实验三 霉菌的形态观察 一、实验目的 (1)了解根霉、青霉、毛霉及曲霉的形态构造 (2)学会霉菌的载玻片培养法。 (3)进一步熟练显微镜的使用技术
实验三 霉菌的形态观察 一、实验目的 (1)了解根霉、青霉、毛霉及曲霉的形态构造 (2)学会霉菌的载玻片培养法。 (3)进一步熟练显微镜的使用技术
二、实验材料 1.菌种 黑曲霉、产黄青霉、腐乳毛霉、黑根霉。 2.培养基 察氏培养基 3.其他 显微镜、培养箱、培养皿、水浴锅、乳酸 石炭酸棉蓝染色液、载玻片、盖玻片、无菌水、 接种环、接种钩、解剖针、酒精灯、火柴、滤纸、 玻璃铅笔等
二、实验材料 1.菌种 黑曲霉、产黄青霉、腐乳毛霉、黑根霉。 2.培养基 察氏培养基 3.其他 显微镜、培养箱、培养皿、水浴锅、乳酸 石炭酸棉蓝染色液、载玻片、盖玻片、无菌水、 接种环、接种钩、解剖针、酒精灯、火柴、滤纸、 玻璃铅笔等
三、实验原理 霉菌为真核微生物，菌丝较粗大，有分枝或不分 枝的。菌丝体为五色透明或暗褐色至黑色，或呈现鲜 艳的颜色。在显微镜下观察时，菌丝皆呈管状。在固 体培养基上生长，为绒毛状或棉絮状。一些较高等的 霉菌丝状管道中皆有横隔，由横格状菌丝隔成许多细 胞。细胞易收缩变形，而且孢子很容易分散，所以制 标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。该染色液使细胞 不变形，具有防腐杀菌作用，且不易干燥．，能保持 较长时间，溶液本身呈蓝色，有一定的染色效果
三、实验原理 霉菌为真核微生物，菌丝较粗大，有分枝或不分 枝的。菌丝体为五色透明或暗褐色至黑色，或呈现鲜 艳的颜色。在显微镜下观察时，菌丝皆呈管状。在固 体培养基上生长，为绒毛状或棉絮状。一些较高等的 霉菌丝状管道中皆有横隔，由横格状菌丝隔成许多细 胞。细胞易收缩变形，而且孢子很容易分散，所以制 标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。该染色液使细胞 不变形，具有防腐杀菌作用，且不易干燥．，能保持 较长时间，溶液本身呈蓝色，有一定的染色效果
此外，为了得到清晰、完整并保持自然状态的霉菌形 态，还可以利用载玻片培养法或玻璃纸透析培养法进 行观察。载玻片培养法是在一定湿度的培养皿中，放 人一霉菌载片培养物，并盖上一块盖玻片，使霉菌在 一狭窄的空隙中生长、繁殖便于在显微镜下观察霉菌 的特殊形态构造，如曲霉的足细胞、分生孢子、顶囊 等生长情况。并且还可在同一标本上观察到它们不同 阶段的生长、发育状况。玻璃纸透析培养法，是利用 玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于 琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃之间 取一小片，贴放在载玻片上，置于显微镜下观察。本 实验以制片观察和载玻片培养观察为主
此外，为了得到清晰、完整并保持自然状态的霉菌形 态，还可以利用载玻片培养法或玻璃纸透析培养法进 行观察。载玻片培养法是在一定湿度的培养皿中，放 人一霉菌载片培养物，并盖上一块盖玻片，使霉菌在 一狭窄的空隙中生长、繁殖便于在显微镜下观察霉菌 的特殊形态构造，如曲霉的足细胞、分生孢子、顶囊 等生长情况。并且还可在同一标本上观察到它们不同 阶段的生长、发育状况。玻璃纸透析培养法，是利用 玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于 琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃之间 取一小片，贴放在载玻片上，置于显微镜下观察。本 实验以制片观察和载玻片培养观察为主
四、操作方法 (一)制片观察法 (1)于一洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝溶 液，用解剖针或接种钩从菌落边缘处取少量带有 孢子的菌丝于染色液中，再细心地把菌丝挑散开， 然后用盖玻片盖上，注意不要产生气泡。 (2)置于显微镜下，观察霉菌的形态
四、操作方法 (一)制片观察法 (1)于一洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝溶 液，用解剖针或接种钩从菌落边缘处取少量带有 孢子的菌丝于染色液中，再细心地把菌丝挑散开， 然后用盖玻片盖上，注意不要产生气泡。 (2)置于显微镜下，观察霉菌的形态
(二)载玻片培养观察法 1.无菌培养皿的准备 在一洁净干燥的培养皿内，放一铝丝制载玻片架， 再放人分别用纸包好的洁净载玻片1-2片及盖玻片 1-2片，然后盖上皿盖，包扎后灭菌备用
(二)载玻片培养观察法 1.无菌培养皿的准备 在一洁净干燥的培养皿内，放一铝丝制载玻片架， 再放人分别用纸包好的洁净载玻片1-2片及盖玻片 1-2片，然后盖上皿盖，包扎后灭菌备用
2.霉菌载玻片培养物的制备 （1）取约3ml经灭菌后的察氏培养基试管，标上青(毛、 根或曲)霉字样。 （2）以无菌操作方式取出无菌培养皿中的载玻片和盖 玻片，打开备用。 （3）取一标好字样的试管培养基，于酒精灯上以微火 融化
2.霉菌载玻片培养物的制备 （1）取约3ml经灭菌后的察氏培养基试管，标上青(毛、 根或曲)霉字样。 （2）以无菌操作方式取出无菌培养皿中的载玻片和盖 玻片，打开备用。 （3）取一标好字样的试管培养基，于酒精灯上以微火 融化
(4)待融化后的培养基冷却至45t左右时，接人标明菌 名的相应霉菌孢子一环，搅拌均匀，立即取大约3-4 环于载玻片中央，然后迅速盖上无菌盖玻片，并于载 玻片右上角标明菌名。 (5)往培养皿中倒人约3ml的无菌水。 (6)将上述制备好的载玻片置于培养皿中的玻片架上， 盖上皿盖，置于28℃培养箱中培养48-72h，取出，置 于显微镜下观察霉菌的形态
(4)待融化后的培养基冷却至45t左右时，接人标明菌 名的相应霉菌孢子一环，搅拌均匀，立即取大约3-4 环于载玻片中央，然后迅速盖上无菌盖玻片，并于载 玻片右上角标明菌名。 (5)往培养皿中倒人约3ml的无菌水。 (6)将上述制备好的载玻片置于培养皿中的玻片架上， 盖上皿盖，置于28℃培养箱中培养48-72h，取出，置 于显微镜下观察霉菌的形态
3.黑曲霉平板培养物的制备 (1)在水浴锅中，融化大试管察氏培养基1管。 (2)将上述以融化的培养基以无菌操作方式注入已灭 过菌的空培养皿中，待凝。 (3)于上述培养皿中央，点上黑曲霉孢子少许。 (4)置于28t培养箱内培养48h后，取出，用低倍镜观 察曲霉的足细胞和匍甸菌丝
3.黑曲霉平板培养物的制备 (1)在水浴锅中，融化大试管察氏培养基1管。 (2)将上述以融化的培养基以无菌操作方式注入已灭 过菌的空培养皿中，待凝。 (3)于上述培养皿中央，点上黑曲霉孢子少许。 (4)置于28t培养箱内培养48h后，取出，用低倍镜观 察曲霉的足细胞和匍甸菌丝
(三)玻璃纸透析培养观察法 (1)向霉菌斜面试管中加入5ml无菌水洗下孢子，制 成孢子悬液； (2)用无菌镊子将已灭菌的直径与培养皿相同的圆形 玻璃纸覆盖在察氏培养基平板上； (3)用1ml的无菌移液管吸取0.2ml孢子悬液于上述玻 璃纸平板上，并用无菌玻璃棒涂抹均匀； (4)置于28t培养箱内培养48h后，取出培养皿。打开 皿盖，用镊子将玻璃纸与培养基分开，再用剪刀取 一小片，置于载玻片上，用显微镜观察其特殊形态
(三)玻璃纸透析培养观察法 (1)向霉菌斜面试管中加入5ml无菌水洗下孢子，制 成孢子悬液； (2)用无菌镊子将已灭菌的直径与培养皿相同的圆形 玻璃纸覆盖在察氏培养基平板上； (3)用1ml的无菌移液管吸取0.2ml孢子悬液于上述玻 璃纸平板上，并用无菌玻璃棒涂抹均匀； (4)置于28t培养箱内培养48h后，取出培养皿。打开 皿盖，用镊子将玻璃纸与培养基分开，再用剪刀取 一小片，置于载玻片上，用显微镜观察其特殊形态