硝酸还原酶(NR)活性的测定 制作人： 车永梅 单 位： 生命科学学院
硝酸还原酶(NR)活性的测定 制作人： 车永梅 单 位： 生命科学学院
一、实验目的 了解硝酸还原酶在氮代谢中的地位，掌握硝酸还 原酶活性测定的方法
一、实验目的 了解硝酸还原酶在氮代谢中的地位，掌握硝酸还 原酶活性测定的方法
二、实验原理 植物吸收的硝酸根离子，首先通过硝酸还原酶的催 化，被还原成亚硝酸根离子。其反应如下： NO3 -+NADH+H+ → NO2 -+NAD++H2O 产生的亚硝酸根离子可以从组织内渗到外界溶液中， 测定反应液中亚硝酸含量，通过一定公式计算就可 得硝酸还原酶活性的大小
二、实验原理 植物吸收的硝酸根离子，首先通过硝酸还原酶的催 化，被还原成亚硝酸根离子。其反应如下： NO3 -+NADH+H+ → NO2 -+NAD++H2O 产生的亚硝酸根离子可以从组织内渗到外界溶液中， 测定反应液中亚硝酸含量，通过一定公式计算就可 得硝酸还原酶活性的大小
亚硝酸离子的测定用比色法。其反应如下： 对氨基苯磺酸(或磺胺)+2H++NO2 - → 叠氮化合物 叠氮化合物+α-萘胺（或盐酸萘乙二胺） → 偶氮化 合物(红色) 生成的红色偶氮化合物在520nm波长比色，其光密 度值与NO2 -含量成正比
亚硝酸离子的测定用比色法。其反应如下： 对氨基苯磺酸(或磺胺)+2H++NO2 - → 叠氮化合物 叠氮化合物+α-萘胺（或盐酸萘乙二胺） → 偶氮化 合物(红色) 生成的红色偶氮化合物在520nm波长比色，其光密 度值与NO2 -含量成正比
二、实验材料 待测植物组织
二、实验材料 待测植物组织
三、方法步骤 1．绘制标准曲线： 试剂（ml） 1 2 3 4 5 6 7 NaNO2标准液(5微克／ml) 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1 蒸馏水 1 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 对氨基苯磺酸(或磺胺) 2 2 2 2 2 2 2 盐酸萘乙二胺(或α-萘胺) 2 2 2 2 2 2 2 每管含NaNO2的微克数 0 0.5 1 2 3 4 5 试管号
三、方法步骤 1．绘制标准曲线： 试剂（ml） 1 2 3 4 5 6 7 NaNO2标准液(5微克／ml) 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1 蒸馏水 1 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 对氨基苯磺酸(或磺胺) 2 2 2 2 2 2 2 盐酸萘乙二胺(或α-萘胺) 2 2 2 2 2 2 2 每管含NaNO2的微克数 0 0.5 1 2 3 4 5 试管号
2. 取样 按下式计算酶活性： 3. NaNO2 含量测定 五、实验结果 查表值×(46/69) 材料鲜重（g）×反应时间 NR活性（gNO2 - /gFW·h）＝
2. 取样 按下式计算酶活性： 3. NaNO2 含量测定 五、实验结果 查表值×(46/69) 材料鲜重（g）×反应时间 NR活性（gNO2 - /gFW·h）＝
六、思考题 1.NR活性测定时取材前为什么要进行一段时间光合 作用？ 2.测定酶促反应时为什么要在暗处保温？ 3.NR活性测定时加入磺胺、盐酸萘乙二胺和KNO3 的作用各是什么？
六、思考题 1.NR活性测定时取材前为什么要进行一段时间光合 作用？ 2.测定酶促反应时为什么要在暗处保温？ 3.NR活性测定时加入磺胺、盐酸萘乙二胺和KNO3 的作用各是什么？