第二十七章人类白细胞抗原分型 Chapter 27 Human Leukocyte Antigen Typing 第一部分教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：LA血清学分型和细胞学分型的方法类型、原理和用途：熟悉：基因分型技术 的方法类型、原理和用途：了解：LA血清学分型的技术要点。 二、教学内容 1.血清学分型法：原理，实验流程与结果判断，技术要点，方法评价。 2.细胞分型法：阴性分型法，阳性分型法。 3.基因分型技术：PCR-序列特异性引物分型法，PCR-序列特异性寡核苷酸探针杂交法， PCR-序列测定法，PCR-限制性片段长度多态性分析法。 第二部分测试题 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1.微量补体依赖的细胞毒试验中所用的补体为 A.豚鼠血清 B.兔血清 C.羊血清 D.马血清 E.人 血清 2.LA-I类抗原血清学分型主要应用的试验 A.微量补体依赖的细胞毒试验 B.T淋巴细胞增殖试验 C.T细胞介导的细胞 毒试验 D.溶血空斑试验 E.混合淋巴细胞培养 3.不表达LAI类抗原的细胞是 A.淋巴细胞 B.成熟红细胞 C.血小板 D.脾细胞 E.粒 细胞 4.编码HLA-I类分子的基因位点有 A.LA一A、B位点 B.HLA一A、B、C位点 C.HLA一DR位点 D.LA一DR、DP、DQ位点 E.C4、C2、TNF位点
第二十七章人类白细胞抗原分型 Chapter 27 Human Leukocyte Antigen Typing 第一部分 教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：HLA 血清学分型和细胞学分型的方法类型、原理和用途；熟悉：基因分型技术 的方法类型、原理和用途；了解：HLA 血清学分型的技术要点。 二、教学内容 1．血清学分型法：原理，实验流程与结果判断，技术要点，方法评价。 2．细胞分型法：阴性分型法，阳性分型法。 3．基因分型技术：PCR-序列特异性引物分型法，PCR-序列特异性寡核苷酸探针杂交法， PCR-序列测定法，PCR-限制性片段长度多态性分析法。 第二部分 测试题 一、选择题 （一） 单项选择题（A 型题） 1. 微量补体依赖的细胞毒试验中所用的补体为 A．豚鼠血清 B．兔血清 C．羊血清 D．马血清 E．人 血清 2．HLA-Ⅰ类抗原血清学分型主要应用的试验 A．微量补体依赖的细胞毒试验 B．T 淋巴细胞增殖试验 C．T 细胞介导的细胞 毒试验 D．溶血空斑试验 E．混合淋巴细胞培养 3．不表达 HLAⅠ类抗原的细胞是 A． 淋巴细胞 B．成熟红细胞 C．血小板 D．脾细胞 E．粒 细胞 4．编码 HLA -I 类分子的基因位点有 A．HLA—A、B 位点 B．HLA—A、B、C 位点 C．HLA—DR 位点 D．HLA—DR、DP、DQ 位点 E．C4、C2、TNF 位点
5.最容易发现LA新基因的方法是 A.CDC试验 B.MLR C.PCR-SSP D.PCR-SSO E.PCR-测序 6.CDC试验观察结果用 A.分光光度计B.酶标仪 C.光学显微镜 D.相差显微镜 E.倒置相 差显微镜 （二)多项选择题(X型题) 1.LA-I类抗原分布于如下细胞 A.T细胞 B.B细胞 C.巨噬细胞 D.血小板 E.红细胞 2.LA-Ⅱ类抗原包括的抗原有 A.HLA-A B.HLA-D C.HLA-DP D.HLA-DQ E.HLA-DR 3.LA-Ⅱ类抗原主要表达于如下细胞 A.B淋巴细胞 B.巨噬细胞 C.抗原提呈细胞 D.红细胞 E.T 淋巴细胞 4.LA抗体可来自 A.健康人血清B.产妇血清 C.接受移植者血清D.单克隆抗体 E.兔 抗HLA血清 5.LA血清学分型技术可用于检测 A.HLA-A抗原B.HLA-DP抗原 C.HLA-DR抗原 D.HLA-B抗原 E.HLA-C 抗原 6.可用混合淋巴细胞培养分型方法进行检测的位点有 A.HLA-A B.HLA-B C.HLA-DP D.HLA-DR E.HLA-D 7.下述哪些分子生物学方法可用作LA定型 A.PCR B.PCR-SSP C.PCR-RFLP D.PCR-SSO E.PCR-测序 8.下述哪些是MLC阴性定型法的特征 A.用已知的HTC作应答者 B.用已知HTC作刺激者 D.需培养6天 D.仅需培养2天 E.具有相同抗原时cpm不增高， 9.血清学分型法（微量补体依赖的细胞毒试验，CDC test)临上可应用于 A.LA分型（供移植前配型、疾病相关研究、人类亲缘研究等） B.抗体 筛选
5. 最容易发现 HLA 新基因的方法是 A．CDC 试验 B．MLR C．PCR-SSP D．PCR-SSO E．PCR-测序 6. CDC 试验观察结果用 A．分光光度计 B．酶标仪 C．光学显微镜 D．相差显微镜 E．倒置相 差显微镜 （二）多项选择题（X 型题） 1.HLA-I 类抗原分布于如下细胞 A.T 细胞 B.B 细胞 C.巨噬细胞 D. 血小板 E.红细胞 2．HLA-Ⅱ类抗原包括的抗原有 A．HLA-A B．HLA-D C．HLA-DP D．HLA-DQ E．HLA-DR 3. HLA-Ⅱ类抗原主要表达于如下细胞 A.B 淋巴细胞 B. 巨噬细胞 C. 抗原提呈细胞 D.红细胞 E.T 淋巴细胞 4．HLA 抗体可来自 A．健康人血清 B．产妇血清 C．接受移植者血清 D．单克隆抗体 E．兔 抗 HLA 血清 5．HLA 血清学分型技术可用于检测 A．HLA-A 抗原 B．HLA-DP 抗原 C．HLA-DR 抗原 D．HLA-B 抗原 E．HLA-C 抗原 6．可用混合淋巴细胞培养分型方法进行检测的位点有 A．HLA-A B．HLA-B C．HLA-DP D．HLA-DR E．HLA-D 7．下述哪些分子生物学方法可用作 HLA 定型 A．PCR B．PCR-SSP C．PCR-RFLP D． PCR-SSO E．PCR-测序 8．下述哪些是 MLC 阴性定型法的特征 A．用已知的 HTC 作应答者 B．用已知 HTC 作刺激者 D． 需培养 6 天 D． 仅需培养 2 天 E．具有相同抗原时 cpm 不增高. 9．血清学分型法(微量补体依赖的细胞毒试验，CDC test)临上可应用于 A．HLA 分型（供移植前配型、 疾病相关研究、 人类亲缘研究等） B．抗体 筛选
C.鉴定和交叉配合试验 D.测定T细胞免疫功能 E.B细胞免疫功 能 10.PCR-SSP(序列特异性引物)用于HLA分型具有的特点 A.分辨度高 B.特异性强 C.扩增后处理过程简单 D.只需借助琼脂糖凝胶电泳 E.依据是否出现特异性条带判断结果 二、填空题 1.检测LA抗原的基本方法有 分型法、 分型法和 分型法。 2.CDC试验的分型血清可来自 或 3.CDC试验阳性时，抗原细胞应 4.检测LA-I类抗原时可用 细胞或 细胞，检测HLAⅡ类抗原 时需用 细胞。 5.检测LAⅡ类抗原时，抗血清需用 吸收除去LA类抗体。 6.PCR-SSP分型法是目前最常用于 类基因分型 三.名词解释 l.PCR-序列特异引物分型技术(PCR-polymerase chain reaction with sequence specific primer,PCR-SSP 2.同种免疫血清(isotype-immunoserum) 3.混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture,MLC) 四。问答题 1.检测LA血清学分型法（微量补体依赖的细胞毒试验，CDC test)的原理 2.用血清学分型法检测HLA-Ⅱ类抗原时，和检测I类抗原比较有哪些主要的不同点？ 3.CDC试验中兔补体为何需用多只兔的混合血清？ 4.如何获取B淋巴细胞？ 5.PCR-SSP用于HLA分型的原理 第三部分 参考答案与题解
C．鉴定和交叉配合试验 D．测定 T 细胞免疫功能 E．B 细胞免疫功 能 10．PCR-SSP(序列特异性引物)用于 HLA 分型具有的特点 A．分辨度高 B．特异性强 C．扩增后处理过程简单 D．只需借助琼脂糖凝胶电泳 E．依据是否出现特异性条带判断结果 二、填空题 1．检测 HLA 抗原的基本方法有___________分型法、___________ 分型法和___________ 分型法。 2．CDC 试验的分型血清可来自__________或____________。 3．CDC 试验阳性时，抗原细胞应___________。 4．检测 HLA-Ι类抗原时可用___________细胞或___________细胞 ，检测 HLAⅡ类抗原 时需用___________细胞 。 5．检测 HLAⅡ类抗原时，抗血清需用___________吸收除去 HLA___类抗体。 6．PCR-SSP 分型法是目前最常用于___________类基因分型 三．名词解释 1．PCR-序列特异引物分型技术（PCR-polymerase chain reaction with sequence specific primer，PCR-SSP ） 2．同种免疫血清(isotype-immunoserum) 3． 混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture，MLC） 四．问答题 1．检测 HLA 血清学分型法(微量补体依赖的细胞毒试验，CDC test)的原理 2．用血清学分型法检测 HLA-Ⅱ类抗原时，和检测Ⅰ类抗原比较有哪些主要的不同点？ 3．CDC 试验中兔补体为何需用多只兔的混合血清？ 4．如何获取 B 淋巴细胞? 5．PCR-SSP 用于 HLA 分型的原理 第三部分 参考答案与题解
一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1.B2.A 3.B 4.B5.E 6.E (二)多项选择题(X型题) 1.ABCD 2.BCDE 3.ABC 4.BCD 5.ACDE 6.CE 7.BCDE 8.BCE 9.ABC 10.ABCDE 二、填空题 1.血清学、细胞学、 分子生物学。 2.同种免疫血清、单克隆抗体。 3.死亡。 4.单个核、T淋巴、B淋巴。5.混合血小板、I。6.HLA- Ⅱ。 三.名词解释 1.PCR-SSP:编码各种HLA抗原表型的等位基因不尽相同，可用相应的序列特异性引 物进行扩增。借助琼脂糖凝胶电泳观察是否存在特异性产物的电泳条带进行HLA基因分析。 2.同种免疫血清：存在于同种不同个体间的抗原免疫所诱导生成的抗体。如LA抗体。 3.混合淋巴细胞培养：两个体淋巴细胞在一起培养，若HLA-D,LA-DP抗原不同，可刺 激发生淋巴细胞转化现象。用于LA定型有阳性和阴性定型法。 四.问答题 1。HLA分型采用微量补体依赖的细胞毒试验，其原理是HLA抗体与淋巴细胞表面的相 应抗原结合后激活补体，导致细胞膜损伤，通透性增强，染料进入细胞，在倒置相差显微镜 或倒置荧光显微镜下观察，着染的细胞为死亡细胞，视野下死亡细胞超过40%试验为阳性。 如淋巴细胞膜上无相应的抗原，则不发生反应，为阴性，从而将LA分型。 2。要用B淋巴细胞，抗体要用混合血小板吸收除去I类抗体或用单克隆抗体，孵育时 间需延长。 3。避免因个别兔的补体缺陷造成误差。 4。用尼龙毛法，E花环分离法，免疫磁珠分离法等从单个核细胞悬液中进行分离。 5.PCR-SSP方法的原理是编码各种LA抗原表型的等位基因不尽相同，均可用相应的 序列特异性引物(sequence specific primer,SSP)进行扩增，通过控制PCR反应条件
一、选择题 （一）单项选择题（A 型题） 1．B 2.A 3．B 4．B 5．E 6．E （二）多项选择题（X 型题） 1.ABCD 2.BCDE 3.ABC 4．BCD 5.ACDE 6. CE 7 .BCDE 8.BCE 9.ABC 10.ABCDE 二、填空题 1．血清学、 细胞学、 分子生物学。 2．同种免疫血清、 单克隆抗体。 3．死亡。 4．单个核、 T 淋巴 、 B 淋巴。 5．混合血小板 、 Ⅰ。 6.HLA- Ⅱ。 三．名词解释 1．PCR -SSP ：编码各种 HLA 抗原表型的等位基因不尽相同,可用相应的序列特异性引 物进行扩增。借助琼脂糖凝胶电泳观察是否存在特异性产物的电泳条带进行 HLA 基因分析。 2．同种免疫血清：存在于同种不同个体间的抗原免疫所诱导生成的抗体。如 HLA 抗体。 3．混合淋巴细胞培养：两个体淋巴细胞在一起培养，若 HLA-D,HLA-DP 抗原不同，可刺 激发生淋巴细胞转化现象。用于 HLA 定型有阳性和阴性定型法。 四．问答题 1。HLA 分型采用微量补体依赖的细胞毒试验，其原理是 HLA 抗体与淋巴细胞表面的相 应抗原结合后激活补体，导致细胞膜损伤，通透性增强，染料进入细胞，在倒置相差显微镜 或倒置荧光显微镜下观察，着染的细胞为死亡细胞，视野下死亡细胞超过 40%试验为阳性。 如淋巴细胞膜上无相应的抗原，则不发生反应，为阴性，从而将 HLA 分型。 2。要用 B 淋巴细胞，抗体要用混合血小板吸收除去Ⅰ类抗体或用单克隆抗体，孵育时 间需延长。 3。避免因个别兔的补体缺陷造成误差。 4。用尼龙毛法，E 花环分离法，免疫磁珠分离法等从单个核细胞悬液中进行分离。 5. PCR-SSP 方法的原理是编码各种 HLA 抗原表型的等位基因不尽相同, 均可用相应的 序列特异性引物（sequence specific primer，SSP）进行扩增，通过控制 PCR 反应条件
特异性引物仅扩增与其相应的等位基因特异片段，对扩增的DNA进行琼脂糖凝胶电泳，根据 是否出现特异性产物的电泳条带读取结果。本技术尚设有内对照以控制质量。 (费樱刘若英)
特异性引物仅扩增与其相应的等位基因特异片段，对扩增的 DNA 进行琼脂糖凝胶电泳，根据 是否出现特异性产物的电泳条带读取结果。本技术尚设有内对照以控制质量。 (费櫻 刘若英)