第二讲生物材料的采集与制备
冬一)生物材料的采集 。在实验动物功能评价中，需要采集的生物样品主要是血 液和尿液及组织脏器，它是反映受试物的生物学效应和 物质在体内代谢情况的最为重要的途径。 1.采血 。2.采尿 ÷3.骨髓采集： 大动物骨髓采集与人相近，多采取活体穿刺，穿刺部 位一般是胸骨、肋骨、髂骨、胫骨、股骨，这些部位具 有造血功能。 小动物，一般处死后，取胸骨或股骨，用注射器吸取 定量的HanK'S液冲洗出
÷①选取原则：一般选取正常与病变组织交界处，如 果眼看不到明显变化，则各试验组标本部位应均匀 一致。 所选取组织应包括脏器的重要结构或全层，如肾皮 质，髓质和肾盂，选取时切勿挤压，应用手术刀， 少用剪。 ÷②大小：厚约3~5mm,大小为1.5~2cm2 ·③标记：每块标本应用铅笔在纸片上标记好，纱布 包扎，投入定液。 ④固定液：标本选取后应尽早浸入固定液，使组织 处于生前状态。 ·电镜标本取活体，1分钟内须浸入固定液
÷固定液视情况选用： 。a.中性福尔马林液： 40%甲醛100ml,酸性磷酸钠4g、磷酸氢二钠6.5g, 蒸馏水900l。此固定液穿透力强，固定均匀，对于 脑神经组织及某些酶均有良好的保存作用。一般固定 48h. b.Bouin固定液： ·饱和苦咪酸75份，36%甲醛20份，冰醋酸5份，混匀 后使用。特点：细胞收缩小，细胞核着色清晰，固定 时间24~48h。 。C.戊二醛固定液： 。用于固定电镜组织标本。 ÷1液：磷酸氢二钠35.61g,配成1000ml, 。2液：磷酸氢二钠27.61g,配成1000ml, ÷取1液40.5ml,取2液9.5ml,混匀，加2.5%戊二醛10ml,加双 蒸水至100ml
。（仁)生物材料的处理 1。血液标本选择 ①全血：即抗凝血，主要用于Hb、RBC、WBC、DC 测定一些生化指标。 ·②血浆：抗凝血离心分离，除去细胞成分所得。 主要用于凝血、纤维蛋白测定和分析用一些 生化指标。 ·③血清：不加抗凝剂，自然凝固后析出的澄清淡黄色 透明液体。 夏季一般在血凝后30min分离血清。 冬季应置37℃水浴促使血清析出。 ÷血清成分接近于组织液的化学组成，适于测定机体各 种生化指标，测定血清中有关物质含量比全血更能反 映机体情沉
。2.血液标本的区别 。①血浆与血清的区别 。血浆：抗凝采血后立即分离，含有纤维蛋原和前凝血酶 ·血清：血液凝固，血清析出后分离，不含纤维蛋原和前 凝血酶。 相同检验项目：SGPT、SGOT,总胆红素，尿素。Ca、 G、肌酸激酶等。 。不同检验项目：APK、P、N、白蛋白、尿酸、血脂等 (只能用血清) ÷②全血一般用于血细胞分析，不宜作系列化分析。 生化分析一般用血清或血浆
÷3.常用抗凝剂 ①EDTA一Na2：能较好地保存血细胞成分，可得较纯的细 胞悬液。对血细胞形态影响很小，适于血细胞分析。 ÷常配成10%水溶液，2D(烘干)可抗凝5ml血液。 ·(②肝素：常用Na盐或K盐，抗凝作用强，不影响细胞形态， 对血液化学分析干扰少。 肝素抗凝血不宜作血细胞培养，不宜作纤维蛋白原测定，作DC 时，染色性较差。作血液量元素分析时慎用。 适于电解质分析、PH、血液气体分压测定。 一般配成1%水溶液，取0.5ml于试管，37~50℃烘干，可抗凝 5ml血液。 ③枸缘酸钠：常用于血沉测定及输血时抗凝剂。不适于血液 化学检验。配成3.8%水溶液，0.5ml可抗凝5ml血液。 冬测定ESR时，1份抗凝剂+9份血液
÷④草酸钾：抗凝作用强。2mg可抗凝1ml血液 。适于非蛋白氮测定，不适于K、Ca测定、PCV测定，也 不适于乳酸脱氢酶，酸性磷酸酶及淀粉酶测定。 配成10%水溶液，用时在55℃烘干备用。 ·⑤草酸钠：同草酸钾。 。⑥草酸钾一草酸铵：可使血细胞不变形 ·适于PCV及全血和血浆比重测定。不适于非蛋白氮、尿 素及血氨等含氮物质测定。 ÷配法：，草酸钾0.8g,草酸铵1.2g,.蒸馏水至100ml,临 用时于80℃以下烘干，每1ml可抗凝10ml。 ⑦草酸锂：适于K、Na、Ca、CO2结合力，尿素氮、肌 酐、肌酸、糖、纤维蛋白及血浆白蛋白，血红蛋白电泳 等测定。 一般配成40%水溶液，0.1ml可抗凝2-4ml血液。用时 70℃以下烘干备用
。(白)生物材料的制备 冬1.血浆制备： 自然分离：抗凝血置4℃冰箱，12h可使血细胞与血浆充分分离： ÷离心分离：抗凝血以3000rpm,5-10min ÷保存：采血6h内从全血分离出的血浆在-18℃以下可保存12个月 2.血清制备： 采血后室温下自然凝固后即析出血清。 冬季，采血后37℃水浴30min,可加快凝固 ÷或将全血置4℃冰箱3-4h,再以1500~2000rpm离心15'，上清 液即为血清。 血液凝固后用竹签或玻璃针（钝头），沿管壁轻轻剥离血块，血 清即出，然后置2000~2500rpm,离心20min。轻轻吸出血清备 用。 ·如上清液呈淡红色，甚至红色，表明有溶血，应废弃。 3.血细胞分离制备（见实验指导P3)
4.无蛋白血滤液制备 。方法： ~①使蛋白质脱水沉淀：常用甲醇、乙醇、丙酮等有机试 剂或(NH4)2SO4、Na2SO4,NaCI等中性盐类沉淀。 ÷②有机酸沉淀剂：常用的有苦味酸，钼酸、磷钨酸、水 杨酸及三氯醋酸等。(PH要稍低于Pr.等电点) ③重金属离子沉淀：如En艹、Cd+、Hg+、Fe艹、 Ca+及Pb+等。(PH要稍高于Pr.等电点) ·蛋白质沉淀后，离心除去蛋白质。 。具体常用方法有钨酸法，三氯乙酸法，硫酸锌一氢氧化 钡法。 ÷5.组织匀浆制备（见实验指导p4)