现代生物学实验（三）— 微生物与免疫学实验教案 课程名称: 微生物与免疫学实验 英文名称: Microbiology and Immunology Laboratory 课程编号: 110026 课程学时：108 学时 课程学分：3.0 学分 教师姓名: 郑忠辉 张连茹 邬小兵 前导课程：微生物学（理论课） 教学方式: 实验及技术理论讲授 考试方式: 平时考核＋笔试＋实验操作考试 一、教学目标和要求 微生物学与免疫学实验是生物学重要的基础课之一。本课程的目的是使学生 掌握和了解微生物学与免疫学的主要研究方法与技术，巩固和加深基础理论知 识，提高分析、解决问题的能力和开拓创新能力，培养学生严肃、严密、严格、 求实的科学态度，为从事微生物学与免疫学的研究和应用打下基础。 要求学生要做好实验课前的预习，明确每次实验的目的与基本步骤。在实验 中要有严紧的科学态度，对实验过程中出现的现象和问题，要仔细思考和分析； 认真做好每次实验的实验数据记录及处理工作。 二、主要实验内容 1. 土壤细菌的分离及总数测定 2. 微生物的形态观察与鉴定 3. 消毒与灭菌效果的测定 4. 海洋放线菌抗菌活性菌株的筛选 5. 酵母胞外多糖的发酵及其测定 6. 经典血清学反应 7. 巨噬细胞的收集和观察 8. 免疫标记技术 三、主要教学方法 以学生动手实验为主，结合课堂讲授、示范操作及多媒体教学。 四、使用教材及主要参考书 使用教材： 1、林加涵等主编. 现代生物学实验（下册）. 北京：高等教育出版社，2001. 2、编补充讲义
现代生物学实验（三）— 微生物与免疫学实验教案 课程名称: 微生物与免疫学实验 英文名称: Microbiology and Immunology Laboratory 课程编号: 110026 课程学时：108 学时 课程学分：3.0 学分 教师姓名: 郑忠辉 张连茹 邬小兵 前导课程：微生物学（理论课） 教学方式: 实验及技术理论讲授 考试方式: 平时考核＋笔试＋实验操作考试 一、教学目标和要求 微生物学与免疫学实验是生物学重要的基础课之一。本课程的目的是使学生 掌握和了解微生物学与免疫学的主要研究方法与技术，巩固和加深基础理论知 识，提高分析、解决问题的能力和开拓创新能力，培养学生严肃、严密、严格、 求实的科学态度，为从事微生物学与免疫学的研究和应用打下基础。 要求学生要做好实验课前的预习，明确每次实验的目的与基本步骤。在实验 中要有严紧的科学态度，对实验过程中出现的现象和问题，要仔细思考和分析； 认真做好每次实验的实验数据记录及处理工作。 二、主要实验内容 1. 土壤细菌的分离及总数测定 2. 微生物的形态观察与鉴定 3. 消毒与灭菌效果的测定 4. 海洋放线菌抗菌活性菌株的筛选 5. 酵母胞外多糖的发酵及其测定 6. 经典血清学反应 7. 巨噬细胞的收集和观察 8. 免疫标记技术 三、主要教学方法 以学生动手实验为主，结合课堂讲授、示范操作及多媒体教学。 四、使用教材及主要参考书 使用教材： 1、林加涵等主编. 现代生物学实验（下册）. 北京：高等教育出版社，2001. 2、编补充讲义
主要参考书： 1、赵斌，何绍江主编. 微生物学实验. 北京：科学出版社，2002. 2、沈萍等主编. 微生物学实验. 第三版. 北京：高等教育出版社，1999 3、柳忠辉等主编.免疫学常用实验技术.北京：科学出版社，2002 年 五、实验项目 模 块 1：土壤细菌的分离及总数测定 1、培养基的配制与灭菌 2、土壤细菌的分离与纯化 3、土壤中细菌总数的测定 模 块 2：微生物的形态观察与鉴定 1、细菌的革兰氏染色 2、细菌的芽孢染色 3、大分子物质的水解试验 4、糖发酵试验 5、甲基红试验 6、伏-普试验 7、柠檬酸盐试验 8、细菌的快速鉴定（细菌自动鉴定系统 BBL CRYSTAL） 9、霉菌的形态观察与鉴定 模 块 3：消毒与灭菌效果的测定 1、中和剂的选择 2、化学消毒剂杀菌效果的定量测定 模 块 4：海洋放线菌的分离及抗菌活性菌株的筛选 1、放线菌的选择分离与计数 2、放线菌形态的观察 3、双层琼脂扩散法筛选抗菌活性菌株 模 块 5：酵母胞外多糖的发酵及其测定 1、酵母胞外多糖的液体发酵 2、酵母子囊孢子的观察 3、酵母胞外多糖的提取与测定 模 块 6：经典血清学反应 1、单向琼脂扩散试验 2、双向琼脂扩散试验 3、免疫电泳
主要参考书： 1、赵斌，何绍江主编. 微生物学实验. 北京：科学出版社，2002. 2、沈萍等主编. 微生物学实验. 第三版. 北京：高等教育出版社，1999 3、柳忠辉等主编.免疫学常用实验技术.北京：科学出版社，2002 年 五、实验项目 模 块 1：土壤细菌的分离及总数测定 1、培养基的配制与灭菌 2、土壤细菌的分离与纯化 3、土壤中细菌总数的测定 模 块 2：微生物的形态观察与鉴定 1、细菌的革兰氏染色 2、细菌的芽孢染色 3、大分子物质的水解试验 4、糖发酵试验 5、甲基红试验 6、伏-普试验 7、柠檬酸盐试验 8、细菌的快速鉴定（细菌自动鉴定系统 BBL CRYSTAL） 9、霉菌的形态观察与鉴定 模 块 3：消毒与灭菌效果的测定 1、中和剂的选择 2、化学消毒剂杀菌效果的定量测定 模 块 4：海洋放线菌的分离及抗菌活性菌株的筛选 1、放线菌的选择分离与计数 2、放线菌形态的观察 3、双层琼脂扩散法筛选抗菌活性菌株 模 块 5：酵母胞外多糖的发酵及其测定 1、酵母胞外多糖的液体发酵 2、酵母子囊孢子的观察 3、酵母胞外多糖的提取与测定 模 块 6：经典血清学反应 1、单向琼脂扩散试验 2、双向琼脂扩散试验 3、免疫电泳
4、间接凝集反应测定人血清类风湿因子 模 块 7：小鼠腹腔巨噬细胞的收集和观察 1、小鼠的处死和固定 2、巨噬细胞的收集，沉淀和制片 3、巨噬细胞的形态观察 模 块 8：免疫标记技术 1、血清抗体的纯化 2、辣根过氧化物酶标记抗体（过碘酸盐法） 3、双抗体夹心法测定人血清中 IgG 抗体含量 模 块 1：土壤细菌的分离及总数测定 教学要求 1. 掌握配制培养基的一般方法和步骤。 2. 了解各种灭菌方法的基本原理及应用范围，掌握实验室高压蒸汽灭 菌及干热灭菌的操作方法。 3. 了解微生物分离和纯化方法，掌握纯培养分离技术、无菌操作技术。 4. 了解各种微生物数量测定方法的基本原理及应用范围，掌握平板菌 落计数的操作方法。 教学学时 18 学时 讲授的内容 1. 微生物培养基的分类、用途、配制方法。 2. 各种灭菌方法的基本原理、应用范围、操作方法及注意事项。 3. 纯培养分离技术、无菌操作技术。 4. 各种微生物数量测定方法的基本原理及应用范围，平板菌落计数法的操 作步骤和注意事项。 实验项目 1、培养基的配制与灭菌 2、土壤细菌的分离与纯化 3、土壤中细菌总数的测定 应学习的技术和方法 培养基制作和灭菌技术、无菌操作技术、纯培养分离技术、微生物的接种技 术、微生物数量的测定方法
4、间接凝集反应测定人血清类风湿因子 模 块 7：小鼠腹腔巨噬细胞的收集和观察 1、小鼠的处死和固定 2、巨噬细胞的收集，沉淀和制片 3、巨噬细胞的形态观察 模 块 8：免疫标记技术 1、血清抗体的纯化 2、辣根过氧化物酶标记抗体（过碘酸盐法） 3、双抗体夹心法测定人血清中 IgG 抗体含量 模 块 1：土壤细菌的分离及总数测定 教学要求 1. 掌握配制培养基的一般方法和步骤。 2. 了解各种灭菌方法的基本原理及应用范围，掌握实验室高压蒸汽灭 菌及干热灭菌的操作方法。 3. 了解微生物分离和纯化方法，掌握纯培养分离技术、无菌操作技术。 4. 了解各种微生物数量测定方法的基本原理及应用范围，掌握平板菌 落计数的操作方法。 教学学时 18 学时 讲授的内容 1. 微生物培养基的分类、用途、配制方法。 2. 各种灭菌方法的基本原理、应用范围、操作方法及注意事项。 3. 纯培养分离技术、无菌操作技术。 4. 各种微生物数量测定方法的基本原理及应用范围，平板菌落计数法的操 作步骤和注意事项。 实验项目 1、培养基的配制与灭菌 2、土壤细菌的分离与纯化 3、土壤中细菌总数的测定 应学习的技术和方法 培养基制作和灭菌技术、无菌操作技术、纯培养分离技术、微生物的接种技 术、微生物数量的测定方法
应学习的仪器使用方法 高压蒸汽灭菌锅，干燥箱，培养箱。 教学的重点和难点 重点：实验原理，相关方法、技术的介绍，分离微生物的关键技术，主要操 作环节。 难点：无菌操作、倒平板等不易掌握的实验操作技能技巧 难点的解决办法 详细深入讲解，观看录像，示范操作，细心现场指导。 模 块 2：微生物的形态观察与鉴定 教学要求 1. 掌握细菌染色观察技术及观察霉菌形态的基本方法，进一步巩固显微镜 的使用方法。 2. 了解有关的微生物常规与快速鉴定方法与技术，掌握常用的一些基于微 生物生理生化反应的鉴定方法及原理，初步掌握 BBL Crystal 鉴定系统 的操作方法。 教学学时 24 学时 讲授的内容 1. 微生物的制片及各种染色技术，革兰染色和芽孢染色的原理、操作步骤 及注意事项。 2. 常用的微生物常规鉴定方法，大分子物质的水解试验、糖发酵试验和 IMViC 试验的原理及操作方法 3. 现代微生物快速鉴定技术，BBL Crystal 鉴定系统的操作方法。 实验项目 1、细菌的革兰氏染色 2、细菌的芽孢染色 3、大分子物质的水解试验 4、糖发酵试验 5、甲基红试验 6、伏-普试验 7、柠檬酸盐试验 8、细菌的快速鉴定（细菌自动鉴定系统 BBL CRYSTAL） 9、霉菌的形态观察与鉴定
应学习的仪器使用方法 高压蒸汽灭菌锅，干燥箱，培养箱。 教学的重点和难点 重点：实验原理，相关方法、技术的介绍，分离微生物的关键技术，主要操 作环节。 难点：无菌操作、倒平板等不易掌握的实验操作技能技巧 难点的解决办法 详细深入讲解，观看录像，示范操作，细心现场指导。 模 块 2：微生物的形态观察与鉴定 教学要求 1. 掌握细菌染色观察技术及观察霉菌形态的基本方法，进一步巩固显微镜 的使用方法。 2. 了解有关的微生物常规与快速鉴定方法与技术，掌握常用的一些基于微 生物生理生化反应的鉴定方法及原理，初步掌握 BBL Crystal 鉴定系统 的操作方法。 教学学时 24 学时 讲授的内容 1. 微生物的制片及各种染色技术，革兰染色和芽孢染色的原理、操作步骤 及注意事项。 2. 常用的微生物常规鉴定方法，大分子物质的水解试验、糖发酵试验和 IMViC 试验的原理及操作方法 3. 现代微生物快速鉴定技术，BBL Crystal 鉴定系统的操作方法。 实验项目 1、细菌的革兰氏染色 2、细菌的芽孢染色 3、大分子物质的水解试验 4、糖发酵试验 5、甲基红试验 6、伏-普试验 7、柠檬酸盐试验 8、细菌的快速鉴定（细菌自动鉴定系统 BBL CRYSTAL） 9、霉菌的形态观察与鉴定
应学习的技术和方法 微生物的制片及染色技术、观察霉菌形态的方法、基于生理生化反应的细菌 鉴定方法。 应学习的仪器使用方法 高压蒸汽灭菌锅，干燥箱，培养箱，显微镜。 教学的重点和难点 重点：常规的微生物鉴定方法和现代微生物快速鉴定技术的介绍，根霉、青 霉、曲霉等霉菌的形态特征 难点：制片技术，革兰染色脱色操作技术 难点的解决办法 详细深入讲解关键的操作环节，示范操作，细心现场指导 模 块 3：消毒与灭菌效果的测定 教学要求 了解消毒剂杀菌效果的检测方法，掌握化学消毒剂杀菌效果的测定技术。 教学学时 6 学时 讲授的内容 1. 消毒方法及原理，消毒剂杀菌效果的检测方法。 2. 中和剂的选择，悬液定量法测定化学消毒剂杀菌效果的原理、操作步骤 及注意事项。 实验项目 1、中和剂的选择 2、化学消毒剂杀菌效果的定量测定 应学习的技术和方法 中和剂的选择方法，细菌芽孢悬液的制备方法，平板菌落计数技术。 应学习的仪器使用方法 高压蒸汽灭菌锅，干燥箱，培养箱，显微镜，离心机。 教学的重点和难点 重点：消毒剂杀菌效果的检测方法介绍，中和剂的选择方法，悬液定量法的 原理、操作步骤. 难点：中和剂的选择方法 难点的解决办法 详细深入讲解实验原理及实验设计方法，细心现场指导，提供相关的阅读参
应学习的技术和方法 微生物的制片及染色技术、观察霉菌形态的方法、基于生理生化反应的细菌 鉴定方法。 应学习的仪器使用方法 高压蒸汽灭菌锅，干燥箱，培养箱，显微镜。 教学的重点和难点 重点：常规的微生物鉴定方法和现代微生物快速鉴定技术的介绍，根霉、青 霉、曲霉等霉菌的形态特征 难点：制片技术，革兰染色脱色操作技术 难点的解决办法 详细深入讲解关键的操作环节，示范操作，细心现场指导 模 块 3：消毒与灭菌效果的测定 教学要求 了解消毒剂杀菌效果的检测方法，掌握化学消毒剂杀菌效果的测定技术。 教学学时 6 学时 讲授的内容 1. 消毒方法及原理，消毒剂杀菌效果的检测方法。 2. 中和剂的选择，悬液定量法测定化学消毒剂杀菌效果的原理、操作步骤 及注意事项。 实验项目 1、中和剂的选择 2、化学消毒剂杀菌效果的定量测定 应学习的技术和方法 中和剂的选择方法，细菌芽孢悬液的制备方法，平板菌落计数技术。 应学习的仪器使用方法 高压蒸汽灭菌锅，干燥箱，培养箱，显微镜，离心机。 教学的重点和难点 重点：消毒剂杀菌效果的检测方法介绍，中和剂的选择方法，悬液定量法的 原理、操作步骤. 难点：中和剂的选择方法 难点的解决办法 详细深入讲解实验原理及实验设计方法，细心现场指导，提供相关的阅读参
考文献。 模 块 4：海洋放线菌的分离及抗菌活性菌株的筛选 教学要求 1. 学习抗菌活性菌株的筛选方法。 2. 学习海洋底泥中放线菌的分离及抗菌活性菌株的筛选方法，掌握双层琼 脂扩散法筛选抗菌活性菌株的操作方法。 3. 巩固无菌操作技术、纯培养技术。 4. 了解发酵产物的分离纯化及分析技术及其在药物研发中的应用。 5. 使学生了解运用微生物实验的基本技术与方法进行科研工作的基本思 路。 教学学时 12 学时 讲授的内容 1． (海洋底泥)放线菌的分离及其抗菌活性物质筛选的一般过程。讲清楚为 什么选择海洋底泥中放线菌，为什么进行相关的操作。 2．介绍实验所用的海洋底泥放线菌的分离方法及其相关的原理。 3．回顾放线菌的基本知识，讲述放线菌形态观察的基本方法及原理。 4．讲述抗菌活性菌株筛选的常用方法及实验中所采用的双层琼脂扩散方法。 5．主要操作步骤，培养基的配制及灭菌。 实验项目 1、放线菌的选择分离与计数 2、放线菌形态的观察 3、双层琼脂扩散法筛选抗菌活性菌株 应学习的技术和方法 样品的采集，预处理，常用的灭菌方法，土壤稀释法，放线菌的选择培养， 倾注平板法，纯培养技术，无菌操作技术，印片法，双层琼脂扩散法。 应学习的仪器使用方法：高压灭菌锅，干燥箱，电子天平，显微镜，培养箱。 教学的重点和难点 1．在微生物学实验基本操作技术与方法已掌握的基础上，模拟科研过程所 设计的实验模块，旨在让学生实现由被动的做实验到进行科研工作的思路方面的 转变。讲授部分的难点是如何让学生了解整个实验模块即是从放线菌中筛选抗菌 素类药物发现过程。另外，因为微生物理论课所学的关于放线菌的形态结构、繁 殖方式等知识时间较长，因而学生在观察放线菌的结构形态时不容易分辨
考文献。 模 块 4：海洋放线菌的分离及抗菌活性菌株的筛选 教学要求 1. 学习抗菌活性菌株的筛选方法。 2. 学习海洋底泥中放线菌的分离及抗菌活性菌株的筛选方法，掌握双层琼 脂扩散法筛选抗菌活性菌株的操作方法。 3. 巩固无菌操作技术、纯培养技术。 4. 了解发酵产物的分离纯化及分析技术及其在药物研发中的应用。 5. 使学生了解运用微生物实验的基本技术与方法进行科研工作的基本思 路。 教学学时 12 学时 讲授的内容 1． (海洋底泥)放线菌的分离及其抗菌活性物质筛选的一般过程。讲清楚为 什么选择海洋底泥中放线菌，为什么进行相关的操作。 2．介绍实验所用的海洋底泥放线菌的分离方法及其相关的原理。 3．回顾放线菌的基本知识，讲述放线菌形态观察的基本方法及原理。 4．讲述抗菌活性菌株筛选的常用方法及实验中所采用的双层琼脂扩散方法。 5．主要操作步骤，培养基的配制及灭菌。 实验项目 1、放线菌的选择分离与计数 2、放线菌形态的观察 3、双层琼脂扩散法筛选抗菌活性菌株 应学习的技术和方法 样品的采集，预处理，常用的灭菌方法，土壤稀释法，放线菌的选择培养， 倾注平板法，纯培养技术，无菌操作技术，印片法，双层琼脂扩散法。 应学习的仪器使用方法：高压灭菌锅，干燥箱，电子天平，显微镜，培养箱。 教学的重点和难点 1．在微生物学实验基本操作技术与方法已掌握的基础上，模拟科研过程所 设计的实验模块，旨在让学生实现由被动的做实验到进行科研工作的思路方面的 转变。讲授部分的难点是如何让学生了解整个实验模块即是从放线菌中筛选抗菌 素类药物发现过程。另外，因为微生物理论课所学的关于放线菌的形态结构、繁 殖方式等知识时间较长，因而学生在观察放线菌的结构形态时不容易分辨
2．放线菌的分离及纯培养，抗菌活性菌株的筛选方法。 3．放线菌的气生菌丝、孢子丝和分生孢子的印片法观察。放线菌的气生菌 丝与分生孢子丝的区分。 4．放线菌菌落与细菌、霉菌等菌落的区分。 难点的解决办法 联系实际，并借鉴微生物实验前面所学的技术与方法，让同学了解放线菌的 分离抗菌活性物质的筛选方法，虽然是模拟科研的过程但所用的技术与方法都是 微生物实验的基本方法。 引导学生借鉴土壤中细菌的分离方法，进行放线菌的分离，手把手的现场指 导及讲授时的示范。 讲清楚抗菌活性菌株的筛选的一般方法，重点讲授双层琼脂扩散法用于放线 菌抗菌活性菌株的筛选及主要的操作要点。 通过对分离到的放线菌菌落的形态观察，引导学生从菌落的干湿程度、隆起 程度、边缘及颜色尤其是是否易于从培养基上挑起等方面区分细菌和放线菌；而 从菌落的大小及菌落表面来区分霉菌和放线菌。 以清晰明了的课件展示主要的操作步骤及注意事项，并辅以黑板上的板画的 形式来引导学生区分气生菌丝和分生孢子丝，加上现场观察指导的方式来突破难 点，突出重点。 模 块 5：酵母菌胞外多糖的发酵 教学要求 1. 通过多糖的发酵掌握微生物的液体发酵方法。 2. 学习并掌握微生物胞外多糖的分离及含量分析方法。 3. 认识酵母菌，并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法，了解产孢条件。了解 酵母菌在科研及其食品工业上的广泛用途。 4. 巩固无菌操作技术。 5. 了解工业微生物发酵的过程及其在工业生产的应用。 6. 通过多糖的发酵使学生了解运用微生物发酵法生产食品药品的一般方 论法。 教学学时 12 学时 讲授的内容 1. 讲述从菌种活化到酵母菌胞外多糖的液体发酵的一般过程。 2. 介绍高碳氮比的发酵培养基进行多糖发酵的原理，发酵液中多糖的分离
2．放线菌的分离及纯培养，抗菌活性菌株的筛选方法。 3．放线菌的气生菌丝、孢子丝和分生孢子的印片法观察。放线菌的气生菌 丝与分生孢子丝的区分。 4．放线菌菌落与细菌、霉菌等菌落的区分。 难点的解决办法 联系实际，并借鉴微生物实验前面所学的技术与方法，让同学了解放线菌的 分离抗菌活性物质的筛选方法，虽然是模拟科研的过程但所用的技术与方法都是 微生物实验的基本方法。 引导学生借鉴土壤中细菌的分离方法，进行放线菌的分离，手把手的现场指 导及讲授时的示范。 讲清楚抗菌活性菌株的筛选的一般方法，重点讲授双层琼脂扩散法用于放线 菌抗菌活性菌株的筛选及主要的操作要点。 通过对分离到的放线菌菌落的形态观察，引导学生从菌落的干湿程度、隆起 程度、边缘及颜色尤其是是否易于从培养基上挑起等方面区分细菌和放线菌；而 从菌落的大小及菌落表面来区分霉菌和放线菌。 以清晰明了的课件展示主要的操作步骤及注意事项，并辅以黑板上的板画的 形式来引导学生区分气生菌丝和分生孢子丝，加上现场观察指导的方式来突破难 点，突出重点。 模 块 5：酵母菌胞外多糖的发酵 教学要求 1. 通过多糖的发酵掌握微生物的液体发酵方法。 2. 学习并掌握微生物胞外多糖的分离及含量分析方法。 3. 认识酵母菌，并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法，了解产孢条件。了解 酵母菌在科研及其食品工业上的广泛用途。 4. 巩固无菌操作技术。 5. 了解工业微生物发酵的过程及其在工业生产的应用。 6. 通过多糖的发酵使学生了解运用微生物发酵法生产食品药品的一般方 论法。 教学学时 12 学时 讲授的内容 1. 讲述从菌种活化到酵母菌胞外多糖的液体发酵的一般过程。 2. 介绍高碳氮比的发酵培养基进行多糖发酵的原理，发酵液中多糖的分离
方法。 3. 多糖含量测定的常用方法及其用苯酚硫酸法测定酵母胞外多糖含量的 具体方法。 4. 回顾酵母菌的基本知识，通过对酵母菌的有性生殖过程的讲述，引出酵 母菌子囊孢子形态观察的基本方法及原理。 5. 通过对酵母菌多糖的液体发酵的讲述，引出微生物下游技术-常用的分 离技术与分析方法。 6. 讲述实验的主要操作步骤。 实验项目 1、酵母胞外多糖的液体发酵 2、酵母子囊孢子的观察 3、酵母胞外多糖的提取与测定 应学习的技术和方法 液体发酵法，菌种活化，产孢培养，发酵培养，酵母菌的培养，无菌操作技 术，染色法，苯酚硫酸法。离心操作、比色测定。 应学习的仪器使用方法 高压灭菌锅，干燥箱，电子天平，显微镜，摇床，离心机，冰箱，分光光度 计。 教学的重点和难点 1．这是微生物学实验的最后一个模块，也是学生第一次接触液体发酵培养， 旨在让学生掌握实验室规模的液体发酵技术，了解工业化液体发酵生产应注意的 问题。同时这个模块也是涉及的技术和方法最多，内容最杂。实验课的设计管理 也是应该考虑的。 2．酵母菌胞外多糖的分离及提取方法和多糖的测定方法的原理及操作。 3．酵母菌的子囊孢子的产生及形态特征。酵母菌子囊孢子的产生条件，子 囊孢子与营养细胞的区别。 4．仪器如离心机、分光光度计等的正确使用和比色测定的正确操作。 5．使学生了解实验所用的方法及其相关的原理。微生物实验与化学实验不 同。对玻璃仪器的要求不同，前者强调无菌，后者则要求无杂质，因而需要通过 讲解使学生了解。 难点的解决办法 1．耐心讲解，注意讲台前的示范与对学生个别指导相结合的方法。对容易 出错的地方，反复强调。借鉴微生物实验前面所学的染色方法及生物化学中已接 触过的分光光度计的使用等，让同学注意运用所学的知识和技术解决实验中遇到
方法。 3. 多糖含量测定的常用方法及其用苯酚硫酸法测定酵母胞外多糖含量的 具体方法。 4. 回顾酵母菌的基本知识，通过对酵母菌的有性生殖过程的讲述，引出酵 母菌子囊孢子形态观察的基本方法及原理。 5. 通过对酵母菌多糖的液体发酵的讲述，引出微生物下游技术-常用的分 离技术与分析方法。 6. 讲述实验的主要操作步骤。 实验项目 1、酵母胞外多糖的液体发酵 2、酵母子囊孢子的观察 3、酵母胞外多糖的提取与测定 应学习的技术和方法 液体发酵法，菌种活化，产孢培养，发酵培养，酵母菌的培养，无菌操作技 术，染色法，苯酚硫酸法。离心操作、比色测定。 应学习的仪器使用方法 高压灭菌锅，干燥箱，电子天平，显微镜，摇床，离心机，冰箱，分光光度 计。 教学的重点和难点 1．这是微生物学实验的最后一个模块，也是学生第一次接触液体发酵培养， 旨在让学生掌握实验室规模的液体发酵技术，了解工业化液体发酵生产应注意的 问题。同时这个模块也是涉及的技术和方法最多，内容最杂。实验课的设计管理 也是应该考虑的。 2．酵母菌胞外多糖的分离及提取方法和多糖的测定方法的原理及操作。 3．酵母菌的子囊孢子的产生及形态特征。酵母菌子囊孢子的产生条件，子 囊孢子与营养细胞的区别。 4．仪器如离心机、分光光度计等的正确使用和比色测定的正确操作。 5．使学生了解实验所用的方法及其相关的原理。微生物实验与化学实验不 同。对玻璃仪器的要求不同，前者强调无菌，后者则要求无杂质，因而需要通过 讲解使学生了解。 难点的解决办法 1．耐心讲解，注意讲台前的示范与对学生个别指导相结合的方法。对容易 出错的地方，反复强调。借鉴微生物实验前面所学的染色方法及生物化学中已接 触过的分光光度计的使用等，让同学注意运用所学的知识和技术解决实验中遇到
的问题。实验程序上先进行多糖的分离提取、含量测定然后进行 2. 通过对酵母菌的有性生殖过程的讲述，引出酵母菌子囊孢子形态观察的 基本方法及原理。结合讲台前的示范讲解及现场指导的方式引导学生进行正确的 观察和操作。引导学生对酵母菌的子囊孢子进行观察，区分营养细胞与子囊孢子。 3. 以清晰明了的课件展示主要的操作步骤及注意事项，并反复强调。 4．多糖含量测定的常用方法及其用苯酚硫酸法测定酵母胞外多糖含量的具 体方法。 5．通过浓硫酸的强腐蚀性以及苯酚硫酸反应中的放热，引导学生注意正确 操作和对仪器设备的维护。 模块六 经典的血清学反应实验 教学要求 1. 掌握免疫沉淀反应及凝集反应的进展和相关技术、方法要求， 2. 掌握免疫反应和凝集反应的基本原理。 3. 掌握单向琼脂扩散实验技术、双向琼脂扩散实验技术和免疫电泳技术的 操作方法和在微量组分检测分析中的应用。 4. 掌握凝集反应技术的操作方法及其应用。 教学学时 9 学时 讲授的内容 1．单向琼脂扩散实验原理、操作步骤及注意事项 2．双向琼脂扩散实验基本原理，操作步骤和注意事项。 3．免疫电泳实验基本原理，操作步骤和注意事项。 4．间接凝集反应测定人血清中内风湿因子的基本原理、步骤和注意事项。 实验项目 1. 单向琼脂扩散试验 2. 双向琼脂扩散试验 3. 免疫电泳 4. 间接凝集反应测定人血清类风湿因子 应学习的技术和方法 学习琼脂凝胶板制备技术，凝胶板打孔技术，血清抗体稀释技术，抗原稀释 技术，琼脂板开槽技术，电泳技术，抗原、抗体加样技术。 应学习的仪器使用方法 水浴箱，电泳仪，微量加样器
的问题。实验程序上先进行多糖的分离提取、含量测定然后进行 2. 通过对酵母菌的有性生殖过程的讲述，引出酵母菌子囊孢子形态观察的 基本方法及原理。结合讲台前的示范讲解及现场指导的方式引导学生进行正确的 观察和操作。引导学生对酵母菌的子囊孢子进行观察，区分营养细胞与子囊孢子。 3. 以清晰明了的课件展示主要的操作步骤及注意事项，并反复强调。 4．多糖含量测定的常用方法及其用苯酚硫酸法测定酵母胞外多糖含量的具 体方法。 5．通过浓硫酸的强腐蚀性以及苯酚硫酸反应中的放热，引导学生注意正确 操作和对仪器设备的维护。 模块六 经典的血清学反应实验 教学要求 1. 掌握免疫沉淀反应及凝集反应的进展和相关技术、方法要求， 2. 掌握免疫反应和凝集反应的基本原理。 3. 掌握单向琼脂扩散实验技术、双向琼脂扩散实验技术和免疫电泳技术的 操作方法和在微量组分检测分析中的应用。 4. 掌握凝集反应技术的操作方法及其应用。 教学学时 9 学时 讲授的内容 1．单向琼脂扩散实验原理、操作步骤及注意事项 2．双向琼脂扩散实验基本原理，操作步骤和注意事项。 3．免疫电泳实验基本原理，操作步骤和注意事项。 4．间接凝集反应测定人血清中内风湿因子的基本原理、步骤和注意事项。 实验项目 1. 单向琼脂扩散试验 2. 双向琼脂扩散试验 3. 免疫电泳 4. 间接凝集反应测定人血清类风湿因子 应学习的技术和方法 学习琼脂凝胶板制备技术，凝胶板打孔技术，血清抗体稀释技术，抗原稀释 技术，琼脂板开槽技术，电泳技术，抗原、抗体加样技术。 应学习的仪器使用方法 水浴箱，电泳仪，微量加样器
教学的重点和难点 1．免疫沉淀反应和免疫凝集反应的区别 2．免疫电泳的原理和应用 3．琼脂凝胶板的制备和打孔操作 4．双向琼脂扩散试验结果分析 难点的解决办法 1、重点讲解免疫沉淀反应和免疫凝集反应的概念 2、讲解免疫电泳的原理和应用 3、对琼脂凝胶板制备和打孔进行现场指导 4、指导学生对双向和单向琼脂扩散试验结果的分析 模块七 小鼠腹腔巨噬细胞的收集和观察 教学要求 1．掌握免疫细胞的分离方法 2. 掌握腹腔巨噬细胞分离的原理和方法。 3．熟悉巨噬细胞形态，能在显微镜下辨别巨噬细胞。 教学学时 6 学时 讲授的内容 1. 免疫细胞分离原理免疫细胞计数免疫细胞的功能检测。 2. 巨噬细胞发育：骨髓多能干细胞→定向干细胞（髓样干细胞）→单核母 细胞→前体单核细胞→单核细胞→血液→组织（分化为巨噬细胞）。 3. 巨噬细胞的形态，功能和分布。 4. 巨噬细胞的分离和纯化方法。 实验项目 1. 小鼠的处死和固定 2. 腹腔注射生理盐水，巨噬细胞的收集，沉淀和制片 3. 巨噬细胞的形态观察 应学习的技术和方法 学习小鼠腹腔注射技术，腹腔解剖技术，腹腔液稀释技术，巨噬细胞制片技 术。 应学习的仪器使用方法 显微镜 教学的重点和难点
教学的重点和难点 1．免疫沉淀反应和免疫凝集反应的区别 2．免疫电泳的原理和应用 3．琼脂凝胶板的制备和打孔操作 4．双向琼脂扩散试验结果分析 难点的解决办法 1、重点讲解免疫沉淀反应和免疫凝集反应的概念 2、讲解免疫电泳的原理和应用 3、对琼脂凝胶板制备和打孔进行现场指导 4、指导学生对双向和单向琼脂扩散试验结果的分析 模块七 小鼠腹腔巨噬细胞的收集和观察 教学要求 1．掌握免疫细胞的分离方法 2. 掌握腹腔巨噬细胞分离的原理和方法。 3．熟悉巨噬细胞形态，能在显微镜下辨别巨噬细胞。 教学学时 6 学时 讲授的内容 1. 免疫细胞分离原理免疫细胞计数免疫细胞的功能检测。 2. 巨噬细胞发育：骨髓多能干细胞→定向干细胞（髓样干细胞）→单核母 细胞→前体单核细胞→单核细胞→血液→组织（分化为巨噬细胞）。 3. 巨噬细胞的形态，功能和分布。 4. 巨噬细胞的分离和纯化方法。 实验项目 1. 小鼠的处死和固定 2. 腹腔注射生理盐水，巨噬细胞的收集，沉淀和制片 3. 巨噬细胞的形态观察 应学习的技术和方法 学习小鼠腹腔注射技术，腹腔解剖技术，腹腔液稀释技术，巨噬细胞制片技 术。 应学习的仪器使用方法 显微镜 教学的重点和难点