第七章流式细胞分析 仪器与技术 临床微生物学与免疫学检验教研室赵玉洁
临床微生物学与免疫学检验教研室 赵玉洁
教学大纲 ☆掌握：流式细胞术和流式细胞仪基本概念、 流式细胞仪的原理和基本结构 ☆熟悉：流式细胞仪性能指标、技术要点、应用与维护 ☆了解：Luminex技术
教学大纲 掌握：流式细胞术和流式细胞仪基本概念、 流式细胞仪的原理和基本结构 熟悉：流式细胞仪性能指标、技术要点、应用与维护 了解：Luminex技术
一、基本概念 >流式细胞术 以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单 个细胞或生物学颗粒的理化特性进行多参数定量分析和分 选的技术。 >流式细胞仪(Flow cytometry,FCM) 在流式细胞术基础上发展起来的一种仪器，它整合了 免疫细胞化学染色技术、流体力学、激光技术、计算机技 术等在内的多项技术
一、基本概念 ➢流式细胞术 以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单 个细胞或生物学颗粒的理化特性进行多参数定量分析和分 选的技术。 ➢流式细胞仪 (Flow cytometry，FCM) 在流式细胞术基础上发展起来的一种仪器，它整合了 免疫细胞化学染色技术、流体力学、激光技术、计算机技 术等在内的多项技术
年D FACSCa FACS Calibur FACS Canto IⅡ MoFlo XDP
FACS Calibur FACS Canto II MoFlo XDP
二、流式细胞仪基本结构及原理 荧光检界 液流系统 狂刚最液 流动室 家复声探蕊松 液流驱动系统 分光镜 光路系统 流动室 炎光集光器 光松海器 激光光源 激发光 光收集系统 的向角微射光集光器 信号检测系统 激发光来 光电转换 正电荷赠转板 负电街编转板 主控计算机 数据处理系统 分选系统 左德细电牧集 右侧细胞收集器 中央收集城
二、流式细胞仪基本结构及原理 • 液流系统 流动室 液流驱动系统 • 光路系统 激光光源 光收集系统 • 信号检测系统 光电转换 ⚫ 数据处理系统 • 分选系统
(一)液流系统 1.流动室：是流式细胞仪的核心部件。流动室中，被测细 胞逐个通过，并在此与激光正交。 进样 荧光信号 鞘液 激光束 流动室示意图
（一） 液流系统 1. 流动室: 是流式细胞仪的核心部件。流动室中，被测细 胞逐个通过，并在此与激光正交。 流动室示意图
2.液流驱动系统 鞘液压力 周节 空气东 鞘液 压力传感器 样本管 Hi Med 样本压力调节 Low 0 液流驱动系统示意图
液流驱动系统示意图 2. 液流驱动系统
3.进样速率控制 通过改变样本压力可以调节样本的进样速率，而这并不 是提高样本流的流速，而是改变了细胞之间的距离。 高速时样本流变宽，单位时间内流经激光照射区的细胞 数就增加，这样会导致变异系数增加。 低速(Low) 高速(Hi) 10 psi 10psi 10.2 psi 108ps1
3. 进样速率控制 ❖通过改变样本压力可以调节样本的进样速率，而这并不 是提高样本流的流速，而是改变了细胞之间的距离。 ❖高速时样本流变宽，单位时间内流经激光照射区的细胞 数就增加，这样会导致变异系数增加。 10 psi 10.8 psi 10 psi 10.2 psi
(二)光路系统 1.激发光源 ◇激光特点：单波长、高强度、高稳定性光照。 ◇激光器： 气体激光器：氩离子(488nm、355nm)、氦氖(633nm)、 氪离子(647nm)、氪氩568nm)； 染料激光器：如氩离子激光泵浦的水溶液染料激光器，发 出550-650nm可变波长激发光； 半导体激光器：价格低、结构简单、寿命长。BD的FACS Calibui已采用635nm半导体激光器。 ◇现在仪器常配有仪器选配2-4根激光器，波长多为488nm、 633nm和355nm、405nmUV
1. 激发光源 激光特点：单波长、高强度、高稳定性光照。 激光器： 气体激光器：氩离子(488nm、355nm)、氦氖(633nm)、 氪离子 (647nm)、氪氩(568nm)； 染料激光器：如氩离子激光泵浦的水溶液染料激光器，发 出550-650nm可变波长激发光； 半导体激光器：价格低、结构简单、寿命长。BD的FACS Calibu已采用635nm半导体激光器。 现在仪器常配有仪器选配2-4根激光器，波长多为488nm、 633nm和355nm、405nmUV。 （二） 光路系统
2.光束成行系统 488nm氩离子激光 聚焦光学镜 流动室 900um 10um 633nm氦氖激光 488nm氩离子激光 流动室 聚焦光学镜
2. 光束成行系统