7. 维生素的测定 7.1 维生素A的测定—— 比色法 7.2 维生素C（抗坏血酸）的测定
7. 维生素的测定 7.1 维生素A的测定—— 比色法 7.2 维生素C（抗坏血酸）的测定
7.1维生素A的测定 （1）原理 在氯仿溶液中，维生素A与三氯化锑 可相互作用，生成蓝色可溶性配合物，其 颜色深浅与溶液中所含维生素A的含量成 正比。该物质在620nm波长处有最大吸收 峰，其吸光度与维生素A的含量在一定的 范围内成正比，故可比色测定
7.1维生素A的测定 （1）原理 在氯仿溶液中，维生素A与三氯化锑 可相互作用，生成蓝色可溶性配合物，其 颜色深浅与溶液中所含维生素A的含量成 正比。该物质在620nm波长处有最大吸收 峰，其吸光度与维生素A的含量在一定的 范围内成正比，故可比色测定
（2）试剂 ① 无水硫酸钠 不吸附维生素A ② 乙酸酐 ③ 无水乙醚 不含过氧化物 ④ 无水乙醇 不含醛类物质 ⑤ 三氯甲烷 不含分解物 ⑥ 250g／L三氯化锑一三氯甲烷溶液 ⑦ 1：1氢氧化钾溶液 ⑧ 0.5mol／L氢氧化钾溶液 ⑨ 维生素A标准溶液 ⑩ 酚酞指示剂
（2）试剂 ① 无水硫酸钠 不吸附维生素A ② 乙酸酐 ③ 无水乙醚 不含过氧化物 ④ 无水乙醇 不含醛类物质 ⑤ 三氯甲烷 不含分解物 ⑥ 250g／L三氯化锑一三氯甲烷溶液 ⑦ 1：1氢氧化钾溶液 ⑧ 0.5mol／L氢氧化钾溶液 ⑨ 维生素A标准溶液 ⑩ 酚酞指示剂
（3）操作步骤 ① 样品处理 ② 标准曲线的绘制 ③ 样品测定 （4）结果计算
（3）操作步骤 ① 样品处理 ② 标准曲线的绘制 ③ 样品测定 （4）结果计算
（5）说明及讨论 ① 维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕 色玻璃仪器。 ② 乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象。在提取、洗涤操作中， 不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇破乳。 ③ 所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比 色测定。故在每毫升氯仿中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。另外， 由于三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要用稀盐酸浸泡 后再清洗。 ④ 由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，通常生成6S 后便开始比色，因此要求反应在比色管中进行，产生蓝色后立即读 取吸光度。 ⑤ 如果样品中含β-胡萝卜素（如奶粉、禽蛋等食品）干扰测定，可将 浓缩蒸干的样品用正己烷溶解，以氧化铝为吸附剂，丙酮、乙烷混 合液为洗脱剂进行柱层析。 ⑥ 比色法除用三氯化锑做显色剂外，还可用三氟乙酸、三氯乙酸做显 色剂。其中三氟乙酸没有遇水发生沉淀而使溶液混浊的缺点
（5）说明及讨论 ① 维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕 色玻璃仪器。 ② 乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象。在提取、洗涤操作中， 不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇破乳。 ③ 所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比 色测定。故在每毫升氯仿中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。另外， 由于三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要用稀盐酸浸泡 后再清洗。 ④ 由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，通常生成6S 后便开始比色，因此要求反应在比色管中进行，产生蓝色后立即读 取吸光度。 ⑤ 如果样品中含β-胡萝卜素（如奶粉、禽蛋等食品）干扰测定，可将 浓缩蒸干的样品用正己烷溶解，以氧化铝为吸附剂，丙酮、乙烷混 合液为洗脱剂进行柱层析。 ⑥ 比色法除用三氯化锑做显色剂外，还可用三氟乙酸、三氯乙酸做显 色剂。其中三氟乙酸没有遇水发生沉淀而使溶液混浊的缺点
7.2 维生素C（抗坏血酸）的测定 维生素C是一种己糖醛基酸，有抗坏血病 的作用，所以又称作抗坏血酸。新鲜的水 果蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、猕猴桃、 柑橘等食品中含量尤为丰富。 测定维生素C常用的方法有靛酚滴定法、 苯肼比色法、荧光法和高效液相色谱法等
7.2 维生素C（抗坏血酸）的测定 维生素C是一种己糖醛基酸，有抗坏血病 的作用，所以又称作抗坏血酸。新鲜的水 果蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、猕猴桃、 柑橘等食品中含量尤为丰富。 测定维生素C常用的方法有靛酚滴定法、 苯肼比色法、荧光法和高效液相色谱法等
（1）2，6—二氯靛酚滴定法原理 还原型抗坏血酸可以还原染料2，6—二氯 靛酚。该染料在酸性溶液中是粉红色（在 中性或碱性溶液中呈蓝色），被还原后颜 色消失；还原型抗坏血酸还原染料后，本 身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干 扰时，一定量的样品提取液还原标准染料 液的量，与样品中抗坏血酸含量成正比
（1）2，6—二氯靛酚滴定法原理 还原型抗坏血酸可以还原染料2，6—二氯 靛酚。该染料在酸性溶液中是粉红色（在 中性或碱性溶液中呈蓝色），被还原后颜 色消失；还原型抗坏血酸还原染料后，本 身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干 扰时，一定量的样品提取液还原标准染料 液的量，与样品中抗坏血酸含量成正比
（2）试剂 ① 1%草酸溶液（m/V） ② 2%草酸溶液（m/V） 同2，4二硝基苯肼法。 ③ 抗坏血酸标准溶液 ④ 2，6-二氯靛酚溶液 ⑤ 0.000167mol／L碘酸钾标准溶液 ⑥ 1%淀粉溶液（m/V） ⑦ 6%碘化钾溶液（m/V）
（2）试剂 ① 1%草酸溶液（m/V） ② 2%草酸溶液（m/V） 同2，4二硝基苯肼法。 ③ 抗坏血酸标准溶液 ④ 2，6-二氯靛酚溶液 ⑤ 0.000167mol／L碘酸钾标准溶液 ⑥ 1%淀粉溶液（m/V） ⑦ 6%碘化钾溶液（m/V）
（3）测定步骤 ① 提取 鲜样的制备 干样的制备 ② 滴定 （4）结果计算
（3）测定步骤 ① 提取 鲜样的制备 干样的制备 ② 滴定 （4）结果计算
（5）说明 ① 所有试剂最好用重蒸馏水配制。 ② 样品采取后，应浸泡在已知量的2%草酸溶液中，以 防止维生素C氧化损失。测定时整个操作过程要迅速， 防止抗坏血酸被氧化。 ③ 若测动物性样品，须用10%三氯乙酸代替2%草酸溶 液提取。 ④ 若样品滤液颜色较深，影响滴定终点观察，可加入白 陶土再过滤。白陶土使用前应测定回收率。 ⑤ 若样品中含有Fe2+ 、Cu2+ 、Sn2+ 、亚硫酸盐、硫代硫 酸盐等还原性杂质时，会使结果偏高
（5）说明 ① 所有试剂最好用重蒸馏水配制。 ② 样品采取后，应浸泡在已知量的2%草酸溶液中，以 防止维生素C氧化损失。测定时整个操作过程要迅速， 防止抗坏血酸被氧化。 ③ 若测动物性样品，须用10%三氯乙酸代替2%草酸溶 液提取。 ④ 若样品滤液颜色较深，影响滴定终点观察，可加入白 陶土再过滤。白陶土使用前应测定回收率。 ⑤ 若样品中含有Fe2+ 、Cu2+ 、Sn2+ 、亚硫酸盐、硫代硫 酸盐等还原性杂质时，会使结果偏高