第四章动物细胞培养制药工艺 1.制药动物细胞 2.动物细胞的生产特征 3.动物细胞培养基制备 4.动物细胞培养技术 5.重组人红细胞生成素的生产工艺
1. 制药动物细胞 2. 动物细胞的生产特征 3. 动物细胞培养基制备 4. 动物细胞培养技术 5. 重组人红细胞生成素的生产工艺 第四章 动物细胞培养制药工艺
细胞培养制药工艺 细胞系 4.1 制药动物细胞 动物细胞的结构与功能 制药动物细胞的种类 生产用细胞系
动物细胞的结构与功能 制药动物细胞的种类 生产用细胞系 4.1 制药动物细胞 细胞培养制药工艺 细胞系
细胞培养制药工艺 细胞系 411动物细胞的结构与功能 1. 形态特征 细胞源 细胞质 分部小湘 细胞膜 细压核 细胞质 在尔据体 细胞核 线粒体 粗糙内质网 没有细胞壁 亚细胞器 光滑内质网 过氧化物商体
1. 形态特征 细胞膜 细胞质 细胞核 没有细胞壁 亚细胞器 4.1.1动物细胞的结构与功能 细胞培养制药工艺 细胞系
细胞培养制药工艺 细胞系 2、动物细胞培养的代谢特征 葡萄糖和谷氨酰氨：能量和合成代谢的前体。 葡萄糖限制：通过增加谷氨酰氨消耗得以补偿，反之 亦然。 葡萄糖代谢：糖酵解为主，生成丙酮酸和乳酸，乳酸 泌到胞外并在培养液中积累。另一条途径为TCA循环 ,彻底氧化产生CO,和水。一小部分为戊糖磷酸途径 ,生成4、5、7碳糖和NADPH。 中间产物进入脂肪酸代谢、核酸代谢和氨基酸代谢。 葡萄糖代谢旺盛，产生大量乳酸，对细胞有毒性
2、动物细胞培养的代谢特征 葡萄糖和谷氨酰氨：能量和合成代谢的前体。 葡萄糖限制:通过增加谷氨酰氨消耗得以补偿，反之 亦然。 葡萄糖代谢：糖酵解为主，生成丙酮酸和乳酸，乳酸 分泌到胞外并在培养液中积累。另一条途径为TCA循环 ，彻底氧化产生CO2和水。一小部分为戊糖磷酸途径 ，生成4、5、7碳糖和NADPH。 中间产物进入脂肪酸代谢、核酸代谢和氨基酸代谢。 葡萄糖代谢旺盛，产生大量乳酸，对细胞有毒性。 细胞培养制药工艺 细胞系
细胞培养制药工艺 细胞系 G1n代谢：脱氨、转氨等作用，合成其他必需和非必需 氨基酸。 Gln氮源，Gln受限，增加其他氨基酸消耗以补偿。 离体动物细胞系，转氨作用是主要代谢途径。谷氨酰 胺在脱氨酶的催化下，脱氨产生氨，对细胞有毒性。 谷氨酰氨与丙酮酸发生转氨作用，生成丙氨酸，进入 培养液并积累。 Gln能量：G1u转化为a-酮戊二酸，进入TCA循环。 流加葡萄糖或谷氨酰氨，控制整个代谢过程，避免有 毒废物的积累
Gln代谢：脱氨、转氨等作用，合成其他必需和非必需 氨基酸。 Gln氮源，Gln受限，增加其他氨基酸消耗以补偿。 离体动物细胞系，转氨作用是主要代谢途径。谷氨酰 胺在脱氨酶的催化下，脱氨产生氨，对细胞有毒性。 谷氨酰氨与丙酮酸发生转氨作用，生成丙氨酸，进入 培养液并积累。 Gln能量:Glu转化为α-酮戊二酸，进入TCA循环。 流加葡萄糖或谷氨酰氨，控制整个代谢过程，避免有 毒废物的积累。 细胞培养制药工艺 细胞系
细胞培养制药工艺 细胞系 3、蛋白质糖基化与分泌表达 蛋白质合成场所：粗糙内质网上的核糖体 糖基化场所：内质网合成各种糖类，粗糙内质 网腔内和高尔基体，加工修饰。 不同细胞系糖基化特征不同，选择适宜细胞 系。 对于分泌型蛋白，分泌泡与细胞膜融合，释放 到胞外，完成了蛋白质的分泌表达
3、蛋白质糖基化与分泌表达 蛋白质合成场所：粗糙内质网上的核糖体 糖基化场所：内质网合成各种糖类，粗糙内质 网腔内和高尔基体，加工修饰。 不同细胞系糖基化特征不同，选择适宜细胞 系。 对于分泌型蛋白，分泌泡与细胞膜融合，释放 到胞外，完成了蛋白质的分泌表达。 细胞培养制药工艺 细胞系
细胞培养制药工艺 细胞系 4.1.2制药动物细胞的种类 目前用于制药的动物细胞有4类： 原代细胞系 二倍体细胞系 异倍体细胞系 融合的或重组的工程细胞系
4.1.2 制药动物细胞的种类 目前用于制药的动物细胞有4类： 原代细胞系 二倍体细胞系 异倍体细胞系 融合的或重组的工程细胞系 细胞培养制药工艺 细胞系
细胞培养制药工艺 细胞系 细胞系分类 来源：原代细胞，传代细胞。 寿命：有限细胞系，无限细胞系。 染色体数目：二倍体细胞系，异倍体细胞系。 获得方式：工程细胞系，癌变细胞系。 生长特性：贴壁依赖型，非贴壁依赖型细胞 系
细胞系分类 来源：原代细胞，传代细胞。 寿命：有限细胞系，无限细胞系。 染色体数目：二倍体细胞系，异倍体细胞系。 获得方式：工程细胞系，癌变细胞系。 生长特性：贴壁依赖型，非贴壁依赖型细胞 系。 细胞培养制药工艺 细胞系
细胞培养制药工艺 细胞系 1.原代细胞primary cell 概念：从动物体内直接分离得到的细胞。 特点：生长分裂不旺盛，与体内细胞相似 应用：药物检测实验，药理研究。 生产药品：鸡胚细胞，兔或鼠肾细胞、淋巴细胞
1.原代细胞 primary cell 概念：从动物体内直接分离得到的细胞。 特点：生长分裂不旺盛，与体内细胞相似 应用：药物检测实验，药理研究。 生产药品：鸡胚细胞，兔或鼠肾细胞、淋巴细胞。 细胞培养制药工艺 细胞系
细胞培养制药工艺 细胞系 2.传代细胞passage ce|l 概念：原代细胞转接后培养的细胞。 特点：细胞分裂增殖旺盛，二倍体核型。 二倍体细胞系：原代细胞经过传代、筛选、克隆 、纯化后， 获得具一定特征的细胞系。 药品生产：W1一38、MRC一5、2BS等
2.传代细胞 passage cell 概念：原代细胞转接后培养的细胞。 特点：细胞分裂增殖旺盛，二倍体核型。 二倍体细胞系：原代细胞经过传代、筛选、克隆 、 纯化后，获得具一定特征的细胞系。 药品生产：WI－38、MRC－5、2BS等。 细胞培养制药工艺 细胞系