上海交通大学通识教育立项核心课程 课程名称：生物技术与人类课程号：B1913班级号：F1317101 姓名： 刘力 学号：5131719021 专业： 药学 课程小论文 题目编号 11 得分 序号 选题 1 生物技术的由来与发展 2 基因工程与农业革命 3 “黄金水稻”所引发的故事 4 “绿色革命”与农业基因工程 5 转基因食品安全吗？ 6 舌尖上的生物技术 7 功能食品与生物技术 8 新能源的希望生物柴油 9 化解能源危机的微生物 10 “白色革命”与生物技术 11 改变环境的基因科学 12 “红色革命”与基因工程 13 非典型战争一生物战与基因武器 14 抗生素与耐药菌 15 转基因的影响 16 基因的伦理 17 试管婴儿的是与非 18 转基因与生物多样性 19 人类基因与专利 20 自选题目（限在粮食或视频、能源或人类健康领域）
上海交通大学通识教育立项核心课程 课程名称： 生物技术与人类 课程号： BI 913 班级号： F1317101 姓名： 刘力 学号： 5131719021 专业： 药学 课程小论文 题目编号 11 得分 序号 选题 1 生物技术的由来与发展 2 基因工程与农业革命 3 “黄金水稻”所引发的故事 4 “绿色革命”与农业基因工程 5 转基因食品安全吗？ 6 舌尖上的生物技术 7 功能食品与生物技术 8 新能源的希望-生物柴油 9 化解能源危机的微生物 10 “白色革命”与生物技术 11 改变环境的基因科学 12 “红色革命”与基因工程 13 非典型战争—生物战与基因武器 14 抗生素与耐药菌 15 转基因的影响 16 基因的伦理 17 试管婴儿的是与非 18 转基因与生物多样性 19 人类基因与专利 20 自选题目（限在粮食或视频、能源或人类健康领域）
改变环境的基因科学 刘力 （上海交通大学药学院，上海200240) 摘要：科技的高速发展，使人类在创造出越来越多物质财富的同时，产生有害物质的数量和 种类也大幅度增加。环境污染己远远超出了自然界微生物的净化能力，己成为人们十分关注 的问题。基因工程技术是在DNA分子水平上按照人们的意愿进行的定向改造生物的新技术。 利用基因工程技术提高微生物净化环境的能力是用于环境治理的一项关键技术。本文简要概 述基因工程技术在环境保护中的应用，介绍基因科学是如何改变环境的。 关键词：基因工程：环境保护 Genetic Science to Change the Environment Liu Li (School of Pharmacy,Shanghai Jiao Tong University,Shanghai 200240,China) Abstract:With the development of science and technology,human beings are emitting a greatly increasing number of harmful substances as well as producing more and more material wealth. Environmental pollution has far exceeded the capacity of purification of natural microorganisms, which has become a problem people pay much attention to.Gene engineering technology is a new technology of directional modified organisms in DNA molecular level in accordance with the will of the people.Using gene engineering technology to improve the ability of microorganisms to purify the environment is a key technology for environmental governance.This article briefly summarizes the application of gene engineering technology in environmental protection,and introduces how the genetic science is to change the environment. Key Words:Gene engineering;Environmental protection 随着科技的发展，人类在为自己生产出越来越多的生活资料的同时，也向大自然排放了 越来越多的有害和难降解物质。如农药、塑料和各种芳香烃类化合物，这些物质正严重破坏 环境和危害着人类的身体健康。自然界中的生物，往往在有毒物质的选择压力下经过基因突 变、基因重组、物种间基因的交流，进化出代谢这些有毒物质的能力。因此，有意识地利用 生物界中存在的净化能力进行生物治理，己渐渐成为环境治理的主要手段。利用基因工程技 术提高微生物净化环境的能力是现代生物技术用于环境治理的一项关键技术。 1基因工程技术简介 1.1基因工程技术的原理 基因工程(gene engineering),又称为重组DNA技术，是按照人们的科研或生产需要， 在分子水平上，用人工方法提取或合成不同生物的遗传物质，在生物体外切割，拼接形成重 组DNA。然后将重组DNA与载体的遗传物质重新组合，再将其引入到没有该DNA的受体细
改变环境的基因科学 刘力 （上海交通大学药学院，上海 200240） 摘要：科技的高速发展，使人类在创造出越来越多物质财富的同时，产生有害物质的数量和 种类也大幅度增加。环境污染已远远超出了自然界微生物的净化能力，已成为人们十分关注 的问题。基因工程技术是在 DNA 分子水平上按照人们的意愿进行的定向改造生物的新技术。 利用基因工程技术提高微生物净化环境的能力是用于环境治理的一项关键技术。本文简要概 述基因工程技术在环境保护中的应用，介绍基因科学是如何改变环境的。 关键词：基因工程；环境保护 Genetic Science to Change the Environment Liu Li (School of Pharmacy, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China) Abstract: With the development of science and technology, human beings are emitting a greatly increasing number of harmful substances as well as producing more and more material wealth. Environmental pollution has far exceeded the capacity of purification of natural microorganisms, which has become a problem people pay much attention to. Gene engineering technology is a new technology of directional modified organisms in DNA molecular level in accordance with the will of the people. Using gene engineering technology to improve the ability of microorganisms to purify the environment is a key technology for environmental governance. This article briefly summarizes the application of gene engineering technology in environmental protection, and introduces how the genetic science is to change the environment. Key Words: Gene engineering; Environmental protection 随着科技的发展，人类在为自己生产出越来越多的生活资料的同时，也向大自然排放了 越来越多的有害和难降解物质。如农药、塑料和各种芳香烃类化合物，这些物质正严重破坏 环境和危害着人类的身体健康。自然界中的生物，往往在有毒物质的选择压力下经过基因突 变、基因重组、物种间基因的交流，进化出代谢这些有毒物质的能力。因此，有意识地利用 生物界中存在的净化能力进行生物治理，已渐渐成为环境治理的主要手段。利用基因工程技 术提高微生物净化环境的能力是现代生物技术用于环境治理的一项关键技术。 1 基因工程技术简介 1.1 基因工程技术的原理 基因工程（gene engineering），又称为重组 DNA 技术，是按照人们的科研或生产需要， 在分子水平上，用人工方法提取或合成不同生物的遗传物质，在生物体外切割，拼接形成重 组 DNA。然后将重组 DNA 与载体的遗传物质重新组合，再将其引入到没有该 DNA 的受体细
胞中，进行复制和表达，生产出符合人类需要的产品或创造出生物的新性状，并使之稳定地 遗传给下一代。或者说，基因工程技术是在生物体外，通过对一种生物的DNA分子进行人工 剪切和拼接，对生物的基因进行改造和重新组合，再把它导入另一种生物的细胞里，定向地 改造生物的遗传性状，产生出具有新的遗传特性的生物。 1.2基因工程技术的步骤 基因工程技术的步骤一般包括目的基因的获得、基因与载体结合、导入受体细胞、基因 的检测表达等过程。概括起来说，基因工程技术是从复杂的生物有机体基因组中，经过酶切 消化或PC℉扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片段：在体外，将带有目的基因的外 源DNA片段连接到能够自我复制并具有选择记号的载体分子上，形成重组DNA分子；将重 组DNA分子转移到适当的受体细胞，并与之一起增殖：从大量的细胞增殖群体中，筛选出获 得了重组DNA分子的受体细胞克隆：从这些筛选出来的受体细胞克隆，提取出己经得到扩增 的目的基因，供进一步分析研究使用：将目的基因克隆到表达载体上，导入受体细胞，使之 在新的遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质。 1.3基因工程技术的意义 基因工程技术是在分子生物学基础上，通过遗传学、生物化学、微生物学与工程学的相 互渗透与结合而发展起来的一门新兴学科。基因工程技术能按人们预先的设计，对基因进行 拼接，且能打破物种间的界限，使一种生物的遗传信息在另一种生物体内得以表达、遗传。 结果必将对人类生活的各个方面产生影响，带来难以估量的效益。 基因工程具有广泛的应用价值，能为工农业生产、医药卫生、环境保护开辟新途径，并 日益显示出其巨大的潜力，将为世界面临的环境保护等问题的解决提供广阔的应用前景。通 过基因工程技术不仅可以将各种基因作为资源保护，且新重组的生物可大幅度地提高生物产 品的产量和质量，甚至改变了一些物种传统的生长生活习惯，在提高了资源利用率的同时， 也使产业化程度大大提高，因而有人将基因工程的诞生比之为原子能的发现。 2基因工程技术改变环境的方法 2.1基因工程技术培育转基因作物 转基因作物是利用重组技术将目的基因转入作物中，培育而成的。主要是用来选育具有 特殊优良性状的植物新品种，如抗虫、抗病毒、抗除草剂、抗盐碱、抗干旱和抗高温等。科 学家把细菌中的抗卡那霉素基因转移到烟草、向日葵和胡萝卜等作物中，一举获得成功。此 后又培育出了数十种具有抗病毒、抗虫、抗除草剂的作物新品种。如抗虫的烟草、番茄、马 铃薯、玉米、大豆、油菜和棉花等作物，抗黄瓜花叶病毒、首蓓花叶病毒的作物，以及抗除 草剂的植物等。基因工程育种，不仅打破地域、季节的限制，扩大农作物种植的范围和面积， 而且可减少农药、化肥对环境的污染，改善人类的生存环境。 2.11转基因棉花具有明显抗虫效果 BT是土壤中一种可杀灭害虫的细菌。将BT基因转导入棉花中，可使棉花细胞内产生一 种自然毒素，这种毒素具有杀灭作物害虫的作用。该实验是在美国北卡罗来纳州进行的。该 地棉花总种植面积为30万hm2,其中有5%的地种植了BT基因棉花。目前这种新型转基因抗 虫棉正在美国及全世界销售。棉农们对这种棉花普遍持欢迎态度，因为他们种植这种基因工 程棉大大减少了购买杀虫剂的开支，特别是由于不使用农药，减少了环境污染，有利于维护 农业生态平衡。我国科学家将具有杀虫作用的特殊基因导入棉花植株，并使之具有遗传性。 经实验室及田间抗虫性鉴定，杀虫效果高达80%~100%，而棉花本身的生长和品质不受任何 影响。这种新型抗虫棉的培育成功，具有明显的经济效益和环境效益
胞中，进行复制和表达，生产出符合人类需要的产品或创造出生物的新性状，并使之稳定地 遗传给下一代。或者说，基因工程技术是在生物体外，通过对一种生物的 DNA 分子进行人工 剪切和拼接，对生物的基因进行改造和重新组合，再把它导入另一种生物的细胞里，定向地 改造生物的遗传性状，产生出具有新的遗传特性的生物。 1.2 基因工程技术的步骤 基因工程技术的步骤一般包括目的基因的获得、基因与载体结合、导入受体细胞、基因 的检测表达等过程。概括起来说，基因工程技术是从复杂的生物有机体基因组中，经过酶切 消化或 PCR 扩增等步骤，分离出带有目的基因的 DNA 片段；在体外，将带有目的基因的外 源 DNA 片段连接到能够自我复制并具有选择记号的载体分子上，形成重组 DNA 分子；将重 组 DNA 分子转移到适当的受体细胞，并与之一起增殖；从大量的细胞增殖群体中，筛选出获 得了重组 DNA 分子的受体细胞克隆；从这些筛选出来的受体细胞克隆，提取出已经得到扩增 的目的基因，供进一步分析研究使用；将目的基因克隆到表达载体上，导入受体细胞，使之 在新的遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质。 1.3 基因工程技术的意义 基因工程技术是在分子生物学基础上，通过遗传学、生物化学、微生物学与工程学的相 互渗透与结合而发展起来的一门新兴学科。基因工程技术能按人们预先的设计，对基因进行 拼接，且能打破物种间的界限，使一种生物的遗传信息在另一种生物体内得以表达、遗传。 结果必将对人类生活的各个方面产生影响，带来难以估量的效益。 基因工程具有广泛的应用价值，能为工农业生产、医药卫生、环境保护开辟新途径，并 日益显示出其巨大的潜力，将为世界面临的环境保护等问题的解决提供广阔的应用前景。通 过基因工程技术不仅可以将各种基因作为资源保护，且新重组的生物可大幅度地提高生物产 品的产量和质量，甚至改变了一些物种传统的生长生活习惯，在提高了资源利用率的同时， 也使产业化程度大大提高，因而有人将基因工程的诞生比之为原子能的发现。 2 基因工程技术改变环境的方法 2.1 基因工程技术培育转基因作物 转基因作物是利用重组技术将目的基因转入作物中，培育而成的。主要是用来选育具有 特殊优良性状的植物新品种，如抗虫、抗病毒、抗除草剂、抗盐碱、抗干旱和抗高温等。科 学家把细菌中的抗卡那霉素基因转移到烟草、向日葵和胡萝卜等作物中，一举获得成功。此 后又培育出了数十种具有抗病毒、抗虫、抗除草剂的作物新品种。如抗虫的烟草、番茄、马 铃薯、玉米、大豆、油菜和棉花等作物，抗黄瓜花叶病毒、首蓓花叶病毒的作物，以及抗除 草剂的植物等。基因工程育种，不仅打破地域、季节的限制，扩大农作物种植的范围和面积， 而且可减少农药、化肥对环境的污染，改善人类的生存环境。 2.1.1 转基因棉花具有明显抗虫效果 BT 是土壤中一种可杀灭害虫的细菌。将 BT 基因转导入棉花中，可使棉花细胞内产生一 种自然毒素，这种毒素具有杀灭作物害虫的作用。该实验是在美国北卡罗来纳州进行的。该 地棉花总种植面积为 30 万 hm2，其中有 5%的地种植了 BT 基因棉花。目前这种新型转基因抗 虫棉正在美国及全世界销售。棉农们对这种棉花普遍持欢迎态度，因为他们种植这种基因工 程棉大大减少了购买杀虫剂的开支，特别是由于不使用农药，减少了环境污染，有利于维护 农业生态平衡。我国科学家将具有杀虫作用的特殊基因导入棉花植株，并使之具有遗传性。 经实验室及田间抗虫性鉴定，杀虫效果高达 80%～100%，而棉花本身的生长和品质不受任何 影响。这种新型抗虫棉的培育成功，具有明显的经济效益和环境效益
2.12转基因颠茄能高效吸收和分解污染物 用植物净化被污染的水体和土壤等技术被学者们称为“植物修复环境技术”。日本科学工 作者在对大约3000种植物进行调查研究后发现，颠茄这种植物有吸收和分解污染源物质多氯 化联苯的能力。在此基础上他们对该植物进行转基因处理，即把加速根部生长的功能基因导 入颠茄细胞中，培育出了生长速度快、根部发达的重组基因颠茄，从而大大提高了其吸收和 分解污染物质的能力。生产实践表明，严重超标的工厂废水能够被它吸收80%。很多国家积 极引进这一现代生物技术成果，己取得了很好的环保效果。 2.2基因工程技术构建基因工程菌 基因工程技术作为生物降解处理污染物研究的前沿领域，能够提高微生物的降解速率， 拓宽底物的专一性范围，维持低浓度下的代谢活性，改善污染物降解过程中的生物催化稳定 性等。因此，从环境中筛选分离出的菌种，利用基因工程手段，实现质粒转移，分子育种， 基因重组技术能够构建出具有特殊降解功能的超级工程菌。在某些条件下，质粒能赋予宿主 细胞在有相应药物或化学毒物的环境中生存的能力。所以构建基因工程菌的一个重要方面是 质粒育种，构建含多种降解质粒的超级细菌。基因工程菌降解效率高、底物范围广、表达稳 定，比自然环境中的降解性微生物更具竞争力，例如PCP103菌株的构建。基因工程菌的构 建和应用对于美化环境、保护人类健康提供了一系列可行的途径。现代科学工作者把PC技 术用于基因工程菌的构建并已取得了一些成绩，国内外正在进行这方面的研究。 2.2.1降解TCE的基因工程菌 三氯乙烯(TCE)作为氯代溶剂已经广泛应用于金属加工、电子技术、印刷、造纸、涂料 和纺织业。TCE的密度(1.462kgL)比水大，属重质非水溶性液体(DNAPLS),而且水溶性好， 溶解度为1000gL。TCE在环境中易迁移，所以由它引起的土壤和地下水污染是一个长期以 来普遍存在的问题。 目前，物理、化学和生物方法处理技术已被认证可以去除TCE。但物理、化学法去除TCE 不仅费用高，而且不能使它完全降解；常规的生物降解技术虽能弥补这个缺陷，但要求投加共 代谢基质如甲烷、氨、甲酚或甲苯等，而这些物质本身就是环境污染物。而基因工程菌可把 多种降解基因转到同一微生物中，能更有效地降解多种污染物，并且能将其转化为无害物质 或完全降解为CO2和H20。 大量研究表明，利用来自Pseudomonas mendocina KR1菌的甲苯单加氧酶修饰的大肠杆 菌(E.coli)和恶臭假单胞菌(Pseudomonas Putida)可在上述基质不存在时降解TCE。 2.2.2降解PCBs的基因工程菌 多氯联苯(PCBs)是一类由氯置换了联苯中的氢原子的人工合成有机氯化合物。作为稳定 剂，对人的皮肤、肝脏、神经、骨骼等都有不良影响，且是一种致癌因子。1968年日本的米 糠油事件就是由于食用PCBs污染的米糠油引起的。由于PCBs极其稳定，耐酸、耐碱、耐 腐蚀，具有化学稳定性、绝缘性、不燃性、耐热性和高的电解常数等特点，在环境中很难分 解；而且工业用PCBs的混合物如Aroclors有60~80种同系物。因此处理受多氯联苯污染的 环境时要求微生物能降解绝大多数或所有的这些同系物。 PCBs生物降解是由双加氧酶攻击2,3位（或5,6位）碳所引起的，但是不同的微生物 对PCB同系物的降解能力有很大差别.Gibson et al认为这是由于微生物具有单一的非特异性 双加氧酶所致，并提出Pseudomonad的两物种底物专一性的不同是由于BphA上至少两种氨 基酸的不同而引起的。例如：在可降解甲苯的微生物P.put ida F1中插入bphD基因簇可使假单 胞菌以联苯为生长基质，bph和tod的融合可使PCB降解菌Pseudomonas同时具有降解甲苯 和联苯的能力。 除此之外，添加表面活性剂也可促进PCBs的降解。添加表面活性剂一方面可提高疏水 性PCBs的生物可利用性：另一方面可为PCBs降解菌提供碳源。据报道，由于非离子型表面
2.1.2 转基因颠茄能高效吸收和分解污染物 用植物净化被污染的水体和土壤等技术被学者们称为“植物修复环境技术”。日本科学工 作者在对大约 3000 种植物进行调查研究后发现，颠茄这种植物有吸收和分解污染源物质多氯 化联苯的能力。在此基础上他们对该植物进行转基因处理，即把加速根部生长的功能基因导 入颠茄细胞中，培育出了生长速度快、根部发达的重组基因颠茄，从而大大提高了其吸收和 分解污染物质的能力。生产实践表明，严重超标的工厂废水能够被它吸收 80%。很多国家积 极引进这一现代生物技术成果，已取得了很好的环保效果。 2.2 基因工程技术构建基因工程菌 基因工程技术作为生物降解处理污染物研究的前沿领域，能够提高微生物的降解速率， 拓宽底物的专一性范围，维持低浓度下的代谢活性，改善污染物降解过程中的生物催化稳定 性等。因此，从环境中筛选分离出的菌种，利用基因工程手段，实现质粒转移，分子育种， 基因重组技术能够构建出具有特殊降解功能的超级工程菌。在某些条件下，质粒能赋予宿主 细胞在有相应药物或化学毒物的环境中生存的能力。所以构建基因工程菌的一个重要方面是 质粒育种，构建含多种降解质粒的超级细菌。基因工程菌降解效率高、底物范围广、表达稳 定，比自然环境中的降解性微生物更具竞争力，例如 PCP103 菌株的构建。基因工程菌的构 建和应用对于美化环境、保护人类健康提供了一系列可行的途径。现代科学工作者把 PCR 技 术用于基因工程菌的构建并已取得了一些成绩，国内外正在进行这方面的研究。 2.2.1 降解 TCE 的基因工程菌 三氯乙烯(TCE) 作为氯代溶剂已经广泛应用于金属加工、电子技术、印刷、造纸、涂料 和纺织业。TCE 的密度(1.462kg/ L) 比水大，属重质非水溶性液体(DNAPLs) ，而且水溶性好， 溶解度为 1000mg/L。TCE 在环境中易迁移，所以由它引起的土壤和地下水污染是一个长期以 来普遍存在的问题。 目前，物理、化学和生物方法处理技术已被认证可以去除 TCE。但物理、化学法去除 TCE 不仅费用高，而且不能使它完全降解; 常规的生物降解技术虽能弥补这个缺陷，但要求投加共 代谢基质如甲烷、氨、甲酚或甲苯等，而这些物质本身就是环境污染物。而基因工程菌可把 多种降解基因转到同一微生物中，能更有效地降解多种污染物，并且能将其转化为无害物质 或完全降解为 CO2 和 H2O。 大量研究表明，利用来自 Pseudomonas mendocina KR1 菌的甲苯单加氧酶修饰的大肠杆 菌( E. coli) 和恶臭假单胞菌( Pseudomonas Putida) 可在上述基质不存在时降解 TCE。 2.2.2 降解 PCBs 的基因工程菌 多氯联苯( PCBs) 是一类由氯置换了联苯中的氢原子的人工合成有机氯化合物。作为稳定 剂，对人的皮肤、肝脏、神经、骨骼等都有不良影响，且是一种致癌因子。1968 年日本的米 糠油事件就是由于食用 PCBs 污染的米糠油引起的。由于 PCBs 极其稳定，耐酸、耐碱、耐 腐蚀，具有化学稳定性、绝缘性、不燃性、耐热性和高的电解常数等特点，在环境中很难分 解; 而且工业用 PCBs 的混合物如 Aroclors 有 60~ 80 种同系物。因此处理受多氯联苯污染的 环境时要求微生物能降解绝大多数或所有的这些同系物。 PCBs 生物降解是由双加氧酶攻击 2，3 位( 或 5，6 位) 碳所引起的，但是不同的微生物 对 PCB 同系物的降解能力有很大差别。Gibson et al 认为这是由于微生物具有单一的非特异性 双加氧酶所致，并提出 Pseudomonad 的两物种底物专一性的不同是由于 BphA 上至少两种氨 基酸的不同而引起的。例如:在可降解甲苯的微生物 P.put ida F1 中插入 bphD 基因簇可使假单 胞菌以联苯为生长基质，bph 和 tod 的融合可使 PCB 降解菌 Pseudomonas 同时具有降解甲苯 和联苯的能力。 除此之外，添加表面活性剂也可促进 PCBs 的降解。添加表面活性剂一方面可提高疏水 性 PCBs 的生物可利用性; 另一方面可为 PCBs 降解菌提供碳源。据报道，由于非离子型表面
活性剂对微生物的毒性更低，添加非离子型表面活性剂比阴离子型和阳离子型表面活性剂更 合适。早在l997年，Lajoie et al就用转位子TnPCB修饰了P.put ida和Ralstonia entropha两 菌株，使二者都能利用表面活性剂作为碳源和能源。 2.2.3降解碳氢化合物的基因工程菌 由于人工合成碳氢化合物造成的环境污染大部分是由石油的渗漏和不恰当处理所造成 的。碳氢化合物包含易被土著菌降解的低分子量的直链脂肪烃类化合物和难降解的高分子量 支链芳香族化合物。目前碳氢类化合物的生物降解主要针对两类较难降解的物质如PAHs(多 环芳烃)和BTEX(苯、甲苯、乙苯和二甲苯的混合物)。 多环芳烃萘可用目前仅有的现场活体转基因微生物进行修复。Sayler et al利用经过萘降 解质粒PUTK21修饰的Pseudomonas fluorescens菌株HK44,其中降解质粒经过了lux基因诱 变。该转基因微生物对萘的降解分为两步，首先是使萘转化为水杨酸盐，然后氧化水杨酸盐 使其成为乙醛和丙酮酸盐。当该转基因微生物暴露于萘或其代谢中间产物时，该生物体就会 发光，我们就可以通过光学和光子计算模型对其进行在线监测。 作为石油组分的BTEX混合物对环境的污染通常都是由这四种污染物同时存在引起的， 而土著微生物并不能对其完全降解，因此开发能降解此类污染物的转基因微生物也是目前研 究的重点。例如用todcle2BA修饰的Pseudomonas putida菌-P.putida TB10:5能使BTX完全 矿化且不会引起中间代谢产物的积累。 目前人们还把研究注意力转移到利用转基因微生物处理废水处理厂的碳氢化合物。如酚 类化合物的存在会影响处理厂出水水质且对其中的微生物产生毒性效应。例如，转基因微生 物P.putida DJT-T1能在90%的甲苯和辛醇-水分配系数大于2.36的有机溶剂中生长。 3基因工程技术在环境保护中的应用 3.1基因工程技术在农业环境保护中的应用 3.1.1基因工程技术应用于降解农药 农田长期过量施用农药，严重破坏了生态平衡，造成土壤水质及食品中残留毒性增加， 给人畜带来潜在危害。如何消除农药污染、保护环境已成为当今世界的一个迫切问题。 由于微生物在物质循环中的重要作用，它在环境修复中一直扮演着重要的角色；然而受微 生物对农药（特别是难降解农药）降解能力的限制，生物修复具有周期长的明显特点，阻碍了这 一技术在现实中的发展和应用。应用基因工程原理与技术，对微生物进行改造，是环境科学 工作者向更深更广的研究领域拓展时必不可少的途径。构建高效的基因工程菌可以显著提高 农药降解效率。环境微生物尤其是细菌中的农药降解基因、降解途径等许多农药降解机制的 阐明为构建具有高效降解性能的工程菌提供了可能。 现己开发出有净化农药（如DDT),降解水中染料以及环境中有机氯苯类和氯酚类、多氯联 苯的基因工程菌。Hoe等人将从农杆菌得到的OpdA(编码有机磷降解基因)和黄杆菌中得到 的Opd(有机磷降解酶基因)分别构建了原核表达质粒，并分别转到大肠杆菌E.coliDH10B中表 达，对其表达产物进行了研究。通过其表达产物OdA和OPH(有机磷水解酶)对几种农药的酶 解动力学比较，发现OdA能作用更多底物的类以物，降解范围更广。 3.12基因工程技术应用于替代农药化肥 基因工程技术的发展，为防治农林害虫提供了有效的新技术手段，微生物农药因此在世 界范围受到广泛重视。微生物农药是指非化学合成，具有杀虫防病作用的微生物制剂，例如： 微生物杀虫剂、杀菌剂、农用抗生素等，这类微生物包括杀虫防病的细菌、真菌和病毒。 微生物杀虫剂对人畜安全无毒，不污染环境；杀虫作用具有一定的特异性和选择性，不会 致死天敌和非目标昆虫：易和其他生物手段结合综合防治害虫，维持生态平衡：由于杀虫活性蛋
活性剂对微生物的毒性更低，添加非离子型表面活性剂比阴离子型和阳离子型表面活性剂更 合适。早在 1997 年，Lajoie et al 就用转位子 TnPCB 修饰了 P.put ida 和 Ralstonia entropha 两 菌株，使二者都能利用表面活性剂作为碳源和能源。 2.2.3 降解碳氢化合物的基因工程菌 由于人工合成碳氢化合物造成的环境污染大部分是由石油的渗漏和不恰当处理所造成 的。碳氢化合物包含易被土著菌降解的低分子量的直链脂肪烃类化合物和难降解的高分子量 支链芳香族化合物。目前碳氢类化合物的生物降解主要针对两类较难降解的物质如 PAHs (多 环芳烃) 和 BTEX (苯、甲苯、乙苯和二甲苯的混合物) 。 多环芳烃萘可用目前仅有的现场活体转基因微生物进行修复。Sayler et al 利用经过萘降 解质粒 PUTK21 修饰的 Pseudomonas fluorescens 菌株 HK44，其中降解质粒经过了 lux 基因诱 变。该转基因微生物对萘的降解分为两步，首先是使萘转化为水杨酸盐，然后氧化水杨酸盐 使其成为乙醛和丙酮酸盐。当该转基因微生物暴露于萘或其代谢中间产物时，该生物体就会 发光，我们就可以通过光学和光子计算模型对其进行在线监测。 作为石油组分的 BTEX 混合物对环境的污染通常都是由这四种污染物同时存在引起的， 而土著微生物并不能对其完全降解，因此开发能降解此类污染物的转基因微生物也是目前研 究的重点。例如用 todc1c2BA 修饰的 Pseudomonas putida 菌- P. putida TB105 能使 BTX 完全 矿化且不会引起中间代谢产物的积累。 目前人们还把研究注意力转移到利用转基因微生物处理废水处理厂的碳氢化合物。如酚 类化合物的存在会影响处理厂出水水质且对其中的微生物产生毒性效应。例如，转基因微生 物 P.putida DJT- T 1 能在 90%的甲苯和辛醇-水分配系数大于 2.36 的有机溶剂中生长。 3 基因工程技术在环境保护中的应用 3.1 基因工程技术在农业环境保护中的应用 3.1.1 基因工程技术应用于降解农药 农田长期过量施用农药，严重破坏了生态平衡，造成土壤水质及食品中残留毒性增加， 给人畜带来潜在危害。如何消除农药污染、保护环境已成为当今世界的一个迫切问题。 由于微生物在物质循环中的重要作用，它在环境修复中一直扮演着重要的角色;然而受微 生物对农药(特别是难降解农药)降解能力的限制，生物修复具有周期长的明显特点，阻碍了这 一技术在现实中的发展和应用。应用基因工程原理与技术，对微生物进行改造，是环境科学 工作者向更深更广的研究领域拓展时必不可少的途径。构建高效的基因工程菌可以显著提高 农药降解效率。环境微生物尤其是细菌中的农药降解基因、降解途径等许多农药降解机制的 阐明为构建具有高效降解性能的工程菌提供了可能。 现已开发出有净化农药(如 DDT)，降解水中染料以及环境中有机氯苯类和氯酚类、多氯联 苯的基因工程菌。Horne 等人将从农杆菌得到的 OpdA(编码有机磷降解基因)和黄杆菌中得到 的 Opd(有机磷降解酶基因)分别构建了原核表达质粒，并分别转到大肠杆菌 E.coliDH10B 中表 达，对其表达产物进行了研究。通过其表达产物 OpdA 和 OPH(有机磷水解酶)对几种农药的酶 解动力学比较，发现 OpdA 能作用更多底物的类似物，降解范围更广。 3.1.2 基因工程技术应用于替代农药化肥 基因工程技术的发展，为防治农林害虫提供了有效的新技术手段，微生物农药因此在世 界范围受到广泛重视。微生物农药是指非化学合成，具有杀虫防病作用的微生物制剂，例如: 微生物杀虫剂、杀菌剂、农用抗生素等，这类微生物包括杀虫防病的细菌、真菌和病毒。 微生物杀虫剂对人畜安全无毒，不污染环境;杀虫作用具有一定的特异性和选择性，不会 致死天敌和非目标昆虫;易和其他生物手段结合综合防治害虫，维持生态平衡;由于杀虫活性蛋
白的多样性，昆虫产生抗性较缓慢：可以通过发酵法生产，生产成本较低：可以通过基因工程技 术途径筛选或构建优良性能的菌株来满足生产应用的需要等。 农作物在生长过程中容易受到致病菌及害虫的影响，因此在作物种植过程中往往需要使 用大量的农药控制病虫害，这是造成食物中农药残留及环境污染的主要原因。减少农药的使 用量是绿色食品生产中的关键技术。采用繁衍害虫天敌、诱杀或生物防治的方法虽然可以部 分替代合成农药，但是最直接有效的方法是利用基因工程技术使作物获得抗病、抗虫的能力。 目前，己采用基因工程技术将各种抗病、抗虫基因转移到大豆、玉米和水稻等多种重要农作 物中，利用转基因植物自身的能力抵抗外界病、虫的危害，达到减少农药使用的目的。 科学工作者正在对固氮酶及固氮酶基因进行深入的研究，并利用基因工程技术对固氮酶 基因进行修饰改造，一方面提高固氮菌的固氮能力，另一方面扩大能与固氮菌共生的作物种 类。随着基因工程技术的发展和对固氮菌分子生物学机理研究的不断深入，将会有越来越多 的农作物通过固氮菌的作用直接利用空气中的氮气，从而减少化学肥料的使用量。 3.2植物基因工程在环境保护中的应用 3.2.1利用植物基因工程技术治理重金属污染 重金属污染物在土壤中可以稳定存在并且不能被完全无毒化，所以大多数植物修复策略 的最终目标是收获积累了重金属的地表植物组织，例如，茎干、叶片等。通常认为，重金属 离子浓度达到或超过植物干重的0.1%一1.0%是超积累，大部分有毒重金属超富集的植物修复 能替代代价极高的物理修复或化学修复。随着分子生物学技术的发展，可使用基因工程手段 来改进一些生长快、生物量大的植物使其对重金属具有高的耐受性和富集能力，通过研究转 基因植物的修复能力，获得可应用于重金属污染治理的超富集植物新品种。目前植物修复去 除Hg的方式是从能够脱汞的细菌中得到基因，编码到植物中，从而不仅能够增加Hg的抗性， 而且还可以增加其挥发能力。Heaton等研究者将细菌有机汞裂解酶(merB)和汞还原酶(merA) 基因修饰到Arabidopsis和烟草植物中，从土壤中吸收Hg()和甲基汞(MeHg),最终以气态 Hg(O)形式从叶表进入到大气中。转基因植物拟南芥，表达merB基因，能够显著增加甲基 汞的耐受性，并且将甲基汞转化为离子汞，后者的毒性是前者的1/100。另外，当merA和 merB转基因植物生长在浓度为25μM的甲基汞溶液中时，每1μg新鲜生物量每天挥发 14.4~85.0μg的Hg(0)。酿酒酵母液泡转运蛋白YCF1催化Cd2+(Cd-GS2)转运到液泡中， 同时也可催化As-GS3和Hg-GS2的转运。过量表达YCF1能增强酵母对Cd2+和Pd2+的 抗性。YC℉1可以将Cd2+转运并隔离到液泡中，对Pd2+的抗性有相似的机制。最近的研究 在拟南芥中成功地表达有功能活性的YC℉1，在拟南芥中YCF1的过量表达明显提高了植物对 高浓度铅、镉的耐受性，转基因有很高的抗性，液泡中铅和镉的含量增加。 3.2.2利用植物基因工程技术治理持久性有机污染(POPS) 近年来许多学者纷纷开展了有机污染土壤的植物修复研究和实践，并取得了一定进展。 TEC(四氯乙烯)是土壤和地下水中分布最广泛的有机污染物，生长在TEC污染区域的植物 可以提取、有效转移TEC,通过在植物根系施入有利于生物降解细生长的根系分泌物可以加 速TEC的降解。精密的对比试验和同位素标记试验证实，在无菌条件下生长的杂交杨树能够 有效提取TEC并将其降解为三氯乙烯、氯化醋酸盐以及最终产物CO2。研究表明在无菌转基 因杨树组织培养试验中，10d之内超过10%的TEC可以被降解为CO2。实验室条件下和田间 试验条件下研究证实转基因杂交杨树都可以吸收和代谢TEC。 在一些曾经发生过战争的地区，残留的炸药污染着当地的大片土地和河流其中一种最主 要的污染物是三硝基甲苯(TNT)。TNT是一种高毒性污染物，French及其同事通过导入季 戊四醇四硝酸脂还原酶成功培育了能够降解硝酸脂和硝基苯环类化合物的转基因植物，其可 在含有0.05 mmol'L-1的TNT的环境中正常生长，而0.025 mmol.L-1的TNT却可使野生 的烟草致死。基因改良的烟草能够对TNT除氮，生成二硝基和一硝基芳香化合物。目前，英
白的多样性，昆虫产生抗性较缓慢;可以通过发酵法生产，生产成本较低;可以通过基因工程技 术途径筛选或构建优良性能的菌株来满足生产应用的需要等。 农作物在生长过程中容易受到致病菌及害虫的影响，因此在作物种植过程中往往需要使 用大量的农药控制病虫害，这是造成食物中农药残留及环境污染的主要原因。减少农药的使 用量是绿色食品生产中的关键技术。采用繁衍害虫天敌、诱杀或生物防治的方法虽然可以部 分替代合成农药，但是最直接有效的方法是利用基因工程技术使作物获得抗病、抗虫的能力。 目前，已采用基因工程技术将各种抗病、抗虫基因转移到大豆、玉米和水稻等多种重要农作 物中，利用转基因植物自身的能力抵抗外界病、虫的危害，达到减少农药使用的目的。 科学工作者正在对固氮酶及固氮酶基因进行深入的研究，并利用基因工程技术对固氮酶 基因进行修饰改造，一方面提高固氮菌的固氮能力，另一方面扩大能与固氮菌共生的作物种 类。随着基因工程技术的发展和对固氮菌分子生物学机理研究的不断深入，将会有越来越多 的农作物通过固氮菌的作用直接利用空气中的氮气，从而减少化学肥料的使用量。 3.2 植物基因工程在环境保护中的应用 3.2.1 利用植物基因工程技术治理重金属污染 重金属污染物在土壤中可以稳定存在并且不能被完全无毒化，所以大多数植物修复策略 的最终目标是收获积累了重金属的地表植物组织，例如，茎干、叶片等。通常认为，重金属 离子浓度达到或超过植物干重的 0.1%～1.0%是超积累，大部分有毒重金属超富集的植物修复 能替代代价极高的物理修复或化学修复。随着分子生物学技术的发展，可使用基因工程手段 来改进一些生长快、生物量大的植物使其对重金属具有高的耐受性和富集能力，通过研究转 基因植物的修复能力，获得可应用于重金属污染治理的超富集植物新品种。目前植物修复去 除 Hg 的方式是从能够脱汞的细菌中得到基因，编码到植物中，从而不仅能够增加 Hg 的抗性， 而且还可以增加其挥发能力。Heaton 等研究者将细菌有机汞裂解酶（merB）和汞还原酶（merA） 基因修饰到 Arabidopsis 和烟草植物中，从土壤中吸收 Hg(II)和甲基汞（MeHg），最终以气态 Hg（0）形式从叶表进入到大气中。转基因植物拟南芥，表达 merB 基因，能够显著增加甲基 汞的耐受性，并且将甲基汞转化为离子汞，后者的毒性是前者的 1/100。另外，当 merA 和 merB 转基因植物生长在浓度为 25μM 的甲基汞溶液中时，每 1μg 新鲜生物量每天挥发 14.4～85.0μg 的 Hg（0）。酿酒酵母液泡转运蛋白 YCF1 催化 Cd2+ (Cd- GS2)转运到液泡中， 同时也可催化 As- GS3 和 Hg- GS2 的转运。过量表达 YCF1 能增强酵母对 Cd2+ 和 Pd2+ 的 抗性。YCF1 可以将 Cd2+ 转运并隔离到液泡中，对 Pd2+ 的抗性有相似的机制。最近的研究 在拟南芥中成功地表达有功能活性的 YCF1，在拟南芥中 YCF1 的过量表达明显提高了植物对 高浓度铅、镉的耐受性，转基因有很高的抗性，液泡中铅和镉的含量增加。 3.2.2 利用植物基因工程技术治理持久性有机污染（POPS） 近年来许多学者纷纷开展了有机污染土壤的植物修复研究和实践，并取得了一定进展。 TEC（四氯乙烯）是土壤和地下水中分布最广泛的有机污染物，生长在 TEC 污染区域的植物 可以提取、有效转移 TEC，通过在植物根系施入有利于生物降解细生长的根系分泌物可以加 速 TEC 的降解。精密的对比试验和同位素标记试验证实，在无菌条件下生长的杂交杨树能够 有效提取 TEC 并将其降解为三氯乙烯、氯化醋酸盐以及最终产物 CO2。研究表明在无菌转基 因杨树组织培养试验中，10d 之内超过 10%的 TEC 可以被降解为 CO2。实验室条件下和田间 试验条件下研究证实转基因杂交杨树都可以吸收和代谢 TEC。 在一些曾经发生过战争的地区，残留的炸药污染着当地的大片土地和河流其中一种最主 要的污染物是三硝基甲苯（TNT）。TNT 是一种高毒性污染物，French 及其同事通过导入季 戊四醇四硝酸脂还原酶成功培育了能够降解硝酸脂和硝基苯环类化合物的转基因植物，其可 在含有 0.05mmol•L- 1 的 TNT 的环境中正常生长，而 0.025 mmol•L- 1 的 TNT 却可使野生 的烟草致死。基因改良的烟草能够对 TNT 除氮，生成二硝基和一硝基芳香化合物。目前，英
国的一些生物学家己经培养出一种转基因烟草，它们可以吸收土壤中的TNT,然后把TNT转 化成对其他植物无害的物质，从而除去土壤中的污染。这些转基因烟草植物的储物基因来源 于土壤中的一种细菌，这种细菌可以产生一种转化TNT的酶。 3.3基因工程技术治理土壤和水体的石油污染 在石油开采过程中，采出的原油含有大量的水分，原油脱下的废水中，含有大量的石油 污染物。随着石油工业的迅速发展，石油这种含有多种烃类的混合物，不断对陆地和海洋造 成污染，而烃类是难分解的物质，某种特定的细菌只能降解有限的几种石油成分，对其他成 分却不能分解。落地油和含油污水对土壤造成了严重污染，大量的油泥，不仅造成严重的环 境问题，同时也给石油行业造成重大的经济损失。具有特殊生理生化功能的植物、微生物应 运而生，基因修饰、改造、基因转移等现代生物技术的渗透推动了污油土壤处理生物技术的 进一步发展，因此，利用生物技术进行油污土壤治理，具有广阔的应用前景。 美国利用DNA重组技术把降解芳烃、萜烃、多环芳烃、脂肪烃的4种菌体基因链接， 转移到某一菌体中构建出可同时降解4种有机物的“超级细菌”，它能分解各种石油烃、消除 浮油的效率高、速度快，只需几小时就能除掉自然菌种需几年才能消除的原油污染。经不断 改进，这种超级细菌己成功地用于实际环境治理中。用之清除石油污染，在数小时内可将水 上浮油中的23烃类降解。基因工程菌在含油污水处理中的应用将会继续完善。 4结论与展望 基因工程技术是一项新兴的发展迅速的污染环境治理技术。实践证明，采用基因工程技 术治理污染环境，可以更大限度地去除环境中的污染物。是保障可持续发展的一项最有力的 措施。随着基因工程菌的出现，基因工程技术将不断应用于更多的污染环境的治理工程中。 培养出新的特效物种并进一步提高其应用效率、降低应用成本：运用各种相关技术加以优化组 合，尤其是高效、低能耗、易普及的特种微生物与特殊工艺的最佳结合，加强不同专业、不同 学科之间的合作，如将毒理学和微生物学和环境工程学相结合；从根本上消除污染源，充分协 调人与自然之间的关系，充分实现废物资源化。 但是由于基因工程治理环境的研究还处于起始阶段，因此其应用面临很多问题需要解决。 这不仅涉及技术上的问题，也关系到社会的安定和人们的认识观。许多生态学家认为，转基 因生物大规模释放到环境中，将可能造成无法弥补的生态灾难。例如转基因微生物可能与其 他生物交换遗传物质，产生新的有害生物或增强有害生物的危害性，以致引起疾病的流行；转 基因微生物也可能取代其他物种，对生物多样性造成无法挽回的损失。而有些影响需要经过 很长时间才能表现和监测出来。由于生物技术产品风险的出现具有长期的滞后性，对生物安 全问题还需要进行长期的系统研究。 总而言之，尽管基因工程技术还存在技术性和安全性上的问题，但是基因工程技术的崛 起，确实为技术进步增添了新的活力，为解决资源短缺、生态破坏等全球性环境问题带来了 新的曙光，为世纪的环境保护展现出绚丽多彩的应用前景。因此，随着人们对基因的深入研 究和对遗传密码的破译、基因工程定会在环境保护及各个领域发挥越来越显著的作用。 参考文献 [1]杨林，聂克艳，杨晓容，高红卫.基因工程技术在环境保护中的应用[J).西南农业学报，2007,05：1130-1133 [2]Irene Homne,Tara DS,Rebecca L,et a.I Identification of an opd(organophosphate degradation)gene in an Agrobacterium isolate[J].Applied and Environm en talM icrob iology,2002,68(7):3371-3376 [3]孙毅.基因工程与环境保护[J.科技情报开发与经济，2006,15：140-142. [4]陈翠红，朱琨.基因工程在降解有机污染物中的应用[J.环境与可持续发展，2006,02：29-31
国的一些生物学家已经培养出一种转基因烟草，它们可以吸收土壤中的 TNT，然后把 TNT 转 化成对其他植物无害的物质，从而除去土壤中的污染。这些转基因烟草植物的储物基因来源 于土壤中的一种细菌，这种细菌可以产生一种转化 TNT 的酶。 3.3 基因工程技术治理土壤和水体的石油污染 在石油开采过程中，采出的原油含有大量的水分，原油脱下的废水中，含有大量的石油 污染物。随着石油工业的迅速发展，石油这种含有多种烃类的混合物，不断对陆地和海洋造 成污染，而烃类是难分解的物质，某种特定的细菌只能降解有限的几种石油成分，对其他成 分却不能分解。落地油和含油污水对土壤造成了严重污染，大量的油泥，不仅造成严重的环 境问题，同时也给石油行业造成重大的经济损失。具有特殊生理生化功能的植物、微生物应 运而生，基因修饰、改造、基因转移等现代生物技术的渗透推动了污油土壤处理生物技术的 进一步发展，因此，利用生物技术进行油污土壤治理，具有广阔的应用前景。 美国利用 DNA 重组技术把降解芳烃、萜烃、多环芳烃、脂肪烃的 4 种菌体基因链接， 转移到某一菌体中构建出可同时降解 4 种有机物的“超级细菌”，它能分解各种石油烃、消除 浮油的效率高、速度快，只需几小时就能除掉自然菌种需几年才能消除的原油污染。经不断 改进，这种超级细菌已成功地用于实际环境治理中。用之清除石油污染，在数小时内可将水 上浮油中的 2/3 烃类降解。基因工程菌在含油污水处理中的应用将会继续完善。 4 结论与展望 基因工程技术是一项新兴的发展迅速的污染环境治理技术。实践证明，采用基因工程技 术治理污染环境，可以更大限度地去除环境中的污染物。是保障可持续发展的一项最有力的 措施。随着基因工程菌的出现，基因工程技术将不断应用于更多的污染环境的治理工程中。 培养出新的特效物种并进一步提高其应用效率、降低应用成本; 运用各种相关技术加以优化组 合，尤其是高效、低能耗、易普及的特种微生物与特殊工艺的最佳结合; 加强不同专业、不同 学科之间的合作，如将毒理学和微生物学和环境工程学相结合; 从根本上消除污染源，充分协 调人与自然之间的关系，充分实现废物资源化。 但是由于基因工程治理环境的研究还处于起始阶段，因此其应用面临很多问题需要解决。 这不仅涉及技术上的问题，也关系到社会的安定和人们的认识观。许多生态学家认为，转基 因生物大规模释放到环境中，将可能造成无法弥补的生态灾难。例如转基因微生物可能与其 他生物交换遗传物质，产生新的有害生物或增强有害生物的危害性，以致引起疾病的流行; 转 基因微生物也可能取代其他物种，对生物多样性造成无法挽回的损失。而有些影响需要经过 很长时间才能表现和监测出来。由于生物技术产品风险的出现具有长期的滞后性，对生物安 全问题还需要进行长期的系统研究。 总而言之，尽管基因工程技术还存在技术性和安全性上的问题，但是基因工程技术的崛 起，确实为技术进步增添了新的活力，为解决资源短缺、生态破坏等全球性环境问题带来了 新的曙光，为世纪的环境保护展现出绚丽多彩的应用前景。因此，随着人们对基因的深入研 究和对遗传密码的破译、基因工程定会在环境保护及各个领域发挥越来越显著的作用。 参考文献 [1]杨林,聂克艳,杨晓容,高红卫. 基因工程技术在环境保护中的应用[J]. 西南农业学报,2007,05:1130-1133. [2] Irene Horne, Tara DS , Rebecca L, et a.l Identification of an opd (organophosphate degradation) gene in an Agrobacterium isolate[J] . Applied and Environm en talM icrob iology, 2002, 68 ( 7 ) : 3371- 3376. [3]孙毅. 基因工程与环境保护[J]. 科技情报开发与经济,2006,15:140-142. [4]陈翠红,朱琨. 基因工程在降解有机污染物中的应用[J]. 环境与可持续发展,2006,02:29-31
[5]Sayler GS,Ripp S.Field applications of genetically engineered microorganisms for bioremediation processes [J].Current Opinion in Biotechnology,2000,11(3):286~289. [6卢大鹏.基因工程技术在农业环境保护中的应用.现代农业科学，2009,05：186+190. [7孙鹏年，李周洲，杜振林，刘智峰.植物基因工程在环境保护中的应用[J.现代园艺，2011,13：135. [8]Cherian S,Margarida O M.Transgenic plants in phytoremediation recent advances and new possibilities [J].Environmental Science&Technology,2005(24) [9]Marcus Droge,Alfred Puhler,Weter Selbitschka.Horizontal gene transfer as a biosafety issue:a natural phenomenon of public concern [J].Journal of Biotechnology,1998,64(1):75-90. [10]Zndu Shekhar Thakur.Molecular choning and characterization of pentachlorophenol-degrading Mbnooxygenase genes of pseudomonas sp from the chemostat,biochemical and biophysical research communication,2002,290(2):770-772
[5]Sayler GS , Ripp S. Field applications of genetically engineered microorganisms for bioremediation processes [J]. Current Opinion in Biotechnology, 2000, 11 ( 3) : 286~ 289. [6]卢大鹏. 基因工程技术在农业环境保护中的应用[J]. 现代农业科学,2009,05:186+190. [7]孙鹏年,李周洲,杜振林,刘智峰. 植物基因工程在环境保护中的应用[J]. 现代园艺,2011,13:135. [8]Cherian S, Margarida O M. Transgenic plants in phytoremediation recent advances and new possibilities [J]. Environmental Science& Technology，2005 (24) [9]Marcus Droge, Alfred Puhler, Weter Selbitschka. Horizontal gene transfer as a biosafety issue: a natural phenomenon of public concern [J] . Journal of Biotechnology, 1998, 64 (1) : 75- 90. [10] Zndu Shekhar Thakur. Molecular choning and characterization of pentachlorophenol- degrading Mbnooxygenase genes of pseudomonas sp from the chemostat, biochemical and biophysical research communication, 2002, 290(2): 770~ 772