2 有机磷农药残留量的测定 2.1 定性检验－刚果红法和纸上斑点法 2.1.1 刚果红法 2.1.1.1 原理 利用样液中的有机磷农药经溴氧化后，与刚果红作 用，生成蓝色化合物，来鉴别样品是否存在有有机磷 农药
2 有机磷农药残留量的测定 2.1 定性检验－刚果红法和纸上斑点法 2.1.1 刚果红法 2.1.1.1 原理 利用样液中的有机磷农药经溴氧化后，与刚果红作 用，生成蓝色化合物，来鉴别样品是否存在有有机磷 农药
2.1.1.2 操作步骤 取经粉碎的样品用苯浸泡、振摇，用滤纸过滤， 取滤液于蒸发皿上，加入100g／L甘油甲醇溶液1滴， 沥干，加1mL水混匀。将样液滴于定性滤纸上，挥发 干。将滤纸置于溴蒸气上熏5min，取出，在通气处将 溴挥发尽。滴人5g／L刚果红乙醇溶液，置于滤纸的 点样处，如果滤纸显示出蓝紫色则表示样品中有有机 磷存在。呈粉红色者则为溴的色泽
2.1.1.2 操作步骤 取经粉碎的样品用苯浸泡、振摇，用滤纸过滤， 取滤液于蒸发皿上，加入100g／L甘油甲醇溶液1滴， 沥干，加1mL水混匀。将样液滴于定性滤纸上，挥发 干。将滤纸置于溴蒸气上熏5min，取出，在通气处将 溴挥发尽。滴人5g／L刚果红乙醇溶液，置于滤纸的 点样处，如果滤纸显示出蓝紫色则表示样品中有有机 磷存在。呈粉红色者则为溴的色泽
2.1.2 纸上斑点法 2.1 .2.1原理 样液中的硫代磷酸酯类有机磷与2，6一二溴苯醌氯 酰亚胺，在溴蒸气作用下，形成各种有颜色的化合物， 用以鉴定是否存在有机磷及是哪一种有机磷。 2.1.2.2操作步骤 (1)2，6一二溴苯醌氯酰亚胺试纸 称取0．05g 2，6一二 溴苯醌氯酰亚胺，溶于10mL95 %(体积分数)乙醇中， 将定性滤纸浸湿，晾干备用。 (2)检验 吸取按刚果红法制备的样液滴，于2，6一二溴 苯醌氯酰亚胺试纸上，稍干，置于溴蒸气上蒸熏片刻， 呈现出不同颜色的斑点，根据所显示斑点的颜色鉴别属 于哪种有机磷农药。试验时，为防止色素干扰，试纸要 临时配制。有机磷农药呈色反应如表6-1所示
2.1.2 纸上斑点法 2.1 .2.1原理 样液中的硫代磷酸酯类有机磷与2，6一二溴苯醌氯 酰亚胺，在溴蒸气作用下，形成各种有颜色的化合物， 用以鉴定是否存在有机磷及是哪一种有机磷。 2.1.2.2操作步骤 (1)2，6一二溴苯醌氯酰亚胺试纸 称取0．05g 2，6一二 溴苯醌氯酰亚胺，溶于10mL95 %(体积分数)乙醇中， 将定性滤纸浸湿，晾干备用。 (2)检验 吸取按刚果红法制备的样液滴，于2，6一二溴 苯醌氯酰亚胺试纸上，稍干，置于溴蒸气上蒸熏片刻， 呈现出不同颜色的斑点，根据所显示斑点的颜色鉴别属 于哪种有机磷农药。试验时，为防止色素干扰，试纸要 临时配制。有机磷农药呈色反应如表6-1所示
表6一l 有机磷农药的呈色反应 农药种类 反应颜色 反应时间 3911 鲜黄，周围较深 5s-3min 1605 淡黄→紫红 30s-3min 1059 鲜黄→暗黄 30s-3min 4049 黄→黄棕 30s-5min 乐果 黄→橙黄 20s-5min M-74 淡土黄→暗紫红 30s-5min 三硫磷 土黄→杏红 15s-5min 1240 鲜黄→暗黄 30s-3min
表6一l 有机磷农药的呈色反应 农药种类 反应颜色 反应时间 3911 鲜黄，周围较深 5s-3min 1605 淡黄→紫红 30s-3min 1059 鲜黄→暗黄 30s-3min 4049 黄→黄棕 30s-5min 乐果 黄→橙黄 20s-5min M-74 淡土黄→暗紫红 30s-5min 三硫磷 土黄→杏红 15s-5min 1240 鲜黄→暗黄 30s-3min
2.2 有机磷农药残留量的定量检测 2.2.1原理 气相色谱法－将样品的峰高或峰面积与标准品相 比较做定量分析。本法适用于水果、蔬菜、谷类的检 测。最低检出量为0.1－0.25ng, 2.2.2仪器和试剂 (1)仪器 组织捣碎机，粉碎机，旋转蒸发器，气相色 谱仪：附有火焰光度检测器(FPD)。 (2)试剂 丙酮，二氯甲烷，助滤剂Celiee545， 农药标准品：敌敌畏99％，速灭磷顺式60% ,久效磷99 %，甲拌磷98％，巴胺磷99％，二嗪农98％
2.2 有机磷农药残留量的定量检测 2.2.1原理 气相色谱法－将样品的峰高或峰面积与标准品相 比较做定量分析。本法适用于水果、蔬菜、谷类的检 测。最低检出量为0.1－0.25ng, 2.2.2仪器和试剂 (1)仪器 组织捣碎机，粉碎机，旋转蒸发器，气相色 谱仪：附有火焰光度检测器(FPD)。 (2)试剂 丙酮，二氯甲烷，助滤剂Celiee545， 农药标准品：敌敌畏99％，速灭磷顺式60% ,久效磷99 %，甲拌磷98％，巴胺磷99％，二嗪农98％
2.2.3 操作步骤 (1)标准溶液的配制 分别准确称取标准品，用 二氯甲烷为溶剂，分别配制成1.0mg／mL的标准 储备液，储于冰箱(4℃)中。使用时用二氯甲烷 分别稀释成1.0ug／mL的标准使用液。 (2)试样制备 取粮食样品粉碎，过20目筛制成粮 食试样；取水果、蔬菜样品洗净，晾干，去掉非 可食部分后制成待测试样。 (3)提取 ①称取50.00g水果、蔬菜试样，置于300mL烧 杯中，加入50mL水和100mL丙酮(总体积150mL)。 用组织捣碎机捣1～2min。匀浆液经铺有两层滤 纸和约10g Cellte545的布氏漏斗，减压抽滤。从 滤液中分取l00mL，移至500mL分液漏斗中
2.2.3 操作步骤 (1)标准溶液的配制 分别准确称取标准品，用 二氯甲烷为溶剂，分别配制成1.0mg／mL的标准 储备液，储于冰箱(4℃)中。使用时用二氯甲烷 分别稀释成1.0ug／mL的标准使用液。 (2)试样制备 取粮食样品粉碎，过20目筛制成粮 食试样；取水果、蔬菜样品洗净，晾干，去掉非 可食部分后制成待测试样。 (3)提取 ①称取50.00g水果、蔬菜试样，置于300mL烧 杯中，加入50mL水和100mL丙酮(总体积150mL)。 用组织捣碎机捣1～2min。匀浆液经铺有两层滤 纸和约10g Cellte545的布氏漏斗，减压抽滤。从 滤液中分取l00mL，移至500mL分液漏斗中
②称取25.00g谷物试样，置于300mL烧杯中，加入 50mL水和100mL丙酮，以下同上一步骤。 (4)净化 向以上两种滤液中，加人10～15g氯化钠，使呈 饱和状态。猛烈振摇2～3min，静置10min，使丙酮从 水相中盐析出来，水相用50mL二氯甲烷振摇2min，再 静置分层。将丙酮与二氯甲烷提取液合并，并经装有 20～30g无水硫酸钠的玻璃漏斗脱水，滤人250mL圆底 烧瓶中。再以约40mL二氯甲烷分数次洗涤容器和无水 硫酸钠，洗涤液也并入烧瓶中。用旋转蒸发器浓缩至 约2mL，浓缩液定量转移至5～25mL容量瓶中，加二 氯甲烷定容至刻度
②称取25.00g谷物试样，置于300mL烧杯中，加入 50mL水和100mL丙酮，以下同上一步骤。 (4)净化 向以上两种滤液中，加人10～15g氯化钠，使呈 饱和状态。猛烈振摇2～3min，静置10min，使丙酮从 水相中盐析出来，水相用50mL二氯甲烷振摇2min，再 静置分层。将丙酮与二氯甲烷提取液合并，并经装有 20～30g无水硫酸钠的玻璃漏斗脱水，滤人250mL圆底 烧瓶中。再以约40mL二氯甲烷分数次洗涤容器和无水 硫酸钠，洗涤液也并入烧瓶中。用旋转蒸发器浓缩至 约2mL，浓缩液定量转移至5～25mL容量瓶中，加二 氯甲烷定容至刻度
测定有机磷农药 的残留量 气相色谱条件 色谱柱：a．玻璃柱2.6m×3mm，填装涂有4.5 %(质量 分 数 )DC200+2.5 ％ ( 质 量 分 数 )OV-17 的 ChromosorbWAW DMCS(80～100目)的担体。b．玻 璃柱2.6m×3mm(i．d．)，填装涂有1.5%(质量分 数)DCOE-1的Chromosorb WAW I)MCS(60～80目)。 气体速度：氮气(N2 )50mL／min、氢气(H2 )100mL／ min、空气50mL／min。 温度：柱温240℃，汽化室260℃，检测器270℃。 测定：吸取2～5uL混合标准液及样品净化液，色谱 仪中，以保留时间定性。以试样的峰高或峰面积与 标准比较定量
测定有机磷农药 的残留量 气相色谱条件 色谱柱：a．玻璃柱2.6m×3mm，填装涂有4.5 %(质量 分 数 )DC200+2.5 ％ ( 质 量 分 数 )OV-17 的 ChromosorbWAW DMCS(80～100目)的担体。b．玻 璃柱2.6m×3mm(i．d．)，填装涂有1.5%(质量分 数)DCOE-1的Chromosorb WAW I)MCS(60～80目)。 气体速度：氮气(N2 )50mL／min、氢气(H2 )100mL／ min、空气50mL／min。 温度：柱温240℃，汽化室260℃，检测器270℃。 测定：吸取2～5uL混合标准液及样品净化液，色谱 仪中，以保留时间定性。以试样的峰高或峰面积与 标准比较定量
结 果 计 算 Xi= 式中 xi —i组分有机磷农药的含量，mg／kg Ai—试样中i组分的峰面积，积分单位 Asi —混合标准液中i组分的峰面积，积分单位 V1 —试样提取液的总体积，mL V2 —净化用提取液的总体积，mL V3 —浓缩后的定容体积，mL V4—进样体积，mL Esi—进入色谱仪中的i标准组分的质量，ng m—样品的质量，g
结 果 计 算 Xi= 式中 xi —i组分有机磷农药的含量，mg／kg Ai—试样中i组分的峰面积，积分单位 Asi —混合标准液中i组分的峰面积，积分单位 V1 —试样提取液的总体积，mL V2 —净化用提取液的总体积，mL V3 —浓缩后的定容体积，mL V4—进样体积，mL Esi—进入色谱仪中的i标准组分的质量，ng m—样品的质量，g