Unimicro型高效液相色谱仪[中国Unimicro公司]一、原理及仪器组成高效液相色谱（简称HPLC）是色谱法中最重要的一个分支。与气相色谱相比，HPLC的分离模式更为多样化，适用样品范围更广。它不仅能分离高沸点、强极性和热不稳定的化合物，而且适合于离子性、大分子及具有生物活性的化合物的分离。据估计，自然界20%的已知化合物能用气相色谱直接分析，而70%以上都可用HPLC分析。另外，经HPLC分离后的样品组分很容易收集，故能用于制备分离。HPLC有多种分离模式，但其仪器结构都基本相同，主要由以下几部分组成：溶剂柜、真空脱气机、四元输液泵、自动进样器、柱温箱、检测器、计算机化学工作站。二、仪器操作1.流动相准备：液相色谱对所用流动相要求纯度高，所有溶剂，包括水，均须是HPLC级的。溶剂过滤通常用专用过滤器。常用滤膜孔径有0.45和0.22um两种，使用常规色谱柱（2.1~4.6mml.D.）时用前者即可，使用微径柱时则应用后者。注意，滤膜有水相和有机相之分，分别用于相应的溶剂。2.开机（1）.先开计算机，接着打开脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、检测器电源开关，等联机后调出Instrumentalonline，仪器模块自检。（2）.打开Purge阀，单击Pump图标Setup，编辑Pump流量（从零开始，逐渐增加），点击OK冲洗管线直到管线内无气泡，待降低Pump流量后，切换通道继续Purge，直到所有管线内无气泡。（3），单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。（4）.进行自动进样器参数设定，检测器参数设定、输入流动相组成、输入柱子的最大耐压等。（5），单击Method>Savemethodas，输入一方法名，单击OK。（6）如果是手动进样，.单击Runcontrol>Sampleinfo，输入操作者名，datafile，选择manualorprefix（7），等仪器ready，基线平稳后，点击start开始进样测量。3.关机（1）先用适宜配比的溶剂冲洗系统适当的时间（2）.待pump的flow降为零后，点击off，关闭检测器和柱温箱。（3）退出化学工作站及其它窗口。（4）.关掉Agilent1100LC各组件电源开关，最后关计算机。4操作过程中应注意的问题是：（1）.接通电源之前，将流量设为0.0mL·min。先用10mL专用注射器从排液阀（purge）抽去泵前管路中可能有的气泡，然后，接通电源，再按分析要求设定流量。（2）.分析样品之前应设定压力上限，以保护色谱柱。一般一根长25cm的色谱柱其压力上限可设为400bar，这样当液路堵塞，压力超过上限值时，泵就会自动停止工作
Unimicro 型高效液相色谱仪 [中国 Unimicro 公司] 一、原理及仪器组成 高效液相色谱（简称 HPLC）是色谱法中最重要的一个分支。与气相色谱相比，HPLC 的分离模式更 为多样化，适用样品范围更广。它不仅能分离高沸点、强极性和热不稳定的化合物，而且适合于离子性、 大分子及具有生物活性的化合物的分离。据估计，自然界 20%的已知化合物能用气相色谱直接分析，而 70%以上都可用 HPLC 分析。另外，经 HPLC 分离后的样品组分很容易收集，故能用于制备分离。 HPLC 有多种分离模式，但其仪器结构都基本相同，主要由以下几部分组成：溶剂柜、真空脱气机、 四元输液泵、自动进样器、柱温箱、检测器、计算机化学工作站。 二、仪器操作 1．流动相准备: 液相色谱对所用流动相要求纯度高，所有溶剂，包括水，均须是 HPLC 级的。溶剂 过滤通常用专用过滤器。常用滤膜孔径有 0.45 和 0.22µm 两种，使用常规色谱柱（2.1~4.6 mm I.D.）时用 前者即可，使用微径柱时则应用后者。注意，滤膜有水相和有机相之分，分别用于相应的溶剂。 2．开机 （1）.先开计算机，接着打开脱气机、四元泵 、自动进样器、柱温箱、检测器电源开关，等联机后, 调出 Instrumental online, 仪器模块自检。 （2）.打开 Purge 阀，单击 Pump 图标 Setup, 编辑 Pump 流量（从零开始，逐渐增加），点击 OK， 冲洗管线直到管线内无气泡，待降低 Pump 流量后，切换通道继续 Purge，直到所有管线内无气泡。 （3）.单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。 （4）.进行自动进样器参数设定, 检测器参数设定、输入流动相组成、输入柱子的最大耐压等。 （5）.单击 Method>Save method as, 输入一方法名,单击 OK。 （6）.如果是手动进样，.单击 Run control >Sample info, 输入操作者名,data file ,选择 manual or prefix. （7）.等仪器 ready, 基线平稳后, 点击 start 开始进样测量。 3. 关机 （1）.先用适宜配比的溶剂冲洗系统适当的时间。 （2）.待 pump 的 flow 降为零后, 点击 off, 关闭检测器和柱温箱。 （3）.退出化学工作站及其它窗口。 （4）.关掉 Agilent 1100 LC 各组件电源开关, 最后关计算机。 4．操作过程中应注意的问题是： （1）.接通电源之前，将流量设为 0.0mL·min-1。先用 10mL 专用注射器从排液阀（purge）抽去泵 前管路中可能有的气泡，然后，接通电源，再按分析要求设定流量。 （2）.分析样品之前应设定压力上限，以保护色谱柱。一般一根长 25cm 的色谱柱其压力上限可设 为 400bar，这样当液路堵塞，压力超过上限值时，泵就会自动停止工作