抗坏血酸氧化物酶和多酚氧化 酶活性的测定 制作人： 车永梅 单 位： 生命科学学院
抗坏血酸氧化物酶和多酚氧化 酶活性的测定 制作人： 车永梅 单 位： 生命科学学院
一、实验目的: 掌握测定抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶活性的方法， 使学生理解诸如：果实受伤、组织变褐的原因等
一、实验目的: 掌握测定抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶活性的方法， 使学生理解诸如：果实受伤、组织变褐的原因等
二、实验原理 利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量 表示抗坏血酸氧化酶的活性： + O2 1 2 抗坏血酸氧化酶 抗坏血酸 脱氢抗坏血酸 C H2O O O O O H H CH2OH C C C C HO C O O HO HO H H CH2OH C C C C HO +
二、实验原理 利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量 表示抗坏血酸氧化酶的活性： + O2 1 2 抗坏血酸氧化酶 抗坏血酸 脱氢抗坏血酸 C H2O O O O O H H CH2OH C C C C HO C O O HO HO H H CH2OH C C C C HO +
抗坏血酸 + 脱氢抗坏血酸 2HI C O O O O H H CH2OH C C C C HO C O O HO HO H H CH2OH C C C C HO I2 + 利用碘液滴定剩余抗坏血酸
抗坏血酸 + 脱氢抗坏血酸 2HI C O O O O H H CH2OH C C C C HO C O O HO HO H H CH2OH C C C C HO I2 + 利用碘液滴定剩余抗坏血酸
儿茶酚＋O2 儿茶醌＋H2O 多酚氧化酶 儿茶醌+抗坏血酸→儿茶酚＋脱氢抗坏血酸 利 用 利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量 间接表示多酚氧化酶的活性：
儿茶酚＋O2 儿茶醌＋H2O 多酚氧化酶 儿茶醌+抗坏血酸→儿茶酚＋脱氢抗坏血酸 利 用 利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量 间接表示多酚氧化酶的活性：
梨果肉 三、实验材料 四、实验步骤 1．酶液提取 2．酶活性的测定（按下表配制反应体系）
梨果肉 三、实验材料 四、实验步骤 1．酶液提取 2．酶活性的测定（按下表配制反应体系）
瓶 号 缓冲液 抗坏血酸 焦儿茶酚 偏磷酸 酶溶液 偏磷酸 (保温一定时间后) 1 4 2 2 1 2 4 2 2 1 3 4 2 1 2 1 4 3 2 1 2 1 5 3 2 1 2 1 6 3 2 1 1 2 1
瓶 号 缓冲液 抗坏血酸 焦儿茶酚 偏磷酸 酶溶液 偏磷酸 (保温一定时间后) 1 4 2 2 1 2 4 2 2 1 3 4 2 1 2 1 4 3 2 1 2 1 5 3 2 1 2 1 6 3 2 1 1 2 1
(1)抗坏血酸氧化酶活性按下式计算： 抗坏血酸氧化酶活性[氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重·分)] =[ V′-( V 1 - V 2 )] ×0.44 (V/a)/(w×a) 式中：V′=滴定3号空白所用去的碘液毫升数； V1=滴定1号瓶所用去的碘液毫升数； V2=滴定2号瓶所用去的碘液毫升数； 0.44=每毫升5/6mmol碘液氧化抗坏血酸毫克数； V=提取液总体积（ml）； a=测定时所用提取液的ml数 w＝样品鲜重(g) t＝测定时间(分)。 五、试验结果
(1)抗坏血酸氧化酶活性按下式计算： 抗坏血酸氧化酶活性[氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重·分)] =[ V′-( V 1 - V 2 )] ×0.44 (V/a)/(w×a) 式中：V′=滴定3号空白所用去的碘液毫升数； V1=滴定1号瓶所用去的碘液毫升数； V2=滴定2号瓶所用去的碘液毫升数； 0.44=每毫升5/6mmol碘液氧化抗坏血酸毫克数； V=提取液总体积（ml）； a=测定时所用提取液的ml数 w＝样品鲜重(g) t＝测定时间(分)。 五、试验结果
(2)多酚氧化酶活性： 多酚氧化酶活性[氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重·分)] =[(V″- ( V3 +V4 ))/2-(V′-(V1+V2 ))/2]×0.44×(V/a)/(W×t) 式中，V〞＝滴定6号空白用去的碘液毫升数； V3 ＝滴定4号瓶用去的碘液毫升数； V4 ＝滴定5号瓶用去的碘液毫升数； 其余符号意义同前
(2)多酚氧化酶活性： 多酚氧化酶活性[氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重·分)] =[(V″- ( V3 +V4 ))/2-(V′-(V1+V2 ))/2]×0.44×(V/a)/(W×t) 式中，V〞＝滴定6号空白用去的碘液毫升数； V3 ＝滴定4号瓶用去的碘液毫升数； V4 ＝滴定5号瓶用去的碘液毫升数； 其余符号意义同前
六、思考题 1.多酚氧化酶活性测定实验中计算多酚氧化酶活性时 为什么要减去抗坏血酸氧化酶活性？ 2.测定多酚氧化酶和抗坏血酸氧化酶活性时加入偏磷 酸的作用是什么？
六、思考题 1.多酚氧化酶活性测定实验中计算多酚氧化酶活性时 为什么要减去抗坏血酸氧化酶活性？ 2.测定多酚氧化酶和抗坏血酸氧化酶活性时加入偏磷 酸的作用是什么？