的工具酶 DNA连接酶（DNA ligase）、DNA聚合酶 Ⅰ（DNA polymeraseⅠ）、末端转移酶 （terminal transferase）、逆转录酶 （reverse transcriptase）、核酸酶S1 （nuclease S1）和核酸外切酶Ⅶ （exonucleaseⅦ） 返回
限制性核酸内切酶 由Smith在1970年从流感噬血菌中发现 细菌体内有特异的限制修饰系统，这种修饰 系统是通过特殊的修饰酶在细菌本身DNA的 特异识别序列处进行甲基化修饰，从而与外 源DNA相区别。这样，限制性核酸内切酶就 能去切割破坏外源DNA，而对本身无影响。 目前已从原核生物中分离出400～500多种限 制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶 由Smith在1970年从流感噬血菌中发现 细菌体内有特异的限制修饰系统，这种修饰 系统是通过特殊的修饰酶在细菌本身DNA的 特异识别序列处进行甲基化修饰，从而与外 源DNA相区别。这样，限制性核酸内切酶就 能去切割破坏外源DNA，而对本身无影响。 目前已从原核生物中分离出400～500多种限 制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶 能识别DNA特定核苷酸序列的核酸内切 ➢酶分类:三类. 命名: ➢ 分布：主要来源于原核生物。 ➢ 特点：特异性，即识别特定核苷酸序列， 切割特定切点。 ➢ 结果：产生黏性未端（碱基互补配对）或平 端。 ➢ 举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别 GAATTC序列，并在G和A之间切开
限制性核酸内切酶 能识别DNA特定核苷酸序列的核酸内切 ➢酶分类:三类. 命名: ➢ 分布：主要来源于原核生物。 ➢ 特点：特异性，即识别特定核苷酸序列， 切割特定切点。 ➢ 结果：产生黏性未端（碱基互补配对）或平 端。 ➢ 举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别 GAATTC序列，并在G和A之间切开
限制性核酸内切酶 限制性内切酶可识别4或6个特异核苷酸序列 粘性末端：指限制性内切酶的切割部位不在 识别序列的中心轴，在断段产生一个短的单 股突伸出来的不齐末端。 钝性末端：指限制性内切酶的切割部位在识 别序列的中心轴处，即产生平齐末端。 返回
限制性核酸内切酶 限制性内切酶可识别4或6个特异核苷酸序列 粘性末端：指限制性内切酶的切割部位不在 识别序列的中心轴，在断段产生一个短的单 股突伸出来的不齐末端。 钝性末端：指限制性内切酶的切割部位在识 别序列的中心轴处，即产生平齐末端。 返回
限制性核酸内切酶 同裂酶:来源不同,但有相同的识别序列.或称 异源同工酶. 同切点酶:不仅识别序列相同,而且切点也相同. 同尾酶:酶的识别序列不完全相同,但切出的粘 性末端相同
限制性核酸内切酶 同裂酶:来源不同,但有相同的识别序列.或称 异源同工酶. 同切点酶:不仅识别序列相同,而且切点也相同. 同尾酶:酶的识别序列不完全相同,但切出的粘 性末端相同