下篇临床免疫学及检验 第二十五章细胞因子及其受体检测 Chapter 25 Assays for Cytokine and Cytokine Receptor 第一部分教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：细胞因子的生物学和免疫学各种检测方法的原理及评价：熟悉：生物学和免疫 学方法检测细胞因子的技术要点及方法评价：了解：细胞因子的分子生物学检测方法、细胞 因子受体及可溶性受体的检测技术。 二、教学内容 1.生物学检测法：细胞增殖法，靶细胞杀伤或抑制法，细胞病变抑制法，趋化活性测 定法，生物学检测法的评价。 2.免疫学检测法：双抗体夹心ELISA,放射免疫分析，酶联免疫斑点试验，细胞内细 胞因子的检测，免疫学检测法的评价。 3。分子生物学检测：细胞因子的DNA检测，细胞因子mRNA表达的测定，分子生物学检 测法的评价。 4.细胞因子受体检测技术：膜结合受体的测定，可溶性受体的测定。 第二部分测试题 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1.能够用细胞增殖法检测的细胞因子是 A.CSF B.TNF C.IFN D.IL-6 E.IL-8 2.生物学检测法最重要的优点是 A.高特异性 B.高灵敏性 C.操作简单 D.活性单位测定 E.实 验成本低 3.免疫化学测定法最重要的优点
下篇 临床免疫学及检验 第二十五章 细胞因子及其受体检测 Chapter 25 Assays for Cytokine and Cytokine Receptor 第一部分 教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：细胞因子的生物学和免疫学各种检测方法的原理及评价；熟悉：生物学和免疫 学方法检测细胞因子的技术要点及方法评价；了解：细胞因子的分子生物学检测方法、细胞 因子受体及可溶性受体的检测技术。 二、教学内容 1．生物学检测法：细胞增殖法，靶细胞杀伤或抑制法，细胞病变抑制法，趋化活性测 定法，生物学检测法的评价。 2．免疫学检测法：双抗体夹心 ELISA，放射免疫分析，酶联免疫斑点试验，细胞内细 胞因子的检测，免疫学检测法的评价。 3。分子生物学检测：细胞因子的 DNA 检测，细胞因子 mRNA 表达的测定，分子生物学检 测法的评价。 4．细胞因子受体检测技术：膜结合受体的测定，可溶性受体的测定。 第二部分 测试题 一、选择题 （一）单项选择题（A 型题） 1．能够用细胞增殖法检测的细胞因子是 A．CSF B．TNF C．IFN D．IL-6 E．IL-8 2．生物学检测法最重要的优点是 A．高特异性 B．高灵敏性 C．操作简单 D．活性单位测定 E．实 验成本低 3．免疫化学测定法最重要的优点
A.高特异性 B.高灵敏性 C.含量测定 D.活性单位测定 E.实 验成本低 4.能够用细胞病变抑制法检测的细胞因子 A.CSF B.TNF C.IFN D.IL-6 E.IL-8 5.检测IL-2的依赖细胞株是： A.B9 B.7TD1 C.CTLL D.L929 E.Wish 6.检测TNP的靶细胞株 A.B9 B.7TDI C.CTLL D.L929 E.Wish 7.检测人干扰素的指示细胞株 A.B9 B.7TD1 C.CTLL D.L929 E.Wish 8.MTT比色法的测定波长为 A.570nm B.450nm C.490nm D.670nmm E.630nm 9.可测定单个细胞分泌细胞因子的方法 A.ELISA B.RIA C.凝集反应 D.ELISPOT E.免疫比浊 10.可同时测定两种细胞因子的方法是 A.ELISA B.RIA C.生物学检测法 D.ELISPOT E.PCR 11.细胞内细胞因子的检测主要用于测定的细胞是 A.Tc B.Th C.B细胞 D.NK细胞 E.巨噬细胞 (二)多项选择题(X型题) 1.生物学法检测细胞因子的特点具有 A.高特异性 B.高灵敏性 C.操作简单 D.活性单位测定 E.实验成本低 2.免疫化学法检测细胞因子的特点包括 A.高特异性 B.高灵敏性 C.操作简单 D.活性单位测定 E.含量测定 3.能够用细胞增殖法检测的细胞因子有 A.IL-2 B.TNF C.IFN D.IL-6 E.IL-8 4.用于检测细胞增殖程度的方法 A.直接计数 B.ELISPOT C.H-TdR掺入法
A．高特异性 B．高灵敏性 C．含量测定 D．活性单位测定 E．实 验成本低 4．能够用细胞病变抑制法检测的细胞因子 A．CSF B．TNF C．IFN D．IL-6 E．IL-8 5．检测 IL-2 的依赖细胞株是： A．B9 B．7TD1 C．CTLL D．L929 E．Wish 6．检测 TNF 的靶细胞株 A．B9 B．7TD1 C．CTLL D．L929 E．Wish 7．检测人干扰素的指示细胞株 A．B9 B．7TD1 C．CTLL D．L929 E．Wish 8．MTT 比色法的测定波长为 A．570nm B．450nm C．490nm D．670nmm E．630nm 9．可测定单个细胞分泌细胞因子的方法 A．ELISA B．RIA C．凝集反应 D．ELISPOT E．免疫比浊 10．可同时测定两种细胞因子的方法是 A．ELISA B．RIA C．生物学检测法 D．ELISPOT E．PCR 11．细胞内细胞因子的检测主要用于测定的细胞是 A．Tc B．Th C．B 细胞 D．NK 细胞 E．巨噬细胞 （二）多项选择题（X 型题） 1．生物学法检测细胞因子的特点具有 A．高特异性 B．高灵敏性 C．操作简单 D．活性单位测定 E．实验成本低 2．免疫化学法检测细胞因子的特点包括 A．高特异性 B．高灵敏性 C．操作简单 D．活性单位测定 E．含量测定 3．能够用细胞增殖法检测的细胞因子有 A．IL-2 B．TNF C．IFN D．IL-6 E．IL-8 4．用于检测细胞增殖程度的方法 A．直接计数 B．ELISPOT C．3 H-TdR 掺入法
D.MTT比色法 E.BAS-ELISA 5.能够用于检测细胞毒反应程度的方法有 A.结晶紫染色法 B.MTT比色法 C.BAS-ELISA D.ELISPOT E.Cr释放法 6.测定细胞因子含量常用的技术有 A.ELISA B.RIA C.凝集反应 D.ELISPOT E.免疫比浊 7.在MTT比色法中，用于溶解反应产物的溶剂有 A.DMSO B.PEG C.SDS D.NBT E.酸化异丙醇 8.检测膜型细胞因子受体的方法是 A.荧光抗体技术 B.ELISA C.斑点-ELISA D.流式细胞术 E.RIA 9.检测细胞因子的主要方法包括 A.用ELISA检测细胞因子及其受体 B.用依赖性细胞株检测相应细胞因子 C.用分子杂交技术检测细胞因子mRNA的表达 D.用PCR技术检测细胞因子 E.用生物活性检测法检测细胞因子活性水平 10.检测可溶性细胞因子受体的方法有： A.荧光抗体技术 B.ELISA C.斑点-ELISA D.流式细胞术 E.RIA 11.目前细胞内细胞因子的检测方法有 A.RIA B.免疫荧光染色技术 C.流式细胞术 D.ELISA E.细 胞病变抑制法 二、填空题 1.测定细胞因子的方法可分为 和 其中 检测细 胞因子的生物活性，其结果以 表示。 2.免疫学检测法检测细胞因子的 其结果以 表示。 3.细胞生物活性测定包括 和 等方法。 4.检测L-2的生物活性采用 法，检测干扰素的活性采用 法，检测肿 瘤坏死因子活性采用 法。 5.检测细胞增殖程度常采用的试验方法有 花 6.在MTT比色法中，代谢产物为紫色结晶颗粒，该产物经 或 溶解显 色，测定波长为 nm,参考波长为 nm
D．MTT 比色法 E．BAS-ELISA 5．能够用于检测细胞毒反应程度的方法有 A．结晶紫染色法 B．MTT 比色法 C．BAS-ELISA D．ELISPOT E． 51Cr 释放法 6．测定细胞因子含量常用的技术有 A．ELISA B．RIA C．凝集反应 D．ELISPOT E．免疫比浊 7．在 MTT 比色法中，用于溶解反应产物的溶剂有 A．DMSO B．PEG C．SDS D．NBT E．酸化异丙醇 8．检测膜型细胞因子受体的方法是 A．荧光抗体技术 B．ELISA C．斑点-ELISA D．流式细胞术 E．RIA 9．检测细胞因子的主要方法包括 A．用 ELISA 检测细胞因子及其受体 B．用依赖性细胞株检测相应细胞因子 C．用分子杂交技术检测细胞因子 mRNA 的表达 D．用 PCR 技术检测细胞因子 E．用生物活性检测法检测细胞因子活性水平 10．检测可溶性细胞因子受体的方法有： A．荧光抗体技术 B．ELISA C．斑点-ELISA D．流式细胞术 E．RIA 11．目前细胞内细胞因子的检测方法有 A．RIA B．免疫荧光染色技术 C．流式细胞术 D．ELISA E．细 胞病变抑制法 二、填空题 1．测定细胞因子的方法可分为________、________和________，其中________检测细 胞因子的生物活性，其结果以______表示。 2．免疫学检测法检测细胞因子的________，其结果以________表示。 3．细胞生物活性测定包括________、________、________和________等方法。 4．检测 IL-2 的生物活性采用________法，检测干扰素的活性采用________法，检测肿 瘤坏死因子活性采用________法。 5．检测细胞增殖程度常采用的试验方法有________和________。 6．在 MTT 比色法中，代谢产物为紫色结晶颗粒，该产物经________或________溶解显 色，测定波长为________nm，参考波长为________nm
7.用于测定L-2的细胞株为 ,用于测定TNF的细胞株为 或 8.用于测定人干扰素的细胞株为 攻击病毒为 9.测定L-8生物活性的方法是 10.用免疫化学法测定细胞因子含量常采用的方法有 和 三、名词解释 l.依赖细胞株(dependence cell strain) 2.细胞因子活性单位(cytokine activity unit) 四、问答题 1.细胞因子检测的临床意义及其注意的问题。 2.生物学测定法测定细胞因子原理及其优缺点。 3.生物学测定法测定细胞因子的技术类型及其应用。 4.免疫化学法测定细胞因子原理及其优缺点。 第三部分参考答案与题解 一、选择题 （一)单项选择题(A型题) 1.D2.D3.A4.C5.C6.D7.E8.A9.D10.D 11.B (二)多项选择题(X型题) 1.BDE 2.ACE 3.AD 4.ACD 5.ABE 6.ABD 7.AE 8.AD 9.ABCDE 10.BCE 11.BC 二、填空题 1.生物学测定法、免疫化学测定法、分子生物学测定法、生物学测定法、活性单位/ 毫升(U/ml)。 2.蛋白含量、皮克/毫升(pg/ml)或纳克/毫升(ng/ml)。 3.细胞增殖法、靶细胞杀伤法、细胞病变抑制法、趋化活性测定法。 4.细胞增殖法、细胞病变抑制法、靶细胞杀伤法
7．用于测定 IL-2 的细胞株为_______ ，用于测定 TNF 的细胞株为_______ 或_____ _。 8．用于测定人干扰素的细胞株为_______ ，攻击病毒为_____ _。 9．测定 IL-8 生物活性的方法是________。 10．用免疫化学法测定细胞因子含量常采用的方法有________、________和________。 三、名词解释 1．依赖细胞株（dependence cell strain） 2．细胞因子活性单位(cytokine activity unit) 四、问答题 1．细胞因子检测的临床意义及其注意的问题。 2．生物学测定法测定细胞因子原理及其优缺点。 3．生物学测定法测定细胞因子的技术类型及其应用。 4．免疫化学法测定细胞因子原理及其优缺点。 第三部分 参考答案与题解 一、选择题 （一）单项选择题（A 型题） 1．D 2．D 3．A 4．C 5．C 6．D 7．E 8．A 9．D 10．D 11．B （二）多项选择题（X 型题） 1．BDE 2．ACE 3．AD 4．ACD 5．ABE 6．ABD 7．AE 8．AD 9．ABCDE 10．BCE 11．BC 二、填空题 1．生物学测定法、免疫化学测定法、分子生物学测定法、生物学测定法、活性单位/ 毫升（U/ml）。 2．蛋白含量、皮克/毫升（pg/ml）或纳克/毫升（ng/ml）。 3．细胞增殖法、靶细胞杀伤法、细胞病变抑制法、趋化活性测定法。 4．细胞增殖法、细胞病变抑制法、靶细胞杀伤法
5.H-TdR掺入法、MTT比色法。 6.酸化异丙醇、二甲基亚砜、570nm、630nm。 7.CTLL、L929、WEHI164.13 8.Wish、VsV。 9.Boyden小室法。 10.双抗体夹心ELISA、放射免疫分析、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)。 三、名词解释 1.依赖细胞株：是指人们为检测某一种细胞因子而筛选的，该细胞株的分裂增殖只依 赖于某一种细胞因子的存在，并在一定浓度范围内与细胞增殖程度呈正相关。若培养基中缺 乏这种细胞因子，依赖株则不能存活。 2.细胞因子活性单位：细胞因子使相应细胞达到最大程度增殖的50%时所需细胞因子 的含量称为细胞因子的一个活性单位。 四、问答题 1.细胞因子是机体内十分重要的免疫分子。在基础免疫学研究中，检测细胞因子水平 用于探讨细胞因子水平与免疫细胞表型、分化、增殖以及功能的相互关系及细胞因子与某些 生理病理过程的相互关系。在临床医学的研究中，当发生某些疾病时，体内细胞因子及受体 表达可发生异常，这些异常与机体免疫功能异常或发生病理损伤有关。因此，检测患者细胞 因子及其受体表达水平有助于对临床某些疾病的诊断、治疗和预后的判断。另一方面，细胞 因子基因工程产品的问世，促进了重组细胞因子的临床应用，这也要求对患者体内相应细胞 因子水平进行判断。总之，检测细胞因子及其受体具有重要的应用价值。 由于细胞因子多以自分泌和旁分泌的方式发挥作用，很少进入到血液循环。因此对于蛋 白水平的检测来说，检测局部体液中细胞因子较测定血清或血浆中细胞因子更具有实际意 义。另一方面，由于细胞因子网络的特性，细胞因子之间是相互关联的，故单独检测一种细 胞因子及其受体并不能提供更多信息，常需要多种细胞因子的联合检测。 2.细胞因子生物学检测法是根据某些细胞因子特定的生物学功能设计的，因此该方法 是测定细胞因子生物活性水平的方法。其原理是应用一定的指示系统（如细胞）与己知活性 的细胞因子标准品或待测标本相互作用，最终以指示系统的变化（如细胞增殖、死亡或分泌
5．3 H-TdR 掺入法、MTT 比色法。 6．酸化异丙醇、二甲基亚砜、570 nm、630 nm。 7．CTLL、L929、WEHI164.13 8．Wish、VSV。 9．Boyden 小室法。 10．双抗体夹心 ELISA、放射免疫分析、酶联免疫斑点试验（ELISPOT）。 三、名词解释 1．依赖细胞株：是指人们为检测某一种细胞因子而筛选的，该细胞株的分裂增殖只依 赖于某一种细胞因子的存在，并在一定浓度范围内与细胞增殖程度呈正相关。若培养基中缺 乏这种细胞因子，依赖株则不能存活。 2．细胞因子活性单位：细胞因子使相应细胞达到最大程度增殖的 50％时所需细胞因子 的含量称为细胞因子的一个活性单位。 四、问答题 1．细胞因子是机体内十分重要的免疫分子。在基础免疫学研究中，检测细胞因子水平 用于探讨细胞因子水平与免疫细胞表型、分化、增殖以及功能的相互关系及细胞因子与某些 生理病理过程的相互关系。在临床医学的研究中，当发生某些疾病时，体内细胞因子及受体 表达可发生异常，这些异常与机体免疫功能异常或发生病理损伤有关。因此，检测患者细胞 因子及其受体表达水平有助于对临床某些疾病的诊断、治疗和预后的判断。另一方面，细胞 因子基因工程产品的问世，促进了重组细胞因子的临床应用，这也要求对患者体内相应细胞 因子水平进行判断。总之，检测细胞因子及其受体具有重要的应用价值。 由于细胞因子多以自分泌和旁分泌的方式发挥作用，很少进入到血液循环。因此对于蛋 白水平的检测来说，检测局部体液中细胞因子较测定血清或血浆中细胞因子更具有实际意 义。另一方面，由于细胞因子网络的特性，细胞因子之间是相互关联的，故单独检测一种细 胞因子及其受体并不能提供更多信息，常需要多种细胞因子的联合检测。 2．细胞因子生物学检测法是根据某些细胞因子特定的生物学功能设计的，因此该方法 是测定细胞因子生物活性水平的方法。其原理是应用一定的指示系统（如细胞）与已知活性 的细胞因子标准品或待测标本相互作用，最终以指示系统的变化（如细胞增殖、死亡或分泌
蛋白等)来显示细胞因子的功能，将待检标本与标准品进行比较最终得知待检标本的细胞因 子水平。 生物学检测方法测定的是细胞因子的生物学活性，能真实反映细胞因子在体内发生作用 的情况，并且具有较高的灵敏度，不需商品化试剂盒，成本低适合基础研究工作。但是，由 于不同细胞因子间的生物学作用具有重叠性，导致该方法的特异性不强。应用依赖性较强的 细胞株或使用中和性单克隆抗体封闭干扰物质的作用，可提高实验方法的特异性。此外，生 物学方法操作繁琐，需进行细胞培养，实验周期长，影响因素较多，重复性差。 3.根据指示系统的表现不同，生物学检测的方法可分为细胞增殖法、靶细胞杀伤或抑 制法、细胞病变抑制法、集落形成测定法、趋化作用测定法和诱导产物测定法等。细胞增殖 法是最常用的细胞因子生物学活性测定方法，可用于L-2、L-6等多种白细胞介素的测定。 靶细胞杀伤法用于肿瘤坏死因子的测定，细胞病变抑制法用于干扰素测定，集落形成测定法 用于集落刺激因子测定，趋化作用测定法用于趋化因子测定。 4.免疫学检测法是建立在抗原抗体反应基础上的免疫化学分析技术。细胞因子的化学 本质是蛋白质或多肽，因此很容易制备相应细胞因子的抗体（多克隆抗体和单克隆抗体）， 用已知的抗体便可以检测未知的细胞因子（抗原）。但由于细胞因子在体液中的含量很低， 必须采用非常灵敏的检测方法。常见的方法有酶联免疫吸附实验(ELISA)和放射免疫测定 (RIA)。免疫学检测法可用于检测体液标本中的细胞因子，也可以检测细胞内的细胞因子。 为了进一步提高检测的灵敏度，实际工作中常用生物素-亲和素系统，使抗原抗体反应的信 号得以放大。 (李会强)
蛋白等）来显示细胞因子的功能，将待检标本与标准品进行比较最终得知待检标本的细胞因 子水平。 生物学检测方法测定的是细胞因子的生物学活性，能真实反映细胞因子在体内发生作用 的情况，并且具有较高的灵敏度，不需商品化试剂盒，成本低适合基础研究工作。但是，由 于不同细胞因子间的生物学作用具有重叠性，导致该方法的特异性不强。应用依赖性较强的 细胞株或使用中和性单克隆抗体封闭干扰物质的作用，可提高实验方法的特异性。此外，生 物学方法操作繁琐，需进行细胞培养，实验周期长，影响因素较多，重复性差。 3．根据指示系统的表现不同，生物学检测的方法可分为细胞增殖法、靶细胞杀伤或抑 制法、细胞病变抑制法、集落形成测定法、趋化作用测定法和诱导产物测定法等。细胞增殖 法是最常用的细胞因子生物学活性测定方法，可用于 IL-2、IL-6 等多种白细胞介素的测定。 靶细胞杀伤法用于肿瘤坏死因子的测定，细胞病变抑制法用于干扰素测定，集落形成测定法 用于集落刺激因子测定，趋化作用测定法用于趋化因子测定。 4．免疫学检测法是建立在抗原抗体反应基础上的免疫化学分析技术。细胞因子的化学 本质是蛋白质或多肽，因此很容易制备相应细胞因子的抗体（多克隆抗体和单克隆抗体）， 用已知的抗体便可以检测未知的细胞因子（抗原）。但由于细胞因子在体液中的含量很低， 必须采用非常灵敏的检测方法。常见的方法有酶联免疫吸附实验（ELISA）和放射免疫测定 （RIA）。免疫学检测法可用于检测体液标本中的细胞因子，也可以检测细胞内的细胞因子。 为了进一步提高检测的灵敏度，实际工作中常用生物素-亲和素系统，使抗原抗体反应的信 号得以放大。 （李会强）