学习指南 教学要求 掌握色谱法的系统适用性试验、含量测定方法和含量计算。掌握髙效液相法的常用固定相、流动相、检测器,以 及《中国药典》对仪器的要求。掌握常用气相色谱柱、检测器与适用范围,以及《中国药典》对色谱条件和仪器的要 求。 2.熟悉毛细管电泳法、分子排阻法和离子色谱法的原理与应用。 3.了解手性髙效液相法、超高效液相色谱法和常用色-质联用技术的原理与应用。 2学习重点 高效液相色谱法 1.分类——正相色谱( NP-HPLC)、反相色谱( RP-HPLC)、反相离子抑制色谱(RP-lSC)、反相离子对色谱 (RP-IPC) 2.系统适用性试验与要求 理论板数(n):n=16(aW)2或n=5.54 2(应符合规定) 分离度(R):x=2(12-12)或R 2(tR -R) (R≥1.5) 1.70(丌1A2+W2A2) 拖尾因子():了=(峰高定量,T-095~105) 2a1 重复性:连续进样5针,峰面积的RSD应≤2.0% 为符合系统适用性试验要求,可适当改变柱长度、内径、牌号、粒度、流动相流速、流动相各组成的比例、柱温、 进样量、检测器灵敏度等。但不得改变固定相种类、流动相组成、检测器类型。 定量方法——内标法、外标法。 4.应用示例——炔诺孕酮(内标法);青霉素钠、阿司匹林泡腾片(外标法);注射用普鲁卡因青霉素、重酒石酸 去甲肾上腺素注射液(离子对色谱,外标法);庆大霉素℃组分测定(蒸发光散射检测器检测)。 二、气相色谱法 气相色谱仪——由载气(如氮气)、色谱柱(填充柱、毛细管柱)、检测器(如FD)、温控系统(进样口、柱 温箱、检测器)等组成 2.测定方法与应用——内标法(维生素E测定)、外标法、标准溶液加入法
1 2 学习指南 教学要求 1. 掌握色谱法的系统适用性试验、含量测定方法和含量计算。掌握高效液相法的常用固定相、流动相、检测器，以 及《中国药典》对仪器的要求。掌握常用气相色谱柱、检测器与适用范围，以及《中国药典》对色谱条件和仪器的要 求。 2. 熟悉毛细管电泳法、分子排阻法和离子色谱法的原理与应用。 3. 了解手性高效液相法、超高效液相色谱法和常用色-质联用技术的原理与应用。 学习重点 一、高效液相色谱法 1. 分类——正相色谱（NP-HPLC）、反相色谱（RP-HPLC）、反相离子抑制色谱（RP-ISC）、反相离子对色谱 （RP-IPC）。 2. 系统适用性试验与要求 重复性：连续进样5针，峰面积的RSD应≤2.0％ 为符合系统适用性试验要求，可适当改变柱长度、内径、牌号、粒度、流动相流速、流动相各组成的比例、柱温、 进样量、检测器灵敏度等。但不得改变固定相种类、流动相组成、检测器类型。 3. 定量方法——内标法、外标法。 4. 应用示例——炔诺孕酮（内标法）；青霉素钠、阿司匹林泡腾片（外标法）；注射用普鲁卡因青霉素、重酒石酸 去甲肾上腺素注射液（离子对色谱，外标法）；庆大霉素C组分测定（蒸发光散射检测器检测）。 二、气相色谱法 1. 气相色谱仪——由载气（如氮气）、色谱柱（填充柱、毛细管柱）、检测器（如FID）、温控系统（进样口、柱 温箱、检测器）等组成。 2. 测定方法与应用——内标法（维生素E测定）、外标法、标准溶液加入法。 三、毛细管电泳法
1.原理——带电粒子在一定介质中,因电场作用而发生定向运动,根据带电粒子所带电荷数、形状、解离度不同 使迁移谏度不同而分离,并在电渗流驱动下,以不同速度向同一方向(检测器方向)移动而被检出 2分离模式——毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等速电泳、毛细管等电聚焦电泳、胶束电动毛细管色 谱、毛细管电色谱。 四、其它色谱 1分子排阻色谱法——为分子筛机制,被测物按分子尺寸由大至小先后被洗脱。用于蛋白质多肽的分子量测定、生 物大分子聚合物分子量与分子量分布的测定、高分子杂质测定(采用自身对照外标法计算供试品中高分子杂质的相对百 分含量) 2.离子色谱法——离子交换原理,固定相为阴、阳离子交换树脂,使用pH范围为1-14,流动相为酸碱溶液,以电 导检测器检测,用于亲水性阴、阳离子的测定 3手性髙效液相色谱法——手性试剂衍生化法(℃DR)、手性流动相添加剂法(CMPA,如酮康唑拆分)、手性固 定相法(cSP) 4.色质联用技术与应用——质谱仪由真空系统、进样系统(直接进样、接口技术)、离子源(E、Cl、FAB、 APl、MALD )、质量分析器(四极杄、离子阱、飞行时间、傅里叶变换等)、检测器(光电倍增器或电孑倍增 器)组成。常用联用技术:GCMs、LCMS。 3关键词 系统适用性试验、高效液相法、气相色谱法、毛细管电泳法、分子排阻法、离子色谱法、色质联用
3 1.原理——带电粒子在一定介质中，因电场作用而发生定向运动，根据带电粒子所带电荷数、形状、解离度不同， 使迁移速度不同而分离，并在电渗流驱动下，以不同速度向同一方向（检测器方向）移动而被检出。 2.分离模式——毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等速电泳、毛细管等电聚焦电泳、胶束电动毛细管色 谱、毛细管电色谱。 四、其它色谱 1.分子排阻色谱法——为分子筛机制，被测物按分子尺寸由大至小先后被洗脱。用于蛋白质多肽的分子量测定、生 物大分子聚合物分子量与分子量分布的测定、高分子杂质测定（采用自身对照外标法计算供试品中高分子杂质的相对百 分含量）。 2. 离子色谱法——离子交换原理，固定相为阴、阳离子交换树脂，使用pH范围为1~14，流动相为酸碱溶液，以电 导检测器检测，用于亲水性阴、阳离子的测定。 3. 手性高效液相色谱法——手性试剂衍生化法（CDR）、手性流动相添加剂法（CMPA，如酮康唑拆分）、手性固 定相法（CSP）。 4. 色-质联用技术与应用——质谱仪由真空系统、进样系统（直接进样、接口技术）、离子源（EI、CI、FAB、 API、MALDI、ICP等）、质量分析器（四极杆、离子阱、飞行时间、傅里叶变换等）、检测器（光电倍增器或电子倍增 器）组成。常用联用技术：GC-MS、LC-MS。 关键词 系统适用性试验、高效液相法、气相色谱法、毛细管电泳法、分子排阻法、离子色谱法、色-质联用