实验 从牛乳中分离酪蛋白 一、目的要求 掌握从牛乳中分离酪蛋白的原理,学会操作方法。 二、实验原理 牛乳中含有多种蛋白质,它们有着不同的性质,在脱脂牛乳的蛋白质中酪蛋 白约占 80%,酪蛋白是一类含磷蛋白质的复杂混合物。利用等电点时溶解度最低 的原理,将牛乳的 pH 调到 4.7(酪蛋白的等电点)时,酪蛋白就沉淀析出。再 用乙醇和乙醚洗涤沉淀,除去脂类杂质,便可制得纯酪蛋白。 三、实验器材 恒温水浴、普通离心机、精密 pH 试纸或酸度计、布氏漏斗、抽滤瓶、表面 皿、离心管(80 mL)、量筒、烧杯(100 mL)、玻棒、电子天平。 新鲜牛乳。 四、实验试剂 1.95%乙醇 2.乙醚 3.0.2 mol/L 醋酸溶液 4.0.2 mol /L pH 4.7 醋酸–醋酸钠缓冲液 ,配制方法如下: 先分别配制 A 液和 B 液: A 液(0.2 mol / L 醋酸钠溶液) 称取分析纯醋酸钠(NaAc·3H2O)27.22 g 溶于蒸馏水中,定容至 1 000 mL。 B 液(0.2 mol / L 醋酸溶液) 称取分析纯冰醋酸(含量大于 99.8%)12.0 g 溶于蒸馏水中,定容至 1000 mL。 取 A 液 885 mL 和 B 液 615 mL 混合,即得 pH 4.7 的醋酸-醋酸钠缓冲液 1 500 mL。 五、操作步骤 1.取 30 mL 鲜牛乳,置 100 mL 烧杯中,加热至 40 ℃。在搅拌下慢慢加入 预热至 40 ℃、pH 4.7 的醋酸–醋酸钠缓冲溶液 40 mL,用精密 pH 试纸或酸度 计检查 pH,再用 0.2 mol / L 醋酸溶液调至 pH 4.7,静置冷至室温。 2.悬浮液出现大量沉淀后,转移至离心管中,在 3 500 r / min 下离心 10 min,弃去上清液,所得沉淀为酪蛋白的粗制品。 3.用 40 mL 蒸馏水洗涤沉淀,将沉淀搅起,同上离心分离职,弃去上清液。 加入 30 mL 95%乙醇,把沉淀充分搅起至成悬浊液,将其转移到布氏漏斗中抽滤, 先用 30 mL 95%乙醇洗涤,再用 30 mL 乙醚洗涤,最后抽干制得酪蛋白。 4.将酪蛋白白色粉末摊在表面皿上风干,于电子天平称重,计算得率(牛 乳中酪蛋白理论含量为 3.5 g/100 mL)。 六、问题与思考 1.为什么在牛乳中加入缓冲液后,还要再加几滴 0.2 mol / L 的醋酸溶液? 2.用乙醇洗涤沉淀时,为什么要充分将沉淀搅起成悬浊液?
实验 从牛乳中分离酪蛋白 一、目的要求 掌握从牛乳中分离酪蛋白的原理,学会操作方法。 二、实验原理 牛乳中含有多种蛋白质,它们有着不同的性质,在脱脂牛乳的蛋白质中酪蛋 白约占 80%,酪蛋白是一类含磷蛋白质的复杂混合物。利用等电点时溶解度最低 的原理,将牛乳的 pH 调到 4.7(酪蛋白的等电点)时,酪蛋白就沉淀析出。再 用乙醇和乙醚洗涤沉淀,除去脂类杂质,便可制得纯酪蛋白。 三、实验器材 恒温水浴、普通离心机、精密 pH 试纸或酸度计、布氏漏斗、抽滤瓶、表面 皿、离心管(80 mL)、量筒、烧杯(100 mL)、玻棒、电子天平。 新鲜牛乳。 四、实验试剂 1.95%乙醇 2.乙醚 3.0.2 mol/L 醋酸溶液 4.0.2 mol /L pH 4.7 醋酸–醋酸钠缓冲液 ,配制方法如下: 先分别配制 A 液和 B 液: A 液(0.2 mol / L 醋酸钠溶液) 称取分析纯醋酸钠(NaAc·3H2O)27.22 g 溶于蒸馏水中,定容至 1 000 mL。 B 液(0.2 mol / L 醋酸溶液) 称取分析纯冰醋酸(含量大于 99.8%)12.0 g 溶于蒸馏水中,定容至 1000 mL。 取 A 液 885 mL 和 B 液 615 mL 混合,即得 pH 4.7 的醋酸-醋酸钠缓冲液 1 500 mL。 五、操作步骤 1.取 30 mL 鲜牛乳,置 100 mL 烧杯中,加热至 40 ℃。在搅拌下慢慢加入 预热至 40 ℃、pH 4.7 的醋酸–醋酸钠缓冲溶液 40 mL,用精密 pH 试纸或酸度 计检查 pH,再用 0.2 mol / L 醋酸溶液调至 pH 4.7,静置冷至室温。 2.悬浮液出现大量沉淀后,转移至离心管中,在 3 500 r / min 下离心 10 min,弃去上清液,所得沉淀为酪蛋白的粗制品。 3.用 40 mL 蒸馏水洗涤沉淀,将沉淀搅起,同上离心分离职,弃去上清液。 加入 30 mL 95%乙醇,把沉淀充分搅起至成悬浊液,将其转移到布氏漏斗中抽滤, 先用 30 mL 95%乙醇洗涤,再用 30 mL 乙醚洗涤,最后抽干制得酪蛋白。 4.将酪蛋白白色粉末摊在表面皿上风干,于电子天平称重,计算得率(牛 乳中酪蛋白理论含量为 3.5 g/100 mL)。 六、问题与思考 1.为什么在牛乳中加入缓冲液后,还要再加几滴 0.2 mol / L 的醋酸溶液? 2.用乙醇洗涤沉淀时,为什么要充分将沉淀搅起成悬浊液?