植物组织中超氧物歧化酶活性 的测定 制作人：刘洪庆 单 位： 植物生理学教研室
植物组织中超氧物歧化酶活性 的测定 制作人：刘洪庆 单 位： 植物生理学教研室
一、实验目的 ◼ 掌握SOD酶活性测定方法。 ◼ 掌握分光光度计、光照培养箱、冷冻离心机使 用方法
一、实验目的 ◼ 掌握SOD酶活性测定方法。 ◼ 掌握分光光度计、光照培养箱、冷冻离心机使 用方法
二、实验原理 因此光还原反应后，反应液蓝色愈深说明酶活性愈低， 反之酶活性愈高。 本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光 下的还原作用来确定酶活性大小。 核黄素 被氧化物质 还原的核黄素 氧 O2 ● 氮蓝四唑 蓝色的化合物 O2 ● （560nm） 2 + 2H+ H2O2 + O2 O2 ● SOD
二、实验原理 因此光还原反应后，反应液蓝色愈深说明酶活性愈低， 反之酶活性愈高。 本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光 下的还原作用来确定酶活性大小。 核黄素 被氧化物质 还原的核黄素 氧 O2 ● 氮蓝四唑 蓝色的化合物 O2 ● （560nm） 2 + 2H+ H2O2 + O2 O2 ● SOD
三、实验材料 ◼ 绿豆芽下胚轴
三、实验材料 ◼ 绿豆芽下胚轴
四、 实验步骤 试 剂（酶） 用量(ml) 终浓度（比色时） 0.05mol/L磷酸缓冲液 130mmol/L Met溶液 750μmol/L NBT溶液 100μmol/L EDTA-Na2 液 20μmol/L核黄素 酶液 蒸馏水 3 0.6 0.6 0.6 0.6 0.2 0.4 13mmol 75μmol 10μmol 2.0μmol 对照管加缓冲液代替酶液 总体积 6.0 1、酶液提取 2、显色反应 表1 各溶液加入量 3、SOD活性测定
四、 实验步骤 试 剂（酶） 用量(ml) 终浓度（比色时） 0.05mol/L磷酸缓冲液 130mmol/L Met溶液 750μmol/L NBT溶液 100μmol/L EDTA-Na2 液 20μmol/L核黄素 酶液 蒸馏水 3 0.6 0.6 0.6 0.6 0.2 0.4 13mmol 75μmol 10μmol 2.0μmol 对照管加缓冲液代替酶液 总体积 6.0 1、酶液提取 2、显色反应 表1 各溶液加入量 3、SOD活性测定
五、实验结果计算 SOD总活性 = A W a A A V ck E − 0.5 ( ck ) 单位：酶单位/g鲜重表示； Ack―照光对照管的光密度值； AE—样品管的光密度值； V—样液总体积（ml）； a—测定时样品用量（ml）； W—样重（g）；
五、实验结果计算 SOD总活性 = A W a A A V ck E − 0.5 ( ck ) 单位：酶单位/g鲜重表示； Ack―照光对照管的光密度值； AE—样品管的光密度值； V—样液总体积（ml）； a—测定时样品用量（ml）； W—样重（g）；
六、思考题 ◼ 1、在SOD测定中为什么设暗中和照光两个对 照管？ ◼ 2、影响本实验准确性的主要因素是什么？应 如何克服？
六、思考题 ◼ 1、在SOD测定中为什么设暗中和照光两个对 照管？ ◼ 2、影响本实验准确性的主要因素是什么？应 如何克服？