实验十六、邻二氮菲吸光光度法测定铁 实验目的： 1.掌握光度法测定铁的原理及方法 2.学会721（或752）分光光度计的正确使用。 3.学习如何选择吸光光度分析的实验条件
实验十六、 邻二氮菲吸光光度法测定铁 实验目的： 1．掌握光度法测定铁的原理及方法 2．学会721（或752）分光光度计的正确使用。 3．学习如何选择吸光光度分析的实验条件
、方法原理 &邻二氮菲(o-ph)是测定微量铁的较好试剂。在 pH=2~9的溶液中，试剂与Fe2+生成稳定的红 色配合物，其1gK形=21.3，摩尔吸光系数e= 1.1×104,其反应式如下： 分 Fe2+3(o-ph)=Fe(o-ph)3 红色配合物的最大吸收峰在510nm波长处。当铁 为+3价时，可用盐酸羟胺还原，本方法的选择 性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、A13+、Ca2+、 Mg2+、Zn2+、Si032,20倍Cr3+、Mn2+、V(W)、 P043,5倍Co2+、Cu2+等均不千扰测定
一、方法原理 邻二氮菲(o-ph)是测定微量铁的较好试剂。在 pH＝2～9 的溶液中，试剂与Fe2+生成稳定的红 色配合物，其lgK形＝21.3， 摩尔吸光系数ε = 1.1×104，其反应式如下： Fe2+ + 3(o-ph) ⇌ Fe(o-ph)3 红色配合物的最大吸收峰在510nm波长处。当铁 为+3价时，可用盐酸羟胺还原， 本方法的选择 性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+ 、Al3+ 、Ca2+ 、 Mg2+ 、Zn2+ 、SiO3 2-，20倍Cr3+ 、Mn2+ 、V(V)、 PO4 3-，5倍Co2+ 、Cu2+等均不干扰测定
二、主要仪器及试剂 1.721（或752)分光光度计，10mL吸量管，50mL 比色管8支，1cm比色皿，瓷坩埚，电炉，马弗炉。 2.铁标准溶液：含铁0.1mg/ml。 准确称取0.8634g的NH4Fe(S04)212H20,置于烧 杯中，加入20ml1:1HC和少量水，溶解后，定量地转移 至1升容量瓶中，以水稀释之刻度，摇匀。 3.邻二氮菲：0.15%(103mo/儿)新配制的水溶液。 4.盐酸羟胺：10%水溶液（临用时配制〉 5.醋酸钠溶液1mol/L 6.NaOH 1mol/L 7.HCI 6 mol/L 8.蜂蜜（或工业盐酸，或自制试样）
二、主要仪器及试剂 1. 721（或752）分光光度计，10mL吸量管，50mL 比色管8支，1cm比色皿，瓷坩埚，电炉，马弗炉。 2．铁标准溶液：含铁0.1mg/ml。 准确称取0.8634g的NH4Fe(SO4 )2·12H2O，置于烧 杯中，加入20ml1:1HCl和少量水,溶解后,定量地转移 至１升容量瓶中，以水稀释之刻度，摇匀。 3．邻二氮菲：0.15％(10-3mol/L)新配制的水溶液。 4．盐酸羟胺： 10％水溶液（临用时配制） 5．醋酸钠溶液 1mol/L 6．NaOH 1mol/L 7．HCl 6 mol/L 8．蜂蜜（或工业盐酸，或自制试样）
三、测定步骤 1.吸收曲线的制作和测量波长的选择： 用吸量管吸取0.0,1.0mL铁标准溶液，分别 注入两个50mL比色管中，各加入1mL盐酸羟 胺溶液，2mL邻二氮菲，5 mL NaAc,用水稀 释至刻度，摇匀。放置10min后，用1cm比 色皿，以试剂空白（即0.0mL铁标准溶液） 为参比溶液，在440~560nm之间，每隔 10nm测一次吸光度，在最大吸收峰附近， 每隔5nm测定一次吸光度
三、测定步骤 1．吸收曲线的制作和测量波长的选择： 用吸量管吸取0.0，1.0mL铁标准溶液，分别 注入两个50mL比色管中，各加入1mL盐酸羟 胺溶液，2mL邻二氮菲，5mL NaAc，用水稀 释至刻度，摇匀。放置10min后，用1cm比 色皿，以试剂空白（即0.0mL铁标准溶液） 为参比溶液，在440～560nm之间，每隔 10nm测一次吸光度，在最大吸收峰附近， 每隔5nm测定一次吸光度
测定步骤 在坐标纸上，以波长入为横坐标， 吸光度A为 纵坐标，绘制A和入关系的吸收曲线。从吸收 曲线上选择测定Fe的适宜波长，一般选用最 大吸收波长入max 2.标准曲线的制作： 用移液管吸取100μgmL-1铁标准溶液10mL于 100mL容量瓶中，加入2mL2molL1的HCl, 用水稀释至刻度，摇匀。此溶液每毫升含Fe3+ 10μg
测定步骤 在坐标纸上，以波长λ为横坐标，吸光度A为 纵坐标，绘制A和λ关系的吸收曲线。从吸收 曲线上选择测定Fe的适宜波长，一般选用最 大吸收波长λmax。 2．标准曲线的制作： 用移液管吸取100μg·mL-1铁标准溶液10mL于 100mL容量瓶中，加入2mL 2mol·L -1的HCl， 用水稀释至刻度，摇匀。此溶液每毫升含Fe3+ 10μg
测定步骤 在6个50mL比色管中，用吸量管分别加入0.0， 2.0,4.0,6.0,8.0,10.0mL10μgmL1铁标准 溶液，分别加入1mL盐酸羟胺，2 mL Phen, 5 mL NaAc溶液，每加一种试剂后摇匀。然后， 用水稀释至刻度，摇匀后放置10min。用1cm 比色皿，以试剂为空白（即0.0mL铁标准溶 液)，在所选择的波长下，测量各溶液的吸 光度。以含铁量为横坐标，吸光度A为纵坐标， 绘制标准曲线。 用绘制的标准曲线，重新查出相应铁浓度的 吸光度，计算Fe2+一Phen络合物的摩尔吸光 系数
测定步骤 在6个50mL比色管中，用吸量管分别加入0.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0mL 10μg·mL-1铁标准 溶液，分别加入1mL盐酸羟胺，2mL Phen， 5mL NaAc溶液，每加一种试剂后摇匀。然后， 用水稀释至刻度，摇匀后放置10min。用1cm 比色皿，以试剂为空白（即0.0mL铁标准溶 液），在所选择的波长下，测量各溶液的吸 光度。以含铁量为横坐标，吸光度A为纵坐标， 用绘制的标准曲线，重新查出相应铁浓度的 吸光度，计算Fe2+－Phen络合物的摩尔吸光 系数
测定步骤 $3.试样中铁的测定 $准确移取蜂蜜2.5~3.0g于干净瓷坩埚中，在 电炉上加热至不冒烟后，放入马弗炉中 850℃灰化1.5h,冷至室温后，加入2mL (1+1)HCl,加热煮沸至近干，加5~ 10mL蒸馏水，定量转移至50mL容量瓶后， 加盐酸羟胺2mL,Phen2mL,1molL-1NaAc 10mL,加水稀释至刻度，摇匀。测量吸光度 A。根据标准曲线求出试样中铁的含量 (ugmL-1)
3．试样中铁的测定 准确移取蜂蜜2.5～3.0g于干净瓷坩埚中，在 电炉上加热至不冒烟后，放入马弗炉中 850℃灰化1.5h，冷至室温后，加入2mL （1+1） HCl，加热煮沸至近干，加5～ 10mL蒸馏水，定量转移至50mL容量瓶后， 加盐酸羟胺2mL，Phen 2mL，1mol·L -1NaAc 10mL，加水稀释至刻度，摇匀。测量吸光度 A。根据标准曲线求出试样中铁的含量 （μg·mL-1）。 测定步骤
或：取试液溶液（工业盐酸）1ml,按上述 步骤显色后，在其相同条件下测定吸光度，由标 准曲线上查出试样中相当于铁的毫克数，然 后计算其试样中微量铁的含量(g/)。 或：准确吸取适量试液于50ml比色管中，按 标准曲线的制作步骤，加入各种试剂，测量 吸光度。从标准曲线上查出和计算试液中铁 的含量（μgmL-1)。 四、实验报告（自行设计）
或：取试液溶液（工业盐酸）1ml，按上述 步骤显色后,在其相同条件下测定吸光度,由标 准曲线上查出试样中相当于铁的毫克数，然 后计算其试样中微量铁的含量(g/l)。 或：准确吸取适量试液于50ml比色管中，按 标准曲线的制作步骤，加入各种试剂，测量 吸光度。从标准曲线上查出和计算试液中铁 的含量（μg·mL-1）。 四、实验报告（自行设计）
五、思考题 1.本实验为什么要选择酸度、显色剂用量和 有色溶液的稳定性作为条件实验的项目？ $2.吸收曲线与标准曲线有何区别？各有何实 际意义？ 3.本实验中盐酸羟胺、醋酸钠的作用各是什 么？ 4.怎样用吸光光度法测定水样中的全铁（总 铁)和亚铁的含量？试拟出简单步骤。 5.制作标准曲线和进行其他条件实验时，加 入试剂的顺序能否任意改变？为什么？
五、思考题 1. 本实验为什么要选择酸度、显色剂用量和 有色溶液的稳定性作为条件实验的项目? 2. 吸收曲线与标准曲线有何区别？各有何实 际意义？ 3. 本实验中盐酸羟胺、醋酸钠的作用各是什 4. 怎样用吸光光度法测定水样中的全铁（总 5. 制作标准曲线和进行其他条件实验时，加 入试剂的顺序能否任意改变？为什么？