实验七性能验证-ELISA检测抗 HCV的检出浪验征 检验医学院 临床微生物免疫检验教研室 何应中
实验七 性能验证-ELISA检测抗 HCV的检出限验证 检验医学院 临床微生物免疫检验教研室 何应中
目的与要求 掌握：ELISA检测抗HCV检出限验证的验证方 法和判断标准 熟悉：ELISA检测抗HCV检出限验证所需要的 仪器和试剂，实验结果的处理及结论的 判定，ELISA检测抗HCV的操作方法。 了解：ELISA检测抗HCV的注意事项
一、目的与要求 掌握: ELISA检测抗HCV检出限验证的验证方 法和判断标准 熟悉: ELISA检测抗HCV检出限验证所需要的 仪器和试剂，实验结果的处理及结论的 判定，ELISA检测抗HCV的操作方法。 了解: ELISA检测抗HCV的注意事项
高速列车性能验证 ·空气动力学 ·速度 车体转向架运行 固定、悬挂的零部件强度 稳定性 舒适感 故障率
高速列车性能验证 • 空气动力学 • 速度 • 车体转向架运行 • 固定、悬挂的零部件强度 • 稳定性 • 舒适感 • 故障率 • ……
测定系统的关键要素 方法学 试剂 测定系统 操作程序 校准品 仪器 第4页
第4页 测定系统 方法学 操作程序 校准品 仪器 试剂 测定系统的关键要素
定性检测系统的性能验证 验证的内容： 1.正确度（准确度） 2.精密度（批内和批间重复性） 3.敏感性 4.特异性 5.CUT0FF值或/和检出限验证 6.其他（需要时)
定性检测系统的性能验证 验证的内容: 1.正确度（准确度） 2.精密度（批内和批间重复性） 3.敏感性 4.特异性 5.CUTOFF值或/和检出限验证 6.其他（需要时）
二、 概念 1.性能验证：性能验证是评价检测系统是否满 足临床检测和认可组织的要求(IS015189), 验证厂家提供的试剂参数能否在本实验室得 到重现。 2.什么时候进行性能验证？ ①使用新的检测试剂或系统时： ②更换检测试剂或系统时
二、概念 1.性能验证：性能验证是评价检测系统是否满 足临床检测和认可组织的要求（ISO15189）， 验证厂家提供的试剂参数能否在本实验室得 到重现。 2.什么时候进行性能验证？ ①使用新的检测试剂或系统时； ②更换检测试剂或系统时
概念 3.更换新的试剂或系统意义： ①更易于操作； ②更高的检测性能； ③更经济： ④更能满足实验室测定要求。 4.检出限验证 将1NCU/ml质控品按照原倍、1：2、1：4、1：8、1：16 倍进行稀释，在同一板上检测筛选，每个稀释度检测 4孔，测定每个浓度的OD值，计算每个浓度的平均OD 值，OD值判读为阴性时的前一个浓度（也就是判为阳 性的最高稀释倍数)即为最低检出限
概念 3.更换新的试剂或系统意义： ①更易于操作； ②更高的检测性能； ③更经济； ④更能满足实验室测定要求。 4.检出限验证 将1NCU/ml质控品按照原倍、1:2、1:4、1:8、1:16 倍进行稀释，在同一板上检测筛选，每个稀释度检测 4孔，测定每个浓度的OD值，计算每个浓度的平均OD 值，OD值判读为阴性时的前一个浓度（也就是判为阳 性的最高稀释倍数）即为最低检出限
三、实验原理 在微孔条上预包被基因工程表达HCV抗原，与血 清中抗HCV抗体反应结合形成HCV抗原-抗HCV复合 物，再加入HRP标记抗人IgG抗体结合物与之结合， 形成HCV抗原-抗HCV-HRP标记抗人IgG复合物，再 用TMB系统A、B液显色，加入硫酸终止后在酶标仪比 色测定OD值，计算S/CO值
三、实验原理 在微孔条上预包被基因工程表达HCV抗原，与血 清中抗HCV抗体反应结合形成HCV抗原-抗HCV复合 物，再加入HRP标记抗人IgG抗体结合物与之结合， 形成HCV抗原-抗HCV-HRP标记抗人IgG复合物，再 用TMB系统A、B液显色，加入硫酸终止后在酶标仪比 色测定OD值，计算S/CO值
侍检抗体 E 酶标记抗抗体 固相抗原 加底物 显色 图20-5间接法测定抗体原理示意图
1.包被抗原 0 抗原 2.洗涤 24 血清稀释度 8 3.加待检抗体 16 抗体 4.洗涤 5.加酶标抗体 128 酶标抗体 256 6.洗涤 512 1024 7加底物显色 底物 o0000ooo 阳性对照 阴性对照 8观察结果 酶联免疫吸附试验(ELISA,间接法) Immunology