第一节概述 第五章 eneralization g 紫外-可见吸收第二节光的吸收 光谱分析法 第三节光吸收的基本定律 Ultraviolet-visible Lambert-Beer's law molecular absorption第四节紫外可见光分光光 spectrometry,UvVS度计 UV-VIS spectrometer 第五节定性与定量分析 Qualitative- Quantitative Analysis 2021/2/23 生物工程学院
2021/2/23 生物工程学院 1 第五章 紫外-可见吸收 光谱分析法 第一节 概 述 generalization 第二节 光的吸收 第三节 光吸收的基本定律 Lambert-Beer’s Law 第四节 紫外可见光分光光 度计UV-VIS spectrometer 第五节 定性与定量分析 Qualitative- Quantitative Analysis Ultraviolet-visible molecular absorption spectrometry, UV-VIS
第五章 紫外-可见吸 定义 收光谱分析法 Ultraviolet-visible 分光光度法 molecular absorption 与比色法区别 spectrometry, UV-VIS 第一节概述 、特点 generalization 2021/2/23 生物工程学院
2021/2/23 生物工程学院 2 第五章 紫外-可见吸 收光谱分析法 第一节 概 述 generalization Ultraviolet-visible molecular absorption spectrometry, UV-VIS 一、定义 二、分光光度法 与比色法区别 三、特点
紫外吸收光谱:分子价电子(最外层电子)能级跃迁。 波长范围:100-760nm (1)远紫外光区:100-200nm (2)近紫外光区:200400m 3)可见光区:400-760mm 可用于结构鉴定和定量分析。 电子跃迁的同时,伴随着振 动转动能级的跃迁;带状光谱。E 250300350400nm 2021/2/23 生物工程学院
2021/2/23 生物工程学院 3 紫外吸收光谱：分子价电子（最外层电子）能级跃迁。 波长范围：100-760 nm. (1) 远紫外光区: 100-200nm (2) 近紫外光区: 200-400nm (3)可见光区:400-760nm 250 300 350 400nm 1 2 3 4 e λ 可用于结构鉴定和定量分析。 电子跃迁的同时，伴随着振 动转动能级的跃迁;带状光谱
定义 基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为 吸光光度法,包括比色法、可见分光光度法及紫外分光光度 法等。本章重点讨论可见光区的吸光光度法及紫外光区的紫 外分光光度法。 日常分析工作中--KMn0水溶液呈深紫色,K2CrO4溶液 呈黄色,CuSO4溶液呈蓝色…￥这些有色物质溶液的浓度改 变时,溶液颜色的深浅也随之改变,溶液越浓,颜色越深 可以通过比较溶液颜色的深浅来测定物质的含量。 这种基于比较溶液颜色的深浅进行定量分析的方法,称 为目视比色法。采用分光光度计对物质吸光度进行测定,从 而求出物质含量的方法,称之为分光光度 20 2021/2/23 生物工程学院 4009204060480500520540560580600
2021/2/23 生物工程学院 4 • 一、定义 • 基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为 吸光光度法，包括比色法、可见分光光度法及紫外分光光度 法等。本章重点讨论可见光区的吸光光度法及紫外光区的紫 外分光光度法。 • 日常分析工作中----KMn04水溶液呈深紫色，K2CrO4溶液 呈黄色，CuSO4溶液呈蓝色……当这些有色物质溶液的浓度改 变时，溶液颜色的深浅也随之改变，溶液越浓，颜色越深---- 可以通过比较溶液颜色的深浅来测定物质的含量。 • 这种基于比较溶液颜色的深浅进行定量分析的方法，称 为目视比色法。采用分光光度计对物质吸光度进行测定，从 而求出物质含量的方法，称之为分光光度法
紫外可见吸收光谱分析法是利用物质的分子对 某一波长范围的光的吸收作用,对物质进行定性分 析、定量分析及结构分析的方法。 按所吸收光的波长区域不同,分为紫外分光光 度法(200-400m和可见分光光度法(400-760m, 合称为紫外一可见分光光度法(200-760nm)。 分光光度法是在比色法( colorimetry)的基础上 发展起来的。 2021/2/23 生物工程学院 5
2021/2/23 生物工程学院 5 • 紫外-可见吸收光谱分析法是利用物质的分子对 某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分 析、定量分析及结构分析的方法。 • 按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光 度法(200-400nm)和可见分光光度法(400-760nm)， 合称为紫外—可见分光光度法(200-760nm)。 • 分光光度法是在比色法( colorimetry)的基础上 发展起来的
分光光度法与比色法区别 比色法只限于在可见光区,分光光度法则 可以扩展到紫外光区和红外光区 比色法用的单色光是来自滤光片,谱带宽 度从40-120nm,精度不高,分光光度法则要 求近于真正单色光,其光谱带宽最大不超过3 5nm,在紫外区可到1nm以下,来自棱镜或 光栅,具有较高的精度。 2021/2/23 生物工程学院 6
2021/2/23 生物工程学院 6 二、分光光度法与比色法区别 • 比色法只限于在可见光区，分光光度法则 可以扩展到紫外光区和红外光区。 • 比色法用的单色光是来自滤光片，谱带宽 度从40－120nm，精度不高，分光光度法则要 求近于真正单色光，其光谱带宽最大不超过3 －5nm，在紫外区可到1nm以下，来自棱镜或 光栅，具有较高的精度
紫外一可见分光光度法特点 (1)仪器设备和操作都比较简单,费用少,分析速度 较快。 (2)灵敏度较高。 (3)有较好的选择性。通过适当地选择测量条件 般可在多种组分共存的体系中,对某一种物质进行测 定 (4)精密度和准确度较高。在仪器设备和其他测量条 件较好的情况下,其相对误差可减小到1%-2%。 (5)用途广泛。医药、化工、冶金、环境保护、地质 等诸多领域-已成为必不可少的测试手段之一。 无机和有机物质-定性和定量测定结构分析。 2021/2/23 生物工程学院
2021/2/23 生物工程学院 7 三、紫外—可见分光光度法特点 • (1) 仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度 较快。 • (2)灵敏度较高。 • (3)有较好的选择性。通过适当地选择测量条件，一 般可在多种组分共存的体系中，对某一种物质进行测 定。 • (4)精密度和准确度较高。在仪器设备和其他测量条 件较好的情况下，其相对误差可减小到1％一2％。 • (5)用途广泛。医药、化工、冶金、环境保护、地质 等诸多领域---已成为必不可少的测试手段之一。 • 无机和有机物质--定性和定量测定,结构分析
第五章 光的基本性质 紫外-可见吸 收光谱分析法光的选择性吸收 Ultraviolet-visible molecular absorption 吸收光谱曲线 spectrometry, UV-VIS 四、紫外吸收光谱的 第二节光的吸收 生 五、有机物吸收光谱 与电子跃迁 2021/2/23 生物工程学院 8
2021/2/23 生物工程学院 8 第五章 紫外-可见吸 收光谱分析法 第二节 光的吸收 Ultraviolet-visible molecular absorption spectrometry, UV-VIS 一、光的基本性质 二、物质的颜色和对 光的选择性吸收 三、吸收光谱曲线 四、紫外吸收光谱的 产生 五、有机物吸收光谱 与电子跃迁
光的基本性质 光是一种电磁波,具有波动性和微粒性。 波动性 入v=C 微 粒 性 C E=hv=h 波长(或频率)定,光子的能量一定。波长越短, 光子的能量越大。 注:A,E个 2021/2/23 生物工程学院 9
2021/2/23 生物工程学院 9 • 一 、光的基本性质 • 光是一种电磁波，具有波动性和微粒性。 • 波动性 ＝C 微粒性 • 波长(或频率)一定，光子的能量一定。波长越短， 光子的能量越大。 注： ，E
自然界中存在各种不同波长的电磁波,电磁辐射(电磁 波按其波长可分为不同区域: Y一射线5*103~0.14mm X一射线103~10nm 远紫外10~200nm 近紫外200~400nm 可见光400~760nm 近红外0.75~25um 中红外2.5~50μm 远红外50~1000ym 微波01~100cm 无线电波1~1000m 分光光度法所使用的光谱范围在200nm-10(1p=1, 000nm)之间。其中200nm-400nm为紫外光区,400nm 760m为可见光区,760nm-10.00m为红外光区 2021/2/23 生物工程学院 10
2021/2/23 生物工程学院 10 • 自然界中存在各种不同波长的电磁波，电磁辐射(电磁 波)按其波长可分为不同区域： • 一射线 5*10-30.14nm • X一射线 10-310nm • 远紫外 10200nm • 近紫外 200400nm • 可见光 400760nm • 近红外 0.752.5m • 中红外 2.550m • 远红外 501000m • 微波 0.1100cm • 无线电波 11000m • 分光光度法所使用的光谱范围在200nm-10μ（1μ= 1, 000nm ）之间。其中200nm－400nm为紫外光区，400nm－ 760nm为可见光区，760nm－10,000nm为红外光区