复习 吸光光度法,包括比色法、可见分光光度法及紫外分光光度法等。 二、定义:它是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作 用,对物质进行定性分析、定量分析及结构分析,按所吸收光的波长区 域不同,分为紫外分光光度法(200-400nm)和可见分光光度法(400 760nm),合称为紫外一可见分光光度法(200-760mm)。 三、分光光度法与比色法区别:1、比色法只限于在可见光区,分 光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。2、比色法用的单色光是来 自滤光片,谱带宽度从40-120mm,精度不高,分光光度法则要求近于真 正单色光,其光谱带宽最大不超过3-5nm,在紫外区可到1mm以下,来自 棱镜或光栅,具有较高的精度。 四、分光光度法所使用的光谱范围在200mm-10μ之间。包括紫外 光区,可见光区和红外光区。 五、紫外-可见分光光度法应用范围:无机和有机物质—定性和 定量测定,结构分析。 六、物质的颜色和对光的选择性吸收:当光束照射到物质上时, 物质对于不同波长的光的吸收、透射、反射、折射的程度不同,而使物 质视分的颜色。 生物工程学院
2021/2/23 生物工程学院 2 复习 • 一、吸光光度法，包括比色法、可见分光光度法及紫外分光光度法等。 • 二、定义：它是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作 用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析，按所吸收光的波长区 域不同，分为紫外分光光度法(200-400nm)和可见分光光度法(400- 760nm) ，合称为紫外—可见分光光度法(200-760nm) 。 • 三、分光光度法与比色法区别：1、比色法只限于在可见光区，分 光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。2、比色法用的单色光是来 自滤光片，谱带宽度从40－120nm，精度不高，分光光度法则要求近于真 正单色光，其光谱带宽最大不超过3－5nm，在紫外区可到1nm以下，来自 棱镜或光栅，具有较高的精度。 • 四、分光光度法所使用的光谱范围在200nm-10μ之间。包括紫外 光区，可见光区和红外光区。 • 五、紫外—可见分光光度法应用范围：无机和有机物质----定性和 定量测定,结构分析。 • 六、物质的颜色和对光的选择性吸收：当光束照射到物质上时， 物质对于不同波长的光的吸收、透射、反射、折射的程度不同，而使物 质呈现不同的颜色
复习 战长 nm) 七、吸收光谱曲线:(1)KMnO4溶液对不同波长的光吸收情况不同。 对波长为525m的绿色光吸收最多,而对红色光和紫色光吸收很少,几乎 能完全透过,因此KMnO4溶液呈紫红色;(2)不同浓度KMnO4溶液的吸 收曲线形状相似,最大吸收波长不变。这个特性可作为物质定性分析的 依据;(3)同一物质不同浓度的溶液,在一定波长处吸光度随浓度增加而 增大。若在最大吸收波长处测定吸光度,灵敏度最高。这个特性可作为 物质定量分析的依据。 八、紫外吸收光谱:分子价电子(最外层电子)能级跃迁。电子跃迁 的同时,伴随着振动能级和转动能级的跃迁一带状光谱。远红外光谱为 分子转动光谱,红外光谱或分子振动光谱,紫外可见光谱或分子的电子 光谱; 2021/2/23 生物工程学院
2021/2/23 生物工程学院 3 复习 • 七、吸收光谱曲线：(l) KMnO4溶液对不同波长的光吸收情况不同。 对波长为525nm的绿色光吸收最多，而对红色光和紫色光吸收很少，几乎 能完全透过，因此KMnO4溶液呈紫红色；(2)不同浓度KMnO4溶液的吸 收曲线形状相似，最大吸收波长不变。这个特性可作为物质定性分析的 依据；(3)同一物质不同浓度的溶液，在一定波长处吸光度随浓度增加而 增大。若在最大吸收波长处测定吸光度，灵敏度最高。这个特性可作为 物质定量分析的依据。 • 八、紫外吸收光谱：分子价电子（最外层电子）能级跃迁。电子跃迁 的同时，伴随着振动能级和转动能级的跃迁--带状光谱。 远红外光谱为 分子转动光谱，红外光谱或分子振动光谱，紫外—可见光谱或分子的电子 光谱；
复习 九、有机物吸收光谱:按分子轨道理论,在有机分子中存在、π、n三种价电子 ,它们对应有0和0*,π和π*及n轨道。当它们吸收一定能量AE后,可产生 σ→0*、π→π大、n→σ大、n→π大类型的电子跃迁 紫外光谱电子跃迁类型:n-兀*跃迁-π*跃迁;饱和化合物无紫外吸收 因此紫外、可见吸收光谱法主要研究醛、酮、a、β-不饱和醛酮、芳香化 合物、杂环化合物、共扼多烯等化合物。 十、光吸收的基本定律:朗伯一比耳定律A=1g(LI=KCL(单色光) 十一、透光度、吸光度、吸光系数、摩尔吸光系数。 例1:同一物质,不同浓度的甲、乙两种溶液,在相同条件下,测得T甲=0.57,T 乙=0.32,如果此液符合Beer定律,试求它们的浓度比C甲/C乙 解:因为A=KCL=Lg(1/T),所以A甲=KC甲L=Lg(1/个甲)-(1) (1/T乙)-(2);(2)-(1):C甲/C乙=1/2;答:略。 例2:某试液用2.0cm吸收池测量时,T%=60%,若用1.0cm或3.0cm吸收池测量时, 透光度各为多少? 解:因为A=KCL=Lg(1/T),所以KC=0.1109, 当L=1.0cm时,T=77.5%;当L=3.0cm时,T=46.5%;答:略。 2021/2/23 生物工程学院
2021/2/23 生物工程学院 4 复习 九、有机物吸收光谱：按分子轨道理论，在有机分子中存在σ、π、n三种价电子 ，它们对应有σ和σ＊，π和π＊及n轨道。当它们吸收一定能量∆E后，可产生 σ→σ＊、π→π＊、n→σ＊、n→π＊ 类型的电子跃迁。 紫外光谱电子跃迁类型：n—π*跃迁 π—π*跃迁;饱和化合物无紫外吸收 ; 因此紫外、可见吸收光谱法主要研究醛、酮、、-不饱和醛酮、芳香化 合物、杂环化合物、共扼多烯等化合物。 十、光吸收的基本定律：朗伯——比耳定律A＝lg（I0/I）＝KCL（单色光） 十一、透光度、吸光度、吸光系数、摩尔吸光系数。 • 例1：同一物质，不同浓度的甲、乙两种溶液，在相同条件下，测得T甲=0.57，T 乙=0.32，如果此液符合Beer定律，试求它们的浓度比C甲/C乙。 • 解：因为A=KCL=Lg（1/T），所以A甲=KC甲L=Lg（1/T甲）--（1） • A乙=KC乙L=Lg（1/T乙）--（2） ；（2）-（1）：C甲/C乙=1/2 ；答：略。 • 例2：某试液用2.0cm吸收池测量时，T%=60%，若用1.0cm或3.0cm吸收池测量时， 透光度各为多少？ • 解：因为A=KCL=Lg（1/T），所以KC=0.1109， • 当L=1.0cm时，T=77.5%；当L=3.0cm时，T=46.5%；答：略
复习 十二、紫外可见光分光光度计仪器结构:由光源、单色器、吸收池、检测 器和信号显示系统五个部分组成。(各部分作用) 十三、紫外可见分光光度计与可见光分光光度计异同点: 相同点:均遵守朗伯-比耳定律。 不同点:(1)测定波长范围不同:可见分光光度计是400-760mm。紫外可见分 光光度计是200-760mm。(2)使用的光源不同:可见分光光度计使用的是钨丝 灯或卤钨灯;紫外可见分光光度计在可见区使用的是钨丝灯或卤钨灯,在紫外 区使用的是氘灯。(3)使用的吸收池不同:可见分光光度计使用的是玻璃比色 皿;紫外可见分光光度计在可见区使用的是玻璃比色皿,在紫外区使用的是石 英比色皿。(4)单色器中的色散元件不同:可见分光光度计使用的是玻璃棱镜 紫外可见分光光度计使用的是石英棱镜。 十四、紫外可见分光光度法的定性、定量依据-定性依据:根据光谱上一 些特征吸收,包括最大吸收波长、最小吸收波长、肩峰、吸收系数、吸光度比 值等;定量依据:朗伯-比耳定律。 十五、仪器测量条件的选择一适宜的吸光度范围:0.2-0.8;选择最强吸收 带的最大吸收波长(λmax)为入射光波长。 2021/2/23 生物工程学院 5
2021/2/23 生物工程学院 5 复习 • 十二、 紫外可见光分光光度计仪器结构：由光源、单色器、吸收池、检测 器和信号显示系统五个部分组成。（各部分作用） • 十三、紫外可见分光光度计与可见光分光光度计异同点： • 相同点：均遵守朗伯-比耳定律。 • 不同点：（1）测定波长范围不同：可见分光光度计是400-760nm。紫外可见分 光光度计是200-760nm。（2）使用的光源不同：可见分光光度计使用的是钨丝 灯或卤钨灯；紫外可见分光光度计在可见区使用的是钨丝灯或卤钨灯，在紫外 区使用的是氘灯。（3）使用的吸收池不同：可见分光光度计使用的是玻璃比色 皿；紫外可见分光光度计在可见区使用的是玻璃比色皿，在紫外区使用的是石 英比色皿。（4）单色器中的色散元件不同：可见分光光度计使用的是玻璃棱镜； 紫外可见分光光度计使用的是石英棱镜。 • 十四、紫外-可见分光光度法的定性、定量依据-定性依据：根据光谱上一 些特征吸收，包括最大吸收波长、最小吸收波长、肩峰、吸收系数、吸光度比 值等；定量依据：朗伯-比耳定律。 • 十五、仪器测量条件的选择--适宜的吸光度范围：0.2-0.8；选择最强吸收 带的最大吸收波长( max)为入射光波长
第六章原子吸收分光光度 分析法 原子吸收光谱仪 0.388 2021/2/23 生物工程学院 6
2021/2/23 生物工程学院 6 第六章 原子吸收分光光度 分析法
原子吸收分光光度分析法教学基本要求 1、掌握原子吸收分光光度法的基本原理 2、了解影响原子吸收谱线轮廓的因素(原子性质 自然宽度;外界影响-热变宽、碰撞变宽等) 3、理解峰值吸收与积分吸收的关系; 4、掌握原子吸收光谱仪的基本结构; 5、了解原子吸收光谱分析干扰及其消除方法 (物理干扰、化学干扰、电离干扰、光谱干扰和背景干扰) 6、掌握原子吸收分光光度法的分析方法及实 验条件选择原则; 7、掌握灵敏度和检出限定义及计算。 2021/2/23 生物工程学院
2021/2/23 生物工程学院 7 原子吸收分光光度分析法教学基本要求 • 1、掌握原子吸收分光光度法的基本原理 • 2、了解影响原子吸收谱线轮廓的因素(原子性质-- 自然宽度； 外界影响-热变宽、碰撞变宽等) • 3、理解峰值吸收与积分吸收的关系； • 4、掌握原子吸收光谱仪的基本结构； • 5、 了解原子吸收光谱分析干扰及其消除方法 (物理干扰、化学干扰、电离干扰、光谱干扰和背景干扰)； • 6、 掌握原子吸收分光光度法的分析方法及实 验条件选择原则； • 7、掌握灵敏度和检出限定义及计算
第六章 第一节原子吸收光谱分析基本原理 basic principle ofAas 原子吸收分光 第二节原子吸收光谱仪及主要部件 atomic absorption spectrometer 光度分析法 and main parts 第三节干扰及其抑制(了解) spectrometry,AAS第四节分析条件的选择与邮→on atomic absorption interferences and elimination choice of analytical condition and application 第五节原子荧光光谱法 2021/2/23 生物工程学院 8
2021/2/23 生物工程学院 8 第六章 原子吸收分光 光度分析法 第一节 原子吸收光谱分析基本原理 basic principle of AAS 第二节原子吸收光谱仪及主要部件 atomic absorption spectrometer and main parts 第三节 干扰及其抑制（了解） interferences and elimination 第四节 分析条件的选择与应用 choice of analytical condition and application 第五节 原子荧光光谱法 atomic absorption spectrometry,AAS
第六章 、概述 原子吸收分光 generalization 、原子吸收光谱的产生 光度分析法 formation ofAAs 基态原子与激发态原子的 atomic absorption分配美系 spectrometry,AAS 四、谱线轮廓与谱线变宽 第一节 shape and broadening of absorption line 原子吸收光谱分析基五、积分吸收与峰值吸收 integrated absorption and absorption in 本原理 peak max 六、定量基础 basic principle of quantitative AAS 2021/2/23 生物工程学院 9
2021/2/23 生物工程学院 9 第六章 原子吸收分光 光度分析法 一、概述 generalization 二、原子吸收光谱的产生 formation of AAS 三、基态原子与激发态原子的 分配关系 四、谱线轮廓与谱线变宽 shape and broadening of absorption line 五、积分吸收与峰值吸收 integrated absorption and absorption in peak max 六、定量基础 quantitative 第一节 原子吸收光谱分析基 本原理 atomic absorption spectrometry,AAS basic principle of AAS
概述 generalization 定义:原子吸收光谱法是基于从光源辐射出具有 待测元素特征谱线的光,通过试液蒸气时,被 试液蒸气中待测元素基态原子所吸收,通过测 室这种特征谱线光的减弱程度,根据朗伯-比 耳定律来确定试液中待测元素含量的方法 原子吸收光谱位于光谱的紫外区和可见区。 在地质、冶金、机械、化工、农业、食品、 轻工、生物医药、环境保护、材料科学等各个 领城有广泛的应用。 2021/2/23 生物工程学院 10
2021/2/23 生物工程学院 10 一、概述 generalization 定义：原子吸收光谱法是基于从光源辐射出具有 待测元素特征谱线的光，通过试液蒸气时，被 试液蒸气中待测元素基态原子所吸收，通过测 室这种特征谱线光的减弱程度，根据朗伯-比 耳定律来确定试液中待测元素含量的方法。 原子吸收光谱位于光谱的紫外区和可见区。 在地质、冶金、机械、化工、农业、食品、 轻工、生物医药、环境保护、材料科学等各个 领域有广泛的应用
原子吸收光谱的发展历史 第一阶段原子吸收现象的发现与科学解释 1802年,伍朗斯顿( WHWollaston)在研究太阳连续 光谱时,就发现了太阳连续光谱中出现的暗线。 1817年,弗劳霍费( .Fraunhofer)在研究太阳连续光 谱时,再次发现了这些暗线-弗劳霍费线。 1859年,克希荷夫( G Kirchhof)与本生( RBunson) 在硏究碱金属和碱土金属的火焰光谱时,发现钠蒸气发出的 光通过温度较低的钠蒸气时,会引起钠光的吸收,并且根据 钠发射线与暗线在光谱中位置相同这一事实,断定太阳连 续光谱中的暗线,正是太阳外围大气圈中的钠原子 对太阳光谱中的钠辐射吸收的结果。 2021/2/23 生物工程学院
2021/2/23 生物工程学院 11 原子吸收光谱的发展历史 • 第一阶段 原子吸收现象的发现与科学解释 1802年，伍朗斯顿（W.H.Wollaston）在研究太阳连续 光谱时，就发现了太阳连续光谱中出现的暗线。 • 1817年，弗劳霍费（J.Fraunhofer）在研究太阳连续光 谱时，再次发现了这些暗线---弗劳霍费线。 • 1859年，克希荷夫（G.Kirchhoff）与本生（R.Bunson） 在研究碱金属和碱土金属的火焰光谱时，发现钠蒸气发出的 光通过温度较低的钠蒸气时，会引起钠光的吸收，并且根据 钠发射线与暗线在光谱中位置相同这一事实，断定太阳连 续光谱中的暗线，正是太阳外围大气圈中的钠原子 对太阳光谱中的钠辐射吸收的结果