实验五 金免疫技术 检验医学院 临床微生物免疫检验教研室 何应中
实验五 金免疫技术 检验医学院 临床微生物免疫检验教研室 何应中
目的与要求 掌握：斑点金免疫渗滤试验检测抗dsDNA及胶 体 金免疫层析试验检测抗HCV的原理 熟悉：斑点金免疫渗滤法检测抗dsDNA和胶体 金 免疫层析法检测抗HCV的操作及结果判断 了解：金免疫技术的临床应用
一 目的与要求 掌握: 斑点金免疫渗滤试验检测抗dsDNA及胶 体 金免疫层析试验检测抗HCV的原理 熟悉: 斑点金免疫渗滤法检测抗dsDNA和胶体 金 免疫层析法检测抗HCV的操作及结果判断 了解: 金免疫技术的临床应用
概念 1.胶体金：(colloidal gold)t也称金溶胶(gold solution), 是由金盐还原成原金后形成的金颗粒悬液，具有 高电子密度的特性。 2.免疫金(immunogold):胶体金与抗原（抗体）的结 合物称为免疫金。胶体金表面带负电荷，与蛋白 质（抗原或抗体）带正电荷相互吸引而构成
二 概念 1.胶体金:(colloidal gold)也称金溶胶(gold solution), 是由金盐还原成原金后形成的金颗粒悬液,具有 高电子密度的特性。 2.免疫金(immunogold) :胶体金与抗原(抗体)的结 合物称为免疫金。胶体金表面带负电荷,与蛋白 质(抗原或抗体)带正电荷相互吸引而构成
3.免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在 金标蛋白结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒， 当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉 眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半 定量的快速免疫检测
3.免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在 金标蛋白结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒， 当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉 眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半 定量的快速免疫检测
金标记常与膜载体配合，形成特定的测定模 式。代表性的试验：①斑点金免疫渗滤试验和 ②胶体金免疫层析试验，是目前临床上应用比 较广泛和简单的快速检验方法，也是即时检验 (point of care test,.POCT)的主要方法之一。 dfiaoy002
金标记常与膜载体配合，形成特定的测定模 式。代表性的试验:①斑点金免疫渗滤试验和 ②胶体金免疫层析试验,是目前临床上应用比 较广泛和简单的快速检验方法,也是即时检验 (point of care test, POCT)的主要方法之一
三斑点金免疫渗滤试验 (dot immunogold filtration assay,DIGFA) 本次实验以金免疫渗滤间接法检测 抗dsDNA抗体为例进行验证实验 Idfiaoy002
本次实验以金免疫渗滤间接法检测 抗dsDNA抗体为例进行验证实验 三 斑点金免疫渗滤试验 (dot immunogold filtration assay,DIGFA)
(一)实验原理 将纯化的dsDNA抗原点加包被在硝酸纤维素 (NC)膜上，并贴置于吸水材料上，加入待测血清，如待 测血清中含有抗dsDNA抗体，就与固相NC膜上的 dsDNA抗原结合形成复合物，再加入胶体金标记的 抗人IgG单抗与复合物结合，形成固相dsDNA-抗 dsDNA-金标抗人IgG大分子复合物，洗去过量的 抗体及标记物，大分子复合物聚集NC膜上，呈现红 色斑点（胶体金聚集）即为阳性
（一）实验原理 将纯化的dsDNA抗原点加包被在硝酸纤维素 (NC)膜上,并贴置于吸水材料上,加入待测血清，如待 测血清中含有抗dsDNA抗体，就与固相NC膜上的 dsDNA抗原结合形成复合物，再加入胶体金标记的 抗人IgG单抗与复合物结合，形成固相dsDNA－抗 dsDNA－金标抗人IgG大分子复合物，洗去过量的 抗体及标记物，大分子复合物聚集NC膜上，呈现红 色斑点（胶体金聚集）即为阳性
(二)试剂与器材 1.抗dsDNA抗体检测试剂盒（胶体金免疫斑点渗 滤法)包括①反应板（由塑料小盒、吸水垫料 和包被了dsDNA抗原的NC膜片组成)、②试 剂A(PBS)、③试剂B(胶体金标记抗人IgG单 抗)、滴管等。有商品出售。 2.待测血清临床筛选获得。 3.器材移液器、加样吸嘴、冰箱等
（二）试剂与器材 1.抗dsDNA抗体检测试剂盒(胶体金免疫斑点渗 滤法) 包括①反应板(由塑料小盒、吸水垫料 和包被了dsDNA抗原的NC膜片组成)、②试 剂A(PBS)、③试剂B(胶体金标记抗人IgG单 抗)、滴管等。有商品出售。 2.待测血清 临床筛选获得。 3.器材 移液器、加样吸嘴、冰箱等
●● ●●● e 2人份 海天甚惑 抗双链DNA抗体 斑点反应板 z2027100 双 DNA
●●● ●●●● 渗滤装置 盖 A 微孔膜 固定Ag/Ab) 吸水垫 同 底