第十九章放射免疫技术 Chapter 19 Radioimmunoassay 第一部分教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：放射免疫分析和免疫放射分析的原理、方法学评价及应用：熟悉：免疫复合物 分离技术；了解：放射性标记物制备和鉴定、免疫复合物分离技术。 二、教学内容 1。概述：放射性核素标记物的制备，抗体选用（亲和常数、特异性、效价），免疫复合 物分离技术，核射线探测仪器结构及其探测原理。 2。放射免疫分析：原理，技术要点，方法学评价。 3。免疫放射分析：原理，技术要点，方法学评价。 4.放射免疫技术的应用：激素的测定，药理学方面，其他。 第二部分测试题 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1.放射免疫分析的创建者和创建时间 A.Coons于1941年创建 B.Berson和Yallow于1959年创建 C.Nakene和Pierce于1966年创建 D.Miles和Hales于1968年创建 E.Engral1和Perlmann于1971年创建 2.放射性核素的选择原则不包括 A.高比活度 B.适宜半衰期 C.对抗原或抗体活性没有影响 D.容易标记 E.标记物易于保存 3.最理想且临床最常用的放射性核素为 A.1251 B.5Cr C.Co D.H E.181 4.释放B射线核素 A.125I B.5Cr C.Co D.H E. 13 5.H标记放射免疫技术比125I标记放射免疫技术优越的是
第十九章 放射免疫技术 Chapter 19 Radioimmunoassay 第一部分 教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：放射免疫分析和免疫放射分析的原理、方法学评价及应用；熟悉：免疫复合物 分离技术；了解：放射性标记物制备和鉴定、免疫复合物分离技术。 二、教学内容 1。概述：放射性核素标记物的制备，抗体选用（亲和常数、特异性、效价），免疫复合 物分离技术，核射线探测仪器结构及其探测原理。 2。放射免疫分析：原理，技术要点，方法学评价。 3。免疫放射分析：原理，技术要点，方法学评价。 4．放射免疫技术的应用：激素的测定，药理学方面，其他。 第二部分 测试题 一、选择题 （一）单项选择题（A 型题） 1.放射免疫分析的创建者和创建时间 A.Coons于1941年创建 B.Berson 和 Yallow于 1959年创建 C.Nakene 和 Pierce 于 1966 年创建 D.Miles 和 Hales 于 1968 年创建 E.Engrall 和 Perlmann 于 1971 年创建 2.放射性核素的选择原则不包括 A.高比活度 B.适宜半衰期 C.对抗原或抗体活性没有影响 D.容易标记 E.标记物易于保存 3.最理想且临床最常用的放射性核素为 A.125I B.51Cr C.60Co D.3 H E.131I 4. 释放β射线核素 A.125I B.51Cr C.60Co D.3 H E.131 I 5.3 H 标记放射免疫技术比 125I 标记放射免疫技术优越的是
A.标记方法简便 B.放射性测量方法简便，效率高 C.易获得高比放射性标记物 D.标记物保存期较长 E.放射性废弃物处理较易 6.下列关于抗体质量指标K值的描述，正确的是 A.抗体K值越小，放射免疫分析的灵敏度、精确度和准确度越佳 B.抗体K值越大，放射免疫分析的灵敏度、精确度越佳，但准确度越差 C.抗体K值越大，放射免疫分析的准确度越佳，但灵敏度和精确度越差 D.K值达到10°一10mol/L,才适用于放射免疫技术。 E.放射性标记物、待测抗原和标准品对同一抗体应具有完全相同的K值，否则测定结果 将失真 7.直接标记法制备放射性标记结合物时，常用的氧化剂为 A.氯胺T B.乳过氧化物酶 C.N-溴代琥珀酰亚胺 D.H02 E.SHPP 8.关于直接法制备放射性标记结合物，下列说法正确的是 A.通过小分子载体使25I与蛋白结合 B.能标记所有蛋白质或多肽 C.125I标记对蛋白质的活性无影响 D.常用的氧化剂是氯胺T E.125I标记物的比放射性较低 9.有关放射性标记物的放射化学纯度的描述，正确的是 A.是指结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率 B.是指单位质量标记物的放射强度 C.是指标记抗原结合于抗体的放射强度占总放射强度的百分率 D.放射化学纯度测定方法是加10倍量抗体和标记抗原反应，测算出B/B+P的百分率 E.标记后放射性标记物的分离纯化程度不影响其放射化学纯度 10.有关放射免疫分析原理的描述，正确是 A.Ag和Ag*与相应A仙的结合能力相同 B.Ag*为限量，待测Ag竞争性抑制Ag*与Ab 的结合 C.Ag*Ab复合物量与待测Ag量成正比 D.反应平衡时，游离放射性强度(F)与待 测Ag量成正比 E.标记抗体为过量 11.表示抗体的特异性指标是
A.标记方法简便 B.放射性测量方法简便，效率高 C.易获得高比放射性标记物 D.标记物保存期较长 E.放射性废弃物处理较易 6.下列关于抗体质量指标 K 值的描述，正确的是 A.抗体 K 值越小，放射免疫分析的灵敏度、精确度和准确度越佳 B.抗体 K 值越大，放射免疫分析的灵敏度、精确度越佳，但准确度越差 C.抗体 K 值越大，放射免疫分析的准确度越佳，但灵敏度和精确度越差 D.K 值达到 106―109 mol/L，才适用于放射免疫技术。 E.放射性标记物、待测抗原和标准品对同一抗体应具有完全相同的 K 值，否则测定结果 将失真 7.直接标记法制备放射性标记结合物时，常用的氧化剂为 A.氯胺 T B.乳过氧化物酶 C.N-溴代琥珀酰亚胺 D.H2O2 E.SHPP 8.关于直接法制备放射性标记结合物，下列说法正确的是 A.通过小分子载体使 125I 与蛋白结合 B.能标记所有蛋白质或多肽 C.125I 标记对蛋白质的活性无影响 D.常用的氧化剂是氯胺 T E.125I 标记物的比放射性较低 9.有关放射性标记物的放射化学纯度的描述，正确的是 A.是指结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率 B.是指单位质量标记物的放射强度 C.是指标记抗原结合于抗体的放射强度占总放射强度的百分率 D.放射化学纯度测定方法是加 10 倍量抗体和标记抗原反应，测算出 B/B+F 的百分率 E.标记后放射性标记物的分离纯化程度不影响其放射化学纯度 10.有关放射免疫分析原理的描述，正确是 A.Ag 和 Ag*与相应 Ab 的结合能力相同 B.Ag*为限量，待测 Ag 竞争性抑制 Ag*与 Ab 的结合 C.Ag*Ab 复合物量与待测 Ag 量成正比 D.反应平衡时，游离放射性强度（F）与待 测 Ag 量成正比 E.标记抗体为过量 11.表示抗体的特异性指标是
A.免疫活性 B.亲和常数（常用K值来表示） C.效价 D.交叉反应率 比放射性 12.反映抗体与相应抗原结合的能力的指标是 A.免疫活性B.亲和常数（常用K值来表示） C.效价 D.交叉反应率 E. 放射化学纯度 13.反映标记抗原结合于抗体的放射强度占总放射强度的百分率的指标是 A.放射化学纯度B.免疫活性 C.比放射性 D.交叉反应率 E.亲和常数 14.表示单位质量标记物的放射强度的指标是 A.放射化学纯度 B.免疫活性C.比放射性 D.交叉反应率 E.亲和常数 15.融合了特异性和非特异性B/R分离技术特点的方法是 A.活性炭吸附法B.双抗体法C.固相分离法 D.PR试剂法E.化学沉淀法 16.关于放射免疫分析中分离方法的选择要求，下列描述错误的是 A.分离应彻底、迅速 B.操作应简便，重复性好 C.分离过程应不影响免疫复合物 的形成 D.分离效果应受反应介质影响 E.试剂来源容易，价格低廉 17.在放射免疫分析中，制作标准曲线形状不受放射性标记物的衰变影响的反应参数是 A.B/F B.B/T C.F/B D.B/Bo E.B 18.为使放射免疫分析的标准曲线直线化，实验数据进行转化应采用的方法是 A.半对数法 B.双对数法 C.二元三次方程法 D.联结法 E.1og-logit方式进行数据转化法 19.在放射免疫分析中，使标准曲线呈正比例双曲线，横坐标是测定物标准品浓度，纵 坐标是 A.B/F B.B/T C.F/B D.B/Bo E.B 20.免疫放射分析方法创建者为 A.Coons于1941年创建 B.Berson和Yal1ow于1959年创建 C.Nakene和Pierce于1966年创建 D.Miles和Hales于1968年创建 E.Engral1和Perlmann于1971年创建 21.与放射免疫分析相比，免疫放射分析最显著特点是 A.使用单克隆抗体 B.采用固相分离法
A.免疫活性 B.亲和常数（常用 K 值来表示） C.效价 D.交叉反应率 E. 比放射性 12.反映抗体与相应抗原结合的能力的指标是 A.免疫活性 B.亲和常数（常用 K 值来表示） C.效价 D.交叉反应率 E. 放射化学纯度 13.反映标记抗原结合于抗体的放射强度占总放射强度的百分率的指标是 A.放射化学纯度 B.免疫活性 C.比放射性 D.交叉反应率 E.亲和常数 14.表示单位质量标记物的放射强度的指标是 A.放射化学纯度 B.免疫活性 C.比放射性 D.交叉反应率 E.亲和常数 15.融合了特异性和非特异性 B/F 分离技术特点的方法是 A.活性炭吸附法 B.双抗体法 C.固相分离法 D.PR 试剂法 E.化学沉淀法 16.关于放射免疫分析中分离方法的选择要求，下列描述错误的是 A.分离应彻底、迅速 B.操作应简便，重复性好 C.分离过程应不影响免疫复合物 的形成 D.分离效果应受反应介质影响 E.试剂来源容易，价格低廉 17.在放射免疫分析中，制作标准曲线形状不受放射性标记物的衰变影响的反应参数是 A.B/F B.B/T C.F/B D.B/B0 E.B 18.为使放射免疫分析的标准曲线直线化，实验数据进行转化应采用的方法是 A.半对数法 B.双对数法 C.二元三次方程法 D.联结法 E.log-logit 方式进行数据转化法 19.在放射免疫分析中，使标准曲线呈正比例双曲线，横坐标是测定物标准品浓度，纵 坐标是 A.B/F B.B/T C.F/B D.B/B0 E.B 20.免疫放射分析方法创建者为 A.Coons于1941年创建 B.Berson 和 Yallow于 1959年创建 C.Nakene 和 Pierce 于 1966 年创建 D.Miles 和 Hales 于 1968 年创建 E.Engrall 和 Perlmann 于 1971 年创建 21.与放射免疫分析相比，免疫放射分析最显著特点是 A.使用单克隆抗体 B.采用固相分离法
C.反应属于非竞争性结合 D.可以测定大分子和小分子抗原 E.灵敏度较高 22.关于免疫放射分析的描述，正确的是 A.反应体系中，相对于抗原，标记抗体是过量的 B.单位点和双位点IRMA均采用固相抗体作分离 C.抗原与抗体的结合属于竞争性结合 D.反应平衡时，游离标记物量与待测抗原量成正比 E.反应平衡时，待测抗原量与结合的Ag-Ab成反比 23.为提高放射免疫分析的检测灵敏度，方法学设计时应注意避免 A.制备高比放射性的标记物 B.增加抗体的用量 C.选用顺序饱和法实验流程 D.筛选高亲和力的抗体 E.选用特异性B/R分离方法 24.与RIA比较，IRMA最突出的特点是 A.IRMA的反应速度更慢 B.非竞争结合，使IRMA灵敏度更高 C.抗体用量较少，但对K值要求更高 D.反应参数与待测抗原含量成反比 E.单位点IRMA采用固相抗体分离法 25.放射性活度是指 A.单位时间内的核衰变数，即每秒衰变次数，用贝可勒尔(Becquerel,Bq)表示 B.单位质量样品中所含放射性活度，以Bq/g或Bq/mmol表示 C.单位体积溶液中所含放射性活度，以Bq/ml表示 D.结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率：即碘化蛋白质的放射强度占总放射 强度的百分率 E.单位质量标记物的放射强度，单位为Ba/μg (二)多项选择题(X型题) 1.释放Y射线的核素包括
C.反应属于非竞争性结合 D.可以测定大分子和小分子抗原 E.灵敏度较高 22.关于免疫放射分析的描述，正确的是 A.反应体系中，相对于抗原，标记抗体是过量的 B.单位点和双位点 IRMA 均采用固相抗体作分离 C.抗原与抗体的结合属于竞争性结合 D.反应平衡时，游离标记物量与待测抗原量成正比 E.反应平衡时，待测抗原量与结合的* Ag-Ab 成反比 23.为提高放射免疫分析的检测灵敏度，方法学设计时应注意避免 A.制备高比放射性的标记物 B.增加抗体的用量 C.选用顺序饱和法实验流程 D.筛选高亲和力的抗体 E.选用特异性 B/F 分离方法 24.与 RIA 比较，IRMA 最突出的特点是 A.IRMA 的反应速度更慢 B.非竞争结合，使 IRMA 灵敏度更高 C.抗体用量较少，但对 K 值要求更高 D.反应参数与待测抗原含量成反比 E.单位点 IRMA 采用固相抗体分离法 25.放射性活度是指 A.单位时间内的核衰变数，即每秒衰变次数，用贝可勒尔(Becquerel，Bq)表示 B.单位质量样品中所含放射性活度，以 Bq/g 或 Bq/mmol 表示 C.单位体积溶液中所含放射性活度，以 Bq/m1 表示 D.结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率;即碘化蛋白质的放射强度占总放射 强度的百分率 E.单位质量标记物的放射强度，单位为 Bq/g （二）多项选择题（X 型题） 1.释放γ射线的核素包括
A.1251 B.CrsI C.Co D.“c E.H 2.放射免疫技术中所使用的抗体要求 A.高亲和常数 B.交叉反应率低 C.抗体滴度高 D.IgM类 E.单克隆抗体 3.用于放射性标记的抗原要求 A.抗原纯度高 B.足够或完整的免疫活性 C.完全抗原 D.抗原稳定性 E.基因重组多肽 4.用于放射性标记的抗原或抗体的质量主要影响方法学的 A.灵敏度 B.特异性 C.准确度 D.线性范围 E.精确度 5.25I标记放射免疫技术在下列哪方面优于H标记放射免疫技术 A.标记方法简便，易获得高比放射性标记物 B.放射性测量方法简便，效率高 C,对标记化合物影响较少，不影响抗原免疫学活性 D.标记物保存期较长 E.放射性废弃物处理较易 6.关于间接标记法标记251的描述，正确的是 A.避免氧化剂和蛋白质直接接触，对蛋白质活性影响较小 B.25I通过SHPP连接到蛋白质分子表面赖氨酸残基的氨基或蛋白质的活性中心，蛋白 质生物活性影响较少
A.125I B. Cr51 C.60Co D. 14C E. 3 H 2.放射免疫技术中所使用的抗体要求 A.高亲和常数 B.交叉反应率低 C.抗体滴度高 D.IgM 类 E.单克隆抗体 3.用于放射性标记的抗原要求 A.抗原纯度高 B.足够或完整的免疫活性 C.完全抗原 D.抗原稳定性 E.基因重组多肽 4.用于放射性标记的抗原或抗体的质量主要影响方法学的 A.灵敏度 B.特异性 C.准确度 D.线性范围 E.精确度 5.125I 标记放射免疫技术在下列哪方面优于 3 H 标记放射免疫技术 A.标记方法简便，易获得高比放射性标记物 B.放射性测量方法简便，效率高 C.对标记化合物影响较少，不影响抗原免疫学活性 D.标记物保存期较长 E.放射性废弃物处理较易 6.关于间接标记法标记 125I 的描述，正确的是 A.避免氧化剂和蛋白质直接接触，对蛋白质活性影响较小 B.125I 通过 SHPP 连接到蛋白质分子表面赖氨酸残基的氨基或蛋白质的活性中心，蛋白 质生物活性影响较少
C.在蛋白质分子内载体分子引起位阻效应，影响其生物活性，对分子量小的蛋白质影响 更明显 D.由于标记过程分两步进行，故碘标记蛋白质的比放射性和碘的利用率较直接标记法低 E.常用的氧化剂是氯胺T 7.放射性标记物的质量指标有 A.放射化学纯度 B.比放射性 C.免疫活性 D.特异性 E.放射性活度 8.影响放射性标记物化学纯度的因素有 A.被标记物不纯 B.标记抗原的比放射性过高 C.标记后分离纯化不完全 D.放射性核素的放射性活度过低 E.标记化合物贮存过程中碘脱落 9.理想的分离技术应具备 A.简便易行，适于大批量样品分析 B.分离完全，快速，非特异结合低 C.试剂来源容易，价格低廉，稳定性好，可长期保存 D.不受外界因素和样品中其他组分的干扰，对标准品和待测抗原分离效果相同 E.适合自动化分析的要求 10.放射免疫分析中，B/F的分离方法有 A.吸附法 B.双抗体法 C.固相分离法 D.PR试剂法 E.化学沉淀法 11.属于特异性B/F分离技术的是 A.吸附法
C.在蛋白质分子内载体分子引起位阻效应，影响其生物活性，对分子量小的蛋白质影响 更明显 D.由于标记过程分两步进行，故碘标记蛋白质的比放射性和碘的利用率较直接标记法低 E.常用的氧化剂是氯胺 T 7.放射性标记物的质量指标有 A.放射化学纯度 B.比放射性 C.免疫活性 D.特异性 E.放射性活度 8. 影响放射性标记物化学纯度的因素有 A.被标记物不纯 B.标记抗原的比放射性过高 C.标记后分离纯化不完全 D.放射性核素的放射性活度过低 E.标记化合物贮存过程中碘脱落 9.理想的分离技术应具备 A.简便易行，适于大批量样品分析 B.分离完全，快速，非特异结合低 C.试剂来源容易，价格低廉，稳定性好，可长期保存 D.不受外界因素和样品中其他组分的干扰，对标准品和待测抗原分离效果相同 E.适合自动化分析的要求 10.放射免疫分析中，B/F 的分离方法有 A.吸附法 B.双抗体法 C.固相分离法 D.PR 试剂法 E.化学沉淀法 11.属于特异性 B/F 分离技术的是 A.吸附法
B.双抗体法 C.固相分离法 D.PR试剂法 E.化学沉淀法 12.IRMA的优点是 A.敏感度高 B.特异性强 C.准确性好 D.结果稳定 E.用血量少 13.RIA标准曲线制作时，纵坐标的反应参数有 A.B/F B.B/T C.F/B D.B/Bo E.B 14.关于RIA标准曲线，为使标准曲线呈反比例双曲线，横坐标是测定物标准品浓度， 纵坐标是 A.B/F B.B/T C.F/B D.B/Bo E.B 15.免疫放射分析与放射免疫分析的不同是 A.IRMA的反应速度更快 B.采用固相分离法 C.反应属于非竞争性结合，使IMA灵敏度更高 D.可以测定大分子和小分子抗原 E.抗体用量大，但对K值要求不高 二、填空题 1.放射免疫技术类型主要包括 和 2.免疫放射性核素的放射量单位有 和 3.放射性核素选择原则是 和 4.放射性标记物制备时，常用的标记方法有 和 5.放射性标记物纯化常用的方法有 和 6.放射免疫技术试剂盒主要组成试剂有 和
B.双抗体法 C.固相分离法 D.PR 试剂法 E.化学沉淀法 12.IRMA 的优点是 A.敏感度高 B.特异性强 C.准确性好 D.结果稳定 E.用血量少 13.RIA 标准曲线制作时，纵坐标的反应参数有 A.B/F B. B/T C.F/B D. B/B0 E.B 14.关于 RIA 标准曲线，为使标准曲线呈反比例双曲线，横坐标是测定物标准品浓度， 纵坐标是 A.B/F B. B/T C.F/B D. B/B0 E.B 15. 免疫放射分析与放射免疫分析的不同是 A.IRMA 的反应速度更快 B.采用固相分离法 C.反应属于非竞争性结合，使 IRMA 灵敏度更高 D.可以测定大分子和小分子抗原 E.抗体用量大，但对 K 值要求不高 二、填空题 1.放射免疫技术类型主要包括__________和__________。 2.免疫放射性核素的放射量单位有__________、__________和__________。 3.放射性核素选择原则是__________、__________、__________和__________。 4.放射性标记物制备时，常用的标记方法有__________和__________。 5.放射性标记物纯化常用的方法有__________、__________、__________、__________ 和__________。 6.放射免疫技术试剂盒主要组成试剂有__________、__________和__________
7.RIA的基本操作可分为 和 四个步骤。 8.核射线探测仪器由 和 两部分组成。 9.根据加样顺序不同，RIA分为 和 两个类型。 10.IRMA主要有 和 两种类型。 11.RIA的优点有 和 缺点有 和 三、名词解释 L.放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA) 2.放射度量分析(immunoradiometric assay,IRMA) 3.放射性活度(radioactivity live degree) 4.放射性比活度(radioactivity specific activity degree). 5.放射性浓度(radioactivity concentration) 6.放射化学纯度(radiochemistry purity) 7.比放射性(ratio radioactivity) 8.免疫活性(immunity activity) 四、问答题 1.放射性标记物制备的常用方法有哪些？各有何优缺点？ 2.评价RIA中常用的B/R分离技术。 3.比较RIA和IRMA的特点并进行方法学评价。 第三部分参考答案与题解 一、选择题 （一)单项选择题(A型题) 1.B2.E 3.A4.D 5.D6.E7.A8.D 9.A10.D 11.D 12.B 13.B 14.C 15.D 16.D 17.D18.E19.C 20.D 21.C 22.A 23.B 24.B 25.A
7.RIA 的基本操作可分为__________、__________、__________和__________四个步骤。 8.核射线探测仪器由__________和__________两部分组成。 9.根据加样顺序不同，RIA 分为 和 两个类型。 10.IRMA 主要有__________和__________两种类型。 11.RIA 的优点有 __________ 、 __________ 和 __________ ，缺 点 有 __________ 和 __________。 三、名词解释 1.放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA ） 2.放射度量分析(immunoradiometric assay，IRMA) 3.放射性活度（radioactivity live degree） 4.放射性比活度(radioactivity specific activity degree) 5.放射性浓度(radioactivity concentration) 6.放射化学纯度 (radiochemistry purity) 7.比放射性(ratio radioactivity) 8.免疫活性(immunity activity) 四、问答题 1.放射性标记物制备的常用方法有哪些？各有何优缺点？ 2.评价 RIA 中常用的 B/F 分离技术。 3.比较 RIA 和 IRMA 的特点并进行方法学评价。 第三部分 参考答案与题解 一、选择题 （一）单项选择题（A 型题） 1.B 2.E 3.A 4.D 5.D 6.E 7.A 8.D 9.A 10.D 11.D 12.B 13.B 14.C 15.D 16.D 17.D 18.E 19.C 20.D 21.C 22.A 23.B 24.B 25.A
(二)多项选择题(X型题) 1.ABC 2.ABC 3.ABD 4.AB 5.ABCE 6.ABCD 7.ABC 8.ACE 9.ABCDE 10.ABCDE 11.BCD 12.ABD 13.ABCDE 14.ABDE 15.ABCDE 二、填空题 1.RIA IRMA 2.放射性活度放射性比活度放射性浓度 3.高比活度适宜半衰期对抗原或抗体没损害容易标记 4.直接法间接法 5.葡聚糖凝胶过滤法 薄层层析法纸层析法电泳法 高效液相层析法 6.放射性标记物抗体B/F分离剂 7.抗原抗体分离B/F分离放射性强度测定数据处理 8.射线探测器后续电子学单元 9.平衡法顺序饱和法 10.单位点法双位点法 11.敏感度高特异性强准确性好污染试剂有效期短 三、名词解释 1.RIA:即放射免疫分析，是以放射性核素标记抗原和待测抗原竞争结合一定量的特异 性抗体，待测抗原量与抗原抗体复合物放射性强度呈反比，用来测定待测抗原含量的一种竞 争免疫学方法。 2.IMA:即免疫放射分析，是以放射性核素标记的抗体与待侧抗原发生非竞争性结合反 应，待测抗原量与抗原抗体复合物放射性强度呈正比，从而测定待测抗原含量的一种非竞争 免疫学方法。 3.放射性活度：指单位时间内的核衰变数，即每秒衰变次数，用贝勒尔表示。 4.放射性比活度：指单位质量样品所含放射性活度，以Bq/g或Bq/mmol表示。 5.放射性浓度：指单位体积溶液中所含放射性活度，以Bq/ml表示
（二）多项选择题（X 型题） 1.ABC 2.ABC 3.ABD 4.AB 5.ABCE 6.ABCD 7.ABC 8.ACE 9.ABCDE 10.ABCDE 11.BCD 12.ABD 13.ABCDE 14.ABDE 15.ABCDE 二、填空题 1.RIA IRMA 2.放射性活度 放射性比活度 放射性浓度 3.高比活度 适宜半衰期 对抗原或抗体没损害 容易标记 4.直接法 间接法 5.葡聚糖凝胶过滤法 薄层层析法 纸层析法 电泳法 高效液相层析法 6.放射性标记物 抗体 B/F 分离剂 7.抗原抗体分离 B/F 分离 放射性强度测定 数据处理 8.射线探测器 后续电子学单元 9.平衡法 顺序饱和法 10.单位点法 双位点法 11.敏感度高 特异性强 准确性好 污染 试剂有效期短 三、名词解释 1.RIA：即放射免疫分析，是以放射性核素标记抗原和待测抗原竞争结合一定量的特异 性抗体，待测抗原量与抗原抗体复合物放射性强度呈反比，用来测定待测抗原含量的一种竞 争免疫学方法。 2.IRMA：即免疫放射分析，是以放射性核素标记的抗体与待测抗原发生非竞争性结合反 应，待测抗原量与抗原抗体复合物放射性强度呈正比，从而测定待测抗原含量的一种非竞争 免疫学方法。 3.放射性活度：指单位时间内的核衰变数，即每秒衰变次数，用贝勒尔表示。 4.放射性比活度：指单位质量样品所含放射性活度，以 Bq/g 或 Bq/mmol 表示。 5.放射性浓度：指单位体积溶液中所含放射性活度，以 Bq/ml 表示
6.放射化学纯度：指结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率，即碘化蛋白质的 放射强度占总放射强度的百分率。 7.比放射性又称放射性比度：指单位质量标记物的放射强度，单位为Bq/μg。标记抗 原的比放射性越高，所需标记抗原量越少，实验系统的敏感度越高。 8.免疫活性：指标记抗原结合于抗体的放射强度占总放射强度的百分率，用于检查标记 后免疫活性损失情况。 四、问答题 1.有直接标记法和间接标记法。(1)直接标记法：是将1直接结合在蛋白质侧链的酪 氨酸残基苯环上，形成单碘酪氨酸或双碘酪氨酸。常用的氧化剂是氯胺T。氯胺T是一种温 和的氧化剂，在水溶液中产生次氯酸，使25I氧化。优点：操作简便、迅速、高效且重复性 好。氧化剂还有应用乳过氧化物酶、N-溴代琥珀酰亚胺等。缺点：只能标记含酪氨酸的化合 物，有时可能会损害蛋白质的活性。 (2)间接标记法：亦称联结标记法，是先将放射性碘连接到一个小分子载体上，再将 这个小分子载体与蛋白质结合。具有代表性的方法是Bolton-lunter法，使用的载体分子是 N-琥珀酰亚胺3-(4-羟基苯)-丙酸(SPP)。标记方法分两步，先用氯胺T法使SHPP碘化， 再将碘化SHPP分子偶联到蛋白质分子上。优点：①避免氧化剂和蛋白质直接接触，对蛋白 质活性影响较小：②SHPP主要连接到蛋白质分子表面赖氨酸残基的氨基或蛋白质的活性中 心，不影响蛋白质活性。缺点：①在蛋白质分子内载体分子引起位阻效应，影响其生物活 性，对分子量小的蛋白质影响更明显：②标记过程分两步，故碘标记蛋白质的比放射性和 碘利用率较直接标记法低。 2.(1)吸附法：是用吸附剂吸附小分子游离的Ag(F),离心沉淀，大分子的结合物 Ag一Ab(B)留在上清中，以达到分离目的。如用葡聚糖包被活性炭颗粒，效果更好。优点：方 法简便、分离迅速、分离完全、价廉，尤其适用于小分子抗原和半抗原的分离：缺点：分离 效果和重复性常受吸附剂、相对表面积、被吸附抗原分子大小、电荷分布及其作用时间、温 度、离子强度、pH值等因素影响。 (2)化学沉淀法：RIA反应条件接近抗体的等电点，加入聚乙二醇等蛋白质沉淀剂可 破坏蛋白分子表面的水化层而使蛋白沉淀，从而分离B与F。优点：方法快速、简便、沉淀 完全：缺点：非特异沉淀游离标记物较多，受温度和pH影响较大
6.放射化学纯度：指结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率，即碘化蛋白质的 放射强度占总放射强度的百分率。 7.比放射性又称放射性比度：指单位质量标记物的放射强度，单位为 Bq/μg。标记抗 原的比放射性越高，所需标记抗原量越少，实验系统的敏感度越高。 8.免疫活性：指标记抗原结合于抗体的放射强度占总放射强度的百分率，用于检查标记 后免疫活性损失情况。 四、问答题 1.有直接标记法和间接标记法。（1）直接标记法：是将 125I 直接结合在蛋白质侧链的酪 氨酸残基苯环上，形成单碘酪氨酸或双碘酪氨酸。常用的氧化剂是氯胺 T。氯胺 T 是一种温 和的氧化剂，在水溶液中产生次氯酸，使 125I -氧化。优点：操作简便、迅速、高效且重复性 好。氧化剂还有应用乳过氧化物酶、N-溴代琥珀酰亚胺等。缺点：只能标记含酪氨酸的化合 物，有时可能会损害蛋白质的活性。 （2）间接标记法：亦称联结标记法，是先将放射性碘连接到一个小分子载体上，再将 这个小分子载体与蛋白质结合。具有代表性的方法是 Bolton-Hunter 法，使用的载体分子是 N-琥珀酰亚胺 3-(4-羟基苯)-丙酸(SHPP)。标记方法分两步，先用氯胺 T 法使 SHPP 碘化， 再将碘化 SHPP 分子偶联到蛋白质分子上。优点：①避免氧化剂和蛋白质直接接触，对蛋白 质活性影响较小； ②SHPP 主要连接到蛋白质分子表面赖氨酸残基的氨基或蛋白质的活性中 心，不影响蛋白质活性。缺点： ①在蛋白质分子内载体分子引起位阻效应，影响其生物活 性，对分子量小的蛋白质影响更明显； ②标记过程分两步，故碘标记蛋白质的比放射性和 碘利用率较直接标记法低。 2.（1）吸附法：是用吸附剂吸附小分子游离的※ Ag(F)，离心沉淀，大分子的结合物※ Ag-Ab(B)留在上清中，以达到分离目的。如用葡聚糖包被活性炭颗粒，效果更好。优点：方 法简便、分离迅速、分离完全、价廉，尤其适用于小分子抗原和半抗原的分离；缺点：分离 效果和重复性常受吸附剂、相对表面积、被吸附抗原分子大小、电荷分布及其作用时间、温 度、离子强度、pH 值等因素影响。 （2）化学沉淀法：RIA 反应条件接近抗体的等电点，加入聚乙二醇等蛋白质沉淀剂可 破坏蛋白分子表面的水化层而使蛋白沉淀，从而分离 B 与 F。优点：方法快速、简便、沉淀 完全；缺点：非特异沉淀游离标记物较多，受温度和 pH 影响较大