华中农业大学生物化学精品课程组 yangzq@mail.hzau.edu.cn 第十三章 基因转移和基因打靶 第一节基因转移 第二节基因打靶
第十三章 基因转移和基因打靶 第一节 基因转移 第二节 基因打靶
基因转移 应用物理、化学方法将外源基因转移 到受体菌或细胞，并实现其转入基因的扩 增和表达
基因转移：应用物理、化学方法将外源基因转移到受体菌或细胞，并实现其转入基因的扩增和表达。 基因打靶：通过外源基因与靶细胞染色体上同源序列间的重型组，将外源基因定点整合入靶细胞染色体上某一确定位点，或使某一基因发生定位突变的技术 。 基因转移 应用物理、化学方法将外源基因转移 到受体菌或细胞，并实现其转入基因的扩 增和表达
基因打靶 通过外源基因与靶细胞染色体上同 源序列间的重组，将外源基因定点整合 到靶细胞染色体上某一确定位点，或使 某一基因发生定位突变的技术
基因打靶 通过外源基因与靶细胞染色体上同 源序列间的重组，将外源基因定点整合 到靶细胞染色体上某一确定位点，或使 某一基因发生定位突变的技术
第一节基因转移 物理学方法 二、 化学方法 三、生物学方法：
第一节 基因转移 一、物理学方法 二、化学方法 三、生物学方法：
物理学方法 1、显微注射法 2、电穿孔法 3、基因抢法
一、物理学方法 1、显微注射法 2、电穿孔法 3、基因抢法
1、显微注射法 用玻璃显微注射器，在外科手术显微 镜下将外源DNA直接注射入靶细胞的核内。 其受体细胞主要是体积较大的受精卵细胞， 这也是转基因动物的常用方法之一
1、显微注射法： 用玻璃显微注射器，在外科手术显微 镜下将外源D NA直接注射入靶细胞的核内 。 其受体细胞主要是体积较大的受精卵细胞， 这也是转基因动物的常用方法之一
用贴塑培养的体细胞作为受体细胞， 注入核内的外源基因大约有25%整合到受 体细胞的染色体中，并稳定表达。 方法的熟练十分重要，用电脑控制 的微注射装置，每小时可注1500个细胞
用贴塑培养的体细胞作为受体细胞， 注入核内的外源基因大约有25%整合到受 体细胞的染色体中，并稳定表达。 方法的熟练十分重要，用电脑控制 的微注射装置，每小时可注1500个细胞
2、电穿孔法： 在高压电场的短暂作用下，细胞 膜上可出现可逆的孔洞，外源DNA可通 过此孔洞进入胞内。 方法适应不同细胞如细菌、酵母 植物及动物细胞。需电穿孔仪
2、电穿孔法： 在高压电场的短暂作用下，细胞 膜上可出现可逆的孔洞 ，外源D NA可通 过此孔洞进入胞内 。 方法适应不同细胞如细菌、酵母 、 植物及动物细胞。 需电穿孔仪
方法：细胞悬浮于石英池内，将外源 DNA加入到池内的介质中，池的两边有两个 电极，接高压电源。 当给予极短的高压脉冲电场时，在细 胞膜两边产生一个高于其阀电位的膜电压 势能，使细胞膜被打碎，形成许多瞬间小 孔，允许外源DNA分子进入
方法：细胞悬浮于石英池内，将外源 DNA加入到池内的介质中，池的两边有两个 电极，接高压电源。 当给予极短的高压脉冲电场时，在细 胞膜两边产生一个高于其阀电位的膜电压 势能，使细胞膜被打碎，形成许多瞬间小 孔，允许外源DNA分子进入
此法可将150kb的DNA分子转入灵长类 动物细胞。 该法简单，复制性好，效率高，尤其 是酵母细胞和细菌，远高于化学法，且转 染DNA的突变率也比化学法低。 适用于克隆基因的短暂或持续表达。 缺点：细胞损伤较大，不易成活
此法可将150kb的DNA分子转入灵长类 动物细胞。 该法简单，复制性好，效率高，尤其 是酵母细胞和细菌，远高于化学法，且转 染DNA的突变率也比化学法低。 适用于克隆基因的短暂或持续表达。 缺点：细胞损伤较大，不易成活