Agilent1100型高效液相色谱仪[美国Agilent公司]一：仪器原理及结构高效液相色谱（简称HPLC）是色谱法中最重要的一个分支。与气相色谱相比，HPLC的分离模式更为多样化，适用样品范围更广。它不仅能分离高沸点、强极性和热不稳定的化合物，而且适合于离子性、大分子及具有生物活性的化合物的分离。据估计，自然界20%的已知化合物能用气相色谱直接分析，而70%以上都可用HPLC分析。另外，经HPLC分离后的样品组分很容易收集，故能用于制备分离。HPLC有多种分离模式，但其仪器结构都基本相同，仪器流程如下：流动相置于储液瓶，由四元泵输入系统，样品用自动进样器从进样阀引入，经色谱柱分离后进入检测器进流动池，吸光度信号经放大后由记录仪记录。检测器则主要有UV-VIS、二极管阵列、示差折光、荧光、电化学及质谱等。图3-4为Agilent1100HPLC仪器的结构示意图，它主要由下面几部分组成：（1）真空脱气机：高性能脱气，避免了烦项的操作，可提高仪器的稳定性。（2）四元输液泵：Agilent1100泵是采用新的单向结构的活塞泵。流量设定范围从0.2至10mLminl，精度0.1mL·min。该泵可自动监测压缩性补偿值，保持高压条件下的流量准确度。其压力上限可在0-4×10*kPa(0-6000psi)的范围内调节。（3）自动进样器：样品盘容量100×2mL，样品进样体积为0.1-1500uL。具有操作简便准确度高，重现性好的特点。（4）柱温箱：控温范围：低于室温10℃-80℃，可容纳30cm长的色谱柱，样品在此分离。根据样品类型和分离模式，可选用各种不同的液相色谱柱。1.溶剂柜2.真空脱气机O3.排液阀4.四元泵L5.自动进样器6.柱温箱O7.检测器图3-4Agilent1100HPLC仪器结构示意图（5）DAD检测器：波长范围190-950nm，可变狭缝，可进行自动峰检索，利用紫外谱图进行峰确认。检测最高灵敏度为+1X10"AU(满量程为吸光度单位)。(6）计算机化学工作站。用于记录色谱图及处理数据。二：仪器操作（1）流动相准备。液相色谱对所用流动相要求纯度高，所有溶剂，包括水，均须是HPLC级的。若仪器配有多元泵和梯度装置，则可将不同溶剂分别置于不同的储液瓶。若仪器时单
Agilent 1100 型高效液相色谱仪 [美国 Agilent 公司] 一．仪器原理及结构 高效液相色谱（简称 HPLC）是色谱法中最重要的一个分支。与气相色谱相比，HPLC 的分离模式更为多样化，适用样品范围更广。它不仅能分离高沸点、强极性和热不稳定的化 合物，而且适合于离子性、大分子及具有生物活性的化合物的分离。据估计，自然界 20%的 已知化合物能用气相色谱直接分析，而 70%以上都可用 HPLC 分析。另外，经 HPLC 分离 后的样品组分很容易收集，故能用于制备分离。 HPLC 有多种分离模式，但其仪器结构都基本相同，仪器流程如下：流动相置于储液瓶， 由四元泵输入系统，样品用自动进样器从进样阀引入，经色谱柱分离后进入检测器进流动池， 吸光度信号经放大后由记录仪记录。检测器则主要有 UV-VIS、二极管阵列、示差折光、荧 光、电化学及质谱等。图 3-4 为 Agilent 1100 HPLC 仪器的结构示意图，它主要由下面几部 分组成： （1）真空脱气机：高性能脱气，避免了烦琐的操作，可提高仪器的稳定性。 （2）四元输液泵：Agilent 1100 泵是采用新的单向结构的活塞泵。流量设定范围从 0.2 至 10mL·min-1，精度 0.1mL·min-1。该泵可自动监测压缩性补偿值，保持高压条件下的流 量准确度。其压力上限可在 0-4×104kPa(0-6000psi)的范围内调节。 （3）自动进样器：样品盘容量 100×2mL，样品进样体积为 0.1-1500µL。具有操作简便， 准确度高，重现性好的特点。 （4）柱温箱：控温范围：低于室温 10℃-80℃，可容纳 30cm 长的色谱柱，样品在此分 离。根据样品类型和分离模式，可选用各种不同的液相色谱柱。 1. 溶剂柜 2. 真空脱气机 3. 排液阀 4. 四元泵 5. 自动进样器 6. 柱温箱 7. 检测器 图 3-4 Agilent 1100 HPLC 仪器结构示意图 （5）DAD 检测器：波长范围 190-950nm，可变狭缝，可进行自动峰检索，利用紫外谱 图进行峰确认。检测最高灵敏度为±1×10-5AU (满量程为吸光度单位)。 (6) 计算机化学工作站。用于记录色谱图及处理数据。 二．仪器操作 （1）流动相准备。液相色谱对所用流动相要求纯度高，所有溶剂，包括水，均须是 HPLC 级的。若仪器配有多元泵和梯度装置，则可将不同溶剂分别置于不同的储液瓶。若仪器时单
泵时，只能进行等度操作，故当流动相不是单一溶剂时，必须在使用前混合好，然后进行过滤和脱气处理。溶剂过滤通常用专用过滤器。常用滤膜孔径有0.45和0.22um两种，使用常规色谱柱（2.1~4.6mmI.D.）时用前者即可，使用微径柱时则应用后者。注意，滤膜有水相和有机相之分，分别用于相应的溶剂。若流动相不经过滤就使用，一些可能存在于流动相中的固体颗粒物质将会损坏HPLC泵及堵塞色谱柱。溶剂脱气有多种方法，如加热脱气、真空脱气、超声波脱气和通氨气脱气。现在很多HPLC仪器都有内置脱气装置，但仍须在使用前除去流动相中溶解的气体（主要是空气和氧气），因为如不除去这些气体，就会在液路中形成气泡，干扰仪器的正常工作。此外，流动相中的氧气还可能与固定相或样品反应，这对分析都是不利的。这里我们建议使用超声波脱气方法，该法简便、易行，成本低。注意：样品一般也应过滤处理，尤其是系统没有保护柱时。（2）四元泵的操作。Agilent1100四元泵采用四个进口，一个出口的可编程比例阀设定流量，操作简便直观。操作过程中应注意的问题是：①接通电源之前，将流量设为0.0mL·min。先用10mL专用注射器从排液阀（purge）抽去泵前管路中可能有的气泡，然后，接通电源，再按分析要求设定流量。②分析样品之前应设定上限，以保护色谱柱。一般一根长25cm的色谱柱其压力上限可设为400bar，这样当液路堵塞，压力超过上限值时，泵就会自动停止工作。发生这种情况时，操作者应找出压力升高的原因并排除故障。然后再启动泵重新工作。（3）手动进样器的操作：①将进样阀手柄置手“Load”（右边）位置：②将样品保持手柄置于开启（垂直）位置：③取下样品保持塞，并将其插入进样阀门手柄上的孔中，这样可防止未加塞而进样。④将已吸取样品的注射器插入进样口（插到底），把所需体积的样品注入进样阀的样品环中；③拔出注射器，将样品保持塞插回原位：③将样品保持手柄旋回关闭（水平）位置，再将进样阀手柄置于“Inject（进样）”位置，与此同时，按一下检测器上的标记按钮，开始记录色谱图。这样就完成了进样操作。进样后（一般需数秒钟时间，样品环中的样品溶液可进入色谱柱），进样阀门手柄的位置应按以下原则放置：如果是梯度洗脱、或者是等度洗脱时下一个样品尚未准备好，则让手柄留在“Inject”位置：如果是循环分析、或者是下一个样品已准备好，一旦此次样品分析完便可进样，则将手柄置于“Load”位置。（4）检测器操作。Agilent1100DAD检测器的操作是在化学工作站上进行，只要设置合适的检测波长、狭缝大小等操作参数，就可记录下所需的色谱图。DAD检测器还具备内部自检功能以及多种信号控制功能，详细操作方法及注意事项请参看仪器操作手册
泵时，只能进行等度操作，故当流动相不是单一溶剂时，必须在使用前混合好，然后进行过 滤和脱气处理。 溶剂过滤通常用专用过滤器。常用滤膜孔径有 0.45 和 0.22µm 两种，使用常规色谱柱 （2.1~4.6 mm I.D.）时用前者即可，使用微径柱时则应用后者。注意，滤膜有水相和有机相 之分，分别用于相应的溶剂。若流动相不经过滤就使用，一些可能存在于流动相中的固体颗 粒物质将会损坏 HPLC 泵及堵塞色谱柱。 溶剂脱气有多种方法，如加热脱气、真空脱气、超声波脱气和通氦气脱气。现在很多 HPLC 仪器都有内置脱气装置，但仍须在使用前除去流动相中溶解的气体（主要是空气和氧 气），因为如不除去这些气体，就会在液路中形成气泡，干扰仪器的正常工作。此外，流动 相中的氧气还可能与固定相或样品反应，这对分析都是不利的。这里我们建议使用超声波脱 气方法，该法简便、易行，成本低。 注意：样品一般也应过滤处理，尤其是系统没有保护柱时。 （2）四元泵的操作。Agilent 1100 四元泵采用四个进口，一个出口的可编程比例阀设定 流量，操作简便直观。操作过程中应注意的问题是： ① 接通电源之前，将流量设为 0.0mL·min-1。先用 10mL 专用注射器从排液阀（purge） 抽去泵前管路中可能有的气泡，然后，接通电源，再按分析要求设定流量。 ② 分析样品之前应设定上限，以保护色谱柱。一般一根长 25cm 的色谱柱其压力上限 可设为 400bar，这样当液路堵塞，压力超过上限值时，泵就会自动停止工作。发生这种情况 时，操作者应找出压力升高的原因并排除故障。然后再启动泵重新工作。 （3）手动进样器的操作： ① 将进样阀手柄置于“Load”（右边）位置； ② 将样品保持手柄置于开启（垂直）位置； ③ 取下样品保持塞，并将其插入进样阀门手柄上的孔中，这样可防止未加塞而进样。 ④ 将已吸取样品的注射器插入进样口（插到底），把所需体积的样品注入进样阀的样品 环中； ⑤ 拔出注射器，将样品保持塞插回原位； ⑥ 将样品保持手柄旋回关闭（水平）位置，再将进样阀手柄置于“Inject（进样）”位置， 与此同时，按一下检测器上的标记按钮，开始记录色谱图。这样就完成了进样操作。 进样后（一般需数秒钟时间，样品环中的样品溶液可进入色谱柱），进样阀门手柄的位 置应按以下原则放置： 如果是梯度洗脱、或者是等度洗脱时下一个样品尚未准备好，则让手柄留在“Inject”位 置；如果是循环分析、或者是下一个样品已准备好，一旦此次样品分析完便可进样，则将手 柄置于“Load”位置。 （4）检测器操作。Agilent 1100 DAD 检测器的操作是在化学工作站上进行，只要设置 合适的检测波长、狭缝大小等操作参数，就可记录下所需的色谱图。 DAD 检测器还具备内部自检功能以及多种信号控制功能，详细操作方法及注意事项请 参看仪器操作手册