第二十章酶免疫技术 Chapter 20 Enzyme Immunoassay 第一部分教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：酶联免疫吸附试验、免疫印迹技术、BAS-ELISA的方法类型、原理、技术要点 及临床应用：熟悉：其它酶免疫技术的类型及应用：了解：酶免疫技术中常用的酶及其底物 的种类、特性，酶标记方法及其评价，标记物的纯化、鉴定及保存。 二、教学内容 1。概述：原理，酶及底物，酶标记抗体或抗原的方法，酶标记物的纯化及鉴定，酶标 分析仪，酶免疫技术的类型。 2。酶免疫组织化学技术：酶标记抗体免疫组化技术，非标记抗体酶免疫组化技术，酶 标记免疫电镜技术。 3。酶联免疫吸附试验：基本原理，技术类型，技术要点，方法评价。 4.膜载体的酶免疫技术：斑点-酶联免疫吸附试验，斑点-酶免疫渗滤试验，免疫层析 试验，免疫印迹法。 5.生物素-亲和素系统酶联免疫吸附试验：BAS,BAS-ELISA 6.酶免疫测定的应用。 第二部分测试题 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1.HRP的活性基团是 A.糖蛋白B.亚铁血红素C.白蛋白D.球蛋白E.色氨酸 2.表示RP纯度(RZ)的是 A.入403nm/x275nmB.x420nm/λ275nm C.入403nm/λ290nmD.入275nm/入403nm E.入290nm/入275nm 3.RP(用于标记)的RZ值应大于 A.3.0B.3.1C.3.2D.3.3E.3.4
第二十章 酶免疫技术 Chapter 20 Enzyme Immunoassay 第一部分 教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：酶联免疫吸附试验、免疫印迹技术、BAS-ELISA 的方法类型、原理、技术要点 及临床应用；熟悉：其它酶免疫技术的类型及应用；了解：酶免疫技术中常用的酶及其底物 的种类、特性，酶标记方法及其评价，标记物的纯化、鉴定及保存。 二、教学内容 1。概述：原理，酶及底物，酶标记抗体或抗原的方法，酶标记物的纯化及鉴定，酶标 分析仪，酶免疫技术的类型。 2。酶免疫组织化学技术：酶标记抗体免疫组化技术，非标记抗体酶免疫组化技术，酶 标记免疫电镜技术。 3。酶联免疫吸附试验：基本原理，技术类型，技术要点，方法评价。 4. 膜载体的酶免疫技术：斑点-酶联免疫吸附试验，斑点-酶免疫渗滤试验，免疫层析 试验，免疫印迹法。 5. 生物素-亲和素系统酶联免疫吸附试验：BAS，BAS-ELISA 6. 酶免疫测定的应用。 第二部分 测试题 一、选择题 (一)单项选择题（A 型题） 1.HRP 的活性基团是 A.糖蛋白 B.亚铁血红素 C.白蛋白 D.球蛋白 E.色氨酸 2.表示 HRP 纯度（RZ）的是 A.λ403nm/λ275nm B.λ420nm/λ275nm C.λ403nm/λ290nm D.λ275nm/λ403nm E.λ290nm/λ275nm 3. HRP（用于标记）的 RZ 值应大于 A.3.0 B.3.1 C.3.2 D.3.3 E.3.4
4.B-Gal的常用底物是 A.OPD B.TMB C.5-ASA D.ABTS E.4MUG 5.下列酶-底物-颜色反应组合中，正确的是 A.HRP一OPD一蓝色 B.HRP一TMB一红色 C.AP一P-NPP-黄色 D.HRP一P-NPP一蓝色 E.AP一TMB一蓝色 6.EMIT测定可以测定 A.大分子抗原 B.小分子抗原或半抗原C.补体D.PcAb E.McAb 7.应用最广泛的均相EIA是 A.CEDIA B.SPEIA C.EMIT D.ELISA E.IFA 8.关于酶免疫技术的特点，正确的是 A.酶标记物催化抗原抗体反应，使其结果放大，提高了检测的灵敏度 B.酶活性易受理化因素的影响，酶标记物稳定性差 C.底物经酶催化后的成色，使酶标记免疫反应结果得以放大 D.选择高质量的标记用酶是建立酶免疫技术最重要的前提 E.酶免疫技术检测方法较为繁琐 9.关于固相化抗体的制备，正确的是 A.抗体包被固相载体后，再用小牛血清白蛋白包被一次为了稳固载体对抗体的吸附 B.化学偶联法包被抗体，可有效提高包被抗体的结合量、均一性和牢固程度 C.为提高抗体的包被量，包被液的浓度应较高 D.吸附法包被抗体时，选用偏酸性的缓冲液，可提高包被抗体的稳定性 E.包被抗体时，温度越高越有利于提高包被抗体的稳定性 10.关于载体的选择，正确的是 A.醋酸纤维膜吸附蛋白的能力强于塑料板，但对微量样品的吸附不完全 B.高分子微颗粒载体含有的基团易与抗体蛋白形成化学偶联，且结合容量大 C.塑料制品吸附蛋白分子的稳定性和均一性好 D.固相微颗粒因体积小，不易与磁性材料组合使用 E.膜载体吸附抗体蛋白一般是采用化学偶联法 11.酶免疫技术用于样品中抗原或抗体的定量测定是基于 A.酶标记物参与免疫反应 B.固相化技术的应用，使结合和游离的酶标记物能有效地分离
4.β-Gal 的常用底物是 A.OPD B.TMB C.5-ASA D.ABTS E.4MUG 5.下列酶-底物-颜色反应组合中，正确的是 A.HRP—OPD—蓝色 B.HRP—TMB—红色 C.AP—P-NPP—黄色 D.HRP—P-NPP—蓝色 E.AP—TMB—蓝色 6.EMIT 测定可以测定 A.大分子抗原 B.小分子抗原或半抗原 C.补体 D.PcAb E.McAb 7.应用最广泛的均相 EIA 是 A.CEDIA B.SPEIA C.EMIT D.ELISA E.IFA 8.关于酶免疫技术的特点，正确的是 A.酶标记物催化抗原抗体反应，使其结果放大，提高了检测的灵敏度 B.酶活性易受理化因素的影响，酶标记物稳定性差 C.底物经酶催化后的成色，使酶标记免疫反应结果得以放大 D.选择高质量的标记用酶是建立酶免疫技术最重要的前提 E.酶免疫技术检测方法较为繁琐 9.关于固相化抗体的制备，正确的是 A.抗体包被固相载体后，再用小牛血清白蛋白包被一次为了稳固载体对抗体的吸附 B.化学偶联法包被抗体，可有效提高包被抗体的结合量、均一性和牢固程度 C.为提高抗体的包被量，包被液的浓度应较高 D.吸附法包被抗体时，选用偏酸性的缓冲液，可提高包被抗体的稳定性 E.包被抗体时，温度越高越有利于提高包被抗体的稳定性 10.关于载体的选择，正确的是 A.醋酸纤维膜吸附蛋白的能力强于塑料板，但对微量样品的吸附不完全 B.高分子微颗粒载体含有的基团易与抗体蛋白形成化学偶联，且结合容量大 C.塑料制品吸附蛋白分子的稳定性和均一性好 D.固相微颗粒因体积小，不易与磁性材料组合使用 E.膜载体吸附抗体蛋白一般是采用化学偶联法 11.酶免疫技术用于样品中抗原或抗体的定量测定是基于 A.酶标记物参与免疫反应 B.固相化技术的应用，使结合和游离的酶标记物能有效地分离
C.含酶标记物的免疫复合物中酶可催化底物成色，其颜色的深浅与待测物含量相关 D.酶催化免疫反应，复合物中酶的活性与样品测值呈正比 E.酶催化免疫反应，复合物中酶的活性与样品测值呈反比 12.关于HRP,描述正确的是 A.RP由具酶活性的蛋白主酶和亚铁血红素辅基构成 B.测定RP的RZ值，可判断酶活性的高低 C.RP对酶催化反应中的受氢体专一性要求不高 D.酶变性后，其RZ值不变 E.邻苯二氨底物液被HRP催化显蓝色，其最大吸收波长为492nm 13.均相酶免疫测定的基本特征是 A.反应平衡后，抗原抗体复合物中酶活性会发生变化 B.酶标抗原与抗体在固相介质表面形成复合物后，作用于底物成色 C.不用分离B、F即可确定待测物质的含量，表明其反应不易受内源性酶的干扰 D.反应属于非竞争结合，测定的灵敏度较高 E.测定方法较为复杂，且不易用于自动化检测 14.属于均相酶免疫测定的方法是 A.酶联免疫化学发光测定 B.dot-ELISA C.双抗体夹心法ELISA D.酶增强免疫测定技术 E.竞争法ELISA 15.反应结束时，阴性对照管的呈色最强，此情况常见于 A.双抗体夹心法ELISA B.竞争法ELISA C.间接法ELISA D.捕获法ELISA E.双抗原夹心法ELISA 16.免疫渗滤试验衍生于 A.RIAB.dot-ELISA C.免疫层析试验D.免疫印迹试验E.免疫扩散试验 17.双位点ELISA中，造成抗原测定值低于实际含量的常见原因是 A.固相抗体过多B.反应时间不够C.标记抗体过多 D.待测物过浓 E.洗涤不彻底 18.间接法ELISA中，形成的免疫复合物是 A.固相抗原-抗体-酶标二抗 B.固相抗体-抗原-酶标抗体
C.含酶标记物的免疫复合物中酶可催化底物成色，其颜色的深浅与待测物含量相关 D.酶催化免疫反应，复合物中酶的活性与样品测值呈正比 E.酶催化免疫反应，复合物中酶的活性与样品测值呈反比 12.关于 HRP，描述正确的是 A.HRP 由具酶活性的蛋白主酶和亚铁血红素辅基构成 B.测定 HRP 的 RZ 值，可判断酶活性的高低 C.HRP 对酶催化反应中的受氢体专一性要求不高 D.酶变性后，其 RZ 值不变 E.邻苯二氨底物液被 HRP 催化显蓝色，其最大吸收波长为 492nm 13.均相酶免疫测定的基本特征是 A.反应平衡后，抗原抗体复合物中酶活性会发生变化 B.酶标抗原与抗体在固相介质表面形成复合物后，作用于底物成色 C.不用分离 B、F 即可确定待测物质的含量，表明其反应不易受内源性酶的干扰 D.反应属于非竞争结合，测定的灵敏度较高 E.测定方法较为复杂，且不易用于自动化检测 14.属于均相酶免疫测定的方法是 A.酶联免疫化学发光测定 B.dot-ELISA C.双抗体夹心法 ELISA D.酶增强免疫测定技术 E.竞争法 ELISA 15.反应结束时，阴性对照管的呈色最强，此情况常见于 A.双抗体夹心法 ELISA B.竞争法 ELISA C.间接法 ELISA D.捕获法 ELISA E.双抗原夹心法 ELISA 16.免疫渗滤试验衍生于 A.RIA B. dot-ELISA C.免疫层析试验 D.免疫印迹试验 E.免疫扩散试验 17.双位点 ELISA 中，造成抗原测定值低于实际含量的常见原因是 A.固相抗体过多 B.反应时间不够 C.标记抗体过多 D.待测物过浓 E.洗涤不彻底 18.间接法 ELISA 中，形成的免疫复合物是 A.固相抗原-抗体-酶标二抗 B. 固相抗体-抗原-酶标抗体
C.固相二抗-IgM-抗原-酶标抗体 D.固相抗体-酶标抗原 E.固相抗原-抗体-酶标抗原 19.下述酶免疫组织化学技术中，敏感性最高的方法是 A.直接染色法 B.间接染色法 C.酶桥法 D.过氧化物酶-抗过氧化物酶法 E.亲合素-生物素-过氧化物酶技术 20.酶桥染色法中的桥抗体是指 A.免疫反应系统中的特异性抗体 B.显色系统中的抗酶抗体 C.第二抗体（抗抗体） D.第一抗体 E.第三抗体（抗酶抗体） 21.酶免疫组织化学技术中，常用的酶是 A.胰蛋白酶，葡萄糖氧化酶 B.辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶 C.胃蛋白酶，蛋白酶K D.碱性磷酸酶，胃蛋白酶 E.葡萄糖氧化酶，蛋白酶K (二)多项选择题(X型题) 1.用于标记的酶的特点包括 A.酶活性高 B.酶活性不受样品中其他成分的影响 C.理化性质稳定 D.价廉易得 E.易失活 2.与RZ值有关的是 A.酶含量B.酶活性 C.酶的组成 D.酶的理化性质 E.酶的底物 3.HRP的底物有 A.OPD B.TMB C.5-ASA D.ABTS E.4MUG 4.ELISA试剂的要求包括 A.选择酶制剂时，酶的RZ值比酶活力指标更重要 B.选择抗体要求具有高的比活性 C.底物应颜色变化明显，反应终止后颜色稳定 D.载体要求吸附性好，空白值低，透明度好 E.抗原要求纯度高，抗原性完整
C.固相二抗-IgM-抗原-酶标抗体 D. 固相抗体-酶标抗原 E.固相抗原-抗体-酶标抗原 19.下述酶免疫组织化学技术中，敏感性最高的方法是 A.直接染色法 B.间接染色法 C.酶桥法 D.过氧化物酶-抗过氧化物酶法 E.亲合素-生物素-过氧化物酶技术 20.酶桥染色法中的桥抗体是指 A.免疫反应系统中的特异性抗体 B.显色系统中的抗酶抗体 C.第二抗体（抗抗体） D.第一抗体 E.第三抗体（抗酶抗体） 21.酶免疫组织化学技术中，常用的酶是 A.胰蛋白酶，葡萄糖氧化酶 B.辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶 C.胃蛋白酶，蛋白酶 K D.碱性磷酸酶，胃蛋白酶 E.葡萄糖氧化酶，蛋白酶 K （二）多项选择题（X 型题） 1.用于标记的酶的特点包括 A.酶活性高 B.酶活性不受样品中其他成分的影响 C.理化性质稳定 D.价廉易得 E.易失活 2.与 RZ 值有关的是 A.酶含量 B.酶活性 C.酶的组成 D.酶的理化性质 E.酶的底物 3.HRP 的底物有 A.OPD B.TMB C.5-ASA D.ABTS E.4MUG 4.ELISA 试剂的要求包括 A.选择酶制剂时，酶的 RZ 值比酶活力指标更重要 B.选择抗体要求具有高的比活性 C.底物应颜色变化明显，反应终止后颜色稳定 D.载体要求吸附性好，空白值低，透明度好 E.抗原要求纯度高，抗原性完整
5.符合RZ特点的有 A.常以RZ值表示HRP制品的纯度 B.RZ值越高，说明HRP越纯 C.RZ=0D(403nm)/0D(275nm） D.RZ值应大于3 E.RZ值与酶活性无关 6.关于ELISA试验中的封闭，正确的论述是 A.用1%-5%牛血清白蛋白再包被 B.有助于酶与底物的结合 C.防止酶标抗体吸附载体 D.可消除非特异显色而导致的本底偏高 E.用5-20%小牛血清再包被 7.ELISA试验中，抗原抗体的要求有 A.制备酶标结合物用的抗体要求有高的比活性 B.测定抗体时需用相当纯的抗原 C.用硫酸铵盐析的抗体可满足交联酶的需要 D.酶消化IgG的Fab片段进行酶标记效果更好 E.制备酶标记物的抗原要求纯度高，抗原性完整 8.ELISA试验中，固相载体的要求有 A.与抗原或抗体有较高的结合容量且结合稳定 B.抗原或抗体与其结合后，应保持活性 C.固相化方法应简便易行，快速经济 D.能结合亲和素或链酶亲和素等大分子蛋白质 E.抗原或抗体与其结合后丧失免疫活性 9.均相酶免疫测定的特点是 A.属于竞争结合分析方法 B.AgE与Ab结合形成AbAgE后，其中的酶活性将减弱或增强 C.不需将AbAgE与AgE分离，可直接测定酶活性的变化推算出待测抗原量 D.主要用于小分子抗原和半抗原的测定 E.灵敏度大于异相酶免疫测定
5.符合 RZ 特点的有 A.常以 RZ 值表示 HRP 制品的纯度 B.RZ 值越高，说明 HRP 越纯 C.RZ=OD(403nm)/OD(275nm) D.RZ 值应大于 3 E.RZ 值与酶活性无关 6.关于 ELISA 试验中的封闭，正确的论述是 A.用 1%-5%牛血清白蛋白再包被 B.有助于酶与底物的结合 C.防止酶标抗体吸附载体 D.可消除非特异显色而导致的本底偏高 E.用 5-20%小牛血清再包被 7. ELISA 试验中，抗原抗体的要求有 A.制备酶标结合物用的抗体要求有高的比活性 B.测定抗体时需用相当纯的抗原 C.用硫酸铵盐析的抗体可满足交联酶的需要 D.酶消化 IgG 的 Fab 片段进行酶标记效果更好 E.制备酶标记物的抗原要求纯度高，抗原性完整 8. ELISA 试验中，固相载体的要求有 A.与抗原或抗体有较高的结合容量且结合稳定 B.抗原或抗体与其结合后，应保持活性 C.固相化方法应简便易行，快速经济 D.能结合亲和素或链酶亲和素等大分子蛋白质 E.抗原或抗体与其结合后丧失免疫活性 9.均相酶免疫测定的特点是 A.属于竞争结合分析方法 B.AgE 与 Ab 结合形成 AbAgE 后，其中的酶活性将减弱或增强 C.不需将 AbAgE 与 AgE 分离，可直接测定酶活性的变化推算出待测抗原量 D.主要用于小分子抗原和半抗原的测定 E.灵敏度大于异相酶免疫测定
10.关于双抗体夹心法ELISA,正确的表述是 A.使用分别针对抗原不同决定基的两种单克隆抗体作酶标记 B.一种单克隆抗体作为固相抗体，另一种作为酶标抗体 C.可使标本和酶标抗体同时加入 D.采用高亲和力的单克隆抗体可提高测定的敏感性和特异性 E.用于检测二价或二价以上的抗原 11.下列叙述中，正确的是 A.Western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和ELISA的高特异性 B.亲和素-生物素ELISA法可大大提高敏感度 C.斑点-ELISA法的特异性高于ELISA法 D.酶免疫电泳法可起到微量抗原定位作用及提高敏感性 E.IRA的灵敏度较RIA高，所有待测物参与反应 12.选择ELISA的标记酶，必须具备的特性是 A.具有可与抗原、抗体结合的基团 B.标记抗原后，酶活性保持稳定 C.当酶标记抗原与抗体结合后，酶活性可出现激活或抑制 D.酶催化底物反应后生成的信号易于测定、重复性好 E.标记抗原后，不影响抗原的免疫活性 13.酶免疫分析技术中常用于标记的酶有 A.辣根过氧化物酶 B.碱性磷酸酶 C.B-半乳糖苷酶 D.过氧化氢酶 E.酸性磷酸酶 14.酶免疫技术的优点有 A.灵敏度高、特异性强、准确性好 B.实验简便，易操作 C.易于自动化分析 D.易与其他标记免疫技术偶联 E.标记试剂的有效期较长 15.下列关于酶免疫组织化学技术的描述，正确的是 A.敏感性比免疫荧光技术高 B.可用普通显微镜观察结果 C.不能用电子显微镜观察结果 D.便于对组织细胞微结构作分析 E.染色标本不能长期保存
10.关于双抗体夹心法 ELISA，正确的表述是 A.使用分别针对抗原不同决定基的两种单克隆抗体作酶标记 B.一种单克隆抗体作为固相抗体，另一种作为酶标抗体 C.可使标本和酶标抗体同时加入 D.采用高亲和力的单克隆抗体可提高测定的敏感性和特异性 E.用于检测二价或二价以上的抗原 11.下列叙述中，正确的是 A.Western blot 具有 SDS-PAGE 的高分辨力和 ELISA 的高特异性 B.亲和素-生物素 ELISA 法可大大提高敏感度 C.斑点-ELISA 法的特异性高于 ELISA 法 D.酶免疫电泳法可起到微量抗原定位作用及提高敏感性 E.IRMA 的灵敏度较 RIA 高，所有待测物参与反应 12.选择 ELISA 的标记酶，必须具备的特性是 A.具有可与抗原、抗体结合的基团 B.标记抗原后，酶活性保持稳定 C.当酶标记抗原与抗体结合后，酶活性可出现激活或抑制 D.酶催化底物反应后生成的信号易于测定、重复性好 E.标记抗原后，不影响抗原的免疫活性 13.酶免疫分析技术中常用于标记的酶有 A.辣根过氧化物酶 B.碱性磷酸酶 C.β-半乳糖苷酶 D.过氧化氢酶 E.酸性磷酸酶 14.酶免疫技术的优点有 A.灵敏度高、特异性强、准确性好 B.实验简便，易操作 C.易于自动化分析 D.易与其他标记免疫技术偶联 E.标记试剂的有效期较长 15.下列关于酶免疫组织化学技术的描述，正确的是 A.敏感性比免疫荧光技术高 B.可用普通显微镜观察结果 C.不能用电子显微镜观察结果 D.便于对组织细胞微结构作分析 E.染色标本不能长期保存
16.ELISA临床上主要用于 A.病原体及抗体测定 B.蛋白质测定 C.非肽类激素测定 D.药品测定 E.毒品测定 二、填空题 1.膜载体酶免疫测定技术的类型主要有 和 2.免疫印迹法是由 和 三项技术结合而成。 3.酶免疫组织化学技术常用的酶有 和 4.ELISA方法类型主要有」 和 5.ELISA中三种必要试剂是 和 6.制备酶结合物常用的方法有」 和 7.在稀释液和洗涤液中加入 ,可以去除非特异性吸附。 8.均相酶免疫测定技术的类型主要有 和 9.非标记抗体酶免疫组织化学技术的类型主要有 和 三、名词解释 l.酶免疫技术(enzyme immunoassay,EIA) 2.封闭(blocking) 3.异相酶免疫测定(heterogenous enzyme immunoassay,异相EIA) 4.包被(coating) 5.均相酶免疫测定(homogenous enzyme immunoassay) 四、问答题 1.用于标记的酶应符合哪些要求？ 2.简述酶免疫技术的分类。 3.简述均相酶免疫测定的原理。 4.简述双抗体夹心法的原理。 5.斑点-ELISA有哪些优点？
16．ELISA 临床上主要用于 A.病原体及抗体测定 B.蛋白质测定 C.非肽类激素测定 D.药品测定 E.毒品测定 二、填空题 1. 膜载体酶免疫测定技术的类型主要有 __________ 、 __________ 、 和 。 2.免疫印迹法是由_____ _ __，__ ___ 和__________三项技术结合而成。 3.酶免疫组织化学技术常用的酶有 、 和 。 4.ELISA 方法类型主要有 、 、 和 。 5.ELISA 中三种必要试剂是 、 和 。 6.制备酶结合物常用的方法有 和 。 7.在稀释液和洗涤液中加入__________ ，可以去除非特异性吸附。 8.均相酶免疫测定技术的类型主要有 和 。 9.非标记抗体酶免疫组织化学技术的类型主要有__________、 、__________ 和__________。 三、名词解释 1.酶免疫技术(enzyme immunoassay，EIA) 2.封闭（blocking） 3.异相酶免疫测定( heterogenous enzyme immunoassay，异相 EIA) 4.包被(coating) 5.均相酶免疫测定(homogenous enzyme immunoassay) 四、问答题 1.用于标记的酶应符合哪些要求？ 2.简述酶免疫技术的分类。 3.简述均相酶免疫测定的原理。 4.简述双抗体夹心法的原理。 5.斑点-ELISA 有哪些优点？
6.简述ELISA的基本原理、方法类型及应用。 7.简述酶增强免疫测定技术的原理。 8.简述克隆酶供体免疫分析技术的原理。 9.简述免疫印迹方法。 第三部分 参考答案与题解 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1.B 2.A 3.A 4.E 5.C 6.B 7.C 8.C 9.B 10.B 11.C 12.D 13.A 14.D 15.B 16.B 17.D 18.A 19.E 20.C 21.B (二)多项选择题(X型题) 1.ABCD 2.ACDE 3.ABCD 4.BCDE 5.ABCE 6.ACDE 7.ABDE 8.ABCD 9.ABCD 10.BCDE 11.ABDE 12.ABDE 13.ABC 14.ABCDE 15.ABD 16.ABCDE 二、填空题 1.斑点-ELISA 免疫渗滤试验 免疫层析试验 免疫印迹法 2.SDS-PAGE 蛋白质转印 酶免疫测定 3.HRP AP GOD 4.双抗体夹心法 间接法 竞争法 捕获法 5.固相的抗原或抗体 酶标记的抗原或抗体 酶的反应底物 6.戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法 7.吐温-20 8.酶增强免疫测定技术 克隆酶供体免疫分析技术 9.酶桥法 PAP法 双桥PAP法 APAAP法 三、名词解释
6.简述 ELISA 的基本原理、方法类型及应用。 7.简述酶增强免疫测定技术的原理。 8.简述克隆酶供体免疫分析技术的原理。 9.简述免疫印迹方法。 第三部分 参考答案与题解 一、选择题 （一）单项选择题（ A 型题） 1.B 2.A 3.A 4.E 5.C 6.B 7.C 8.C 9.B 10.B 11.C 12.D 13.A 14.D 15.B 16.B 17.D 18.A 19.E 20.C 21.B (二)多项选择题（X 型题） 1.ABCD 2.ACDE 3.ABCD 4.BCDE 5.ABCE 6.ACDE 7.ABDE 8.ABCD 9.ABCD 10.BCDE 11.ABDE 12.ABDE 13.ABC 14.ABCDE 15.ABD 16.ABCDE 二、填空题 1.斑点-ELISA 免疫渗滤试验 免疫层析试验 免疫印迹法 2.SDS-PAGE 蛋白质转印 酶免疫测定 3.HRP AP GOD 4.双抗体夹心法 间接法 竞争法 捕获法 5.固相的抗原或抗体 酶标记的抗原或抗体 酶的反应底物 6.戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法 7.吐温-20 8.酶增强免疫测定技术 克隆酶供体免疫分析技术 9.酶桥法 PAP 法 双桥 PAP 法 APAAP 法 三、名词解释
1.酶免疫技术：是指利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种 标记免疫技术。 2.封闭：是指在抗原或抗体包被ELISA板后，用1%-5%牛血清白蛋白或5-20%小牛血清 等再包被，以防止非特异性吸附。 3.异相EIA:是指在酶免疫测定中，抗原抗体反应后，需分离游离的和与抗原（或抗体） 结合形成复合物的酶标记物，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算出样品中待 测抗原（或抗体）的含量。 4.包被：是指将抗原或抗体固相化的过程。 5.均相酶免疫测定：是指抗原抗体反应平衡后，无需分离F和B,直接根据反应前后酶 活性的改变进行待检物质的测定。 四、问答题 1.(1)酶活性高，能对低浓度底物产生较高的催化反应率。(2)具有可与抗原、抗体 共价结合的基团，标记后酶活性保持稳定，而且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。(3) 酶催化底物后产生的信号产物易于判定或测量，且方法简单、敏感和重复性好。(4)酶活 性不受样品中其他成分（内源性酶、抑制物）的影响：用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗 体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。(5)酶、辅助因子及其底物均对人体无 危害，理化性质稳定，且价廉易得。 2.(1)酶免疫技术按实际用途，分为酶免疫组化和酶免疫测定两大类。(2)按抗原抗 体反应后是否需将结合的和游离的酶标记物分离，分为均相酶免疫测定和异相酶免疫测定， 异相酶免疫测定又可分为固相酶免疫测定和液相酶免疫测定。 3.酶标抗原(AgE)与Ab结合形成AbAgE后，其中的酶(E)活性将减弱或增强。因此， 不需对反应液中的AbAgE和AgE进行分离，直接测定反应系统中总酶活性的变化，即可推算 出被测样品中Ag的含量。 4.连接于固相载体上的抗体和酶标抗体，与待检抗原上两个不同的抗原决定基结合，形 成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待检抗 原是过量的，因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比。测定复合物中酶作用于加入的 底物后生成的有色物质量，即可确定待检抗原含量
1.酶免疫技术：是指利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种 标记免疫技术。 2.封闭：是指在抗原或抗体包被 ELISA 板后，用 1%-5%牛血清白蛋白或 5-20%小牛血清 等再包被，以防止非特异性吸附。 3.异相 EIA：是指在酶免疫测定中，抗原抗体反应后，需分离游离的和与抗原(或抗体) 结合形成复合物的酶标记物，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算出样品中待 测抗原(或抗体)的含量。 4.包被：是指将抗原或抗体固相化的过程。 5.均相酶免疫测定：是指抗原抗体反应平衡后，无需分离 F 和 B，直接根据反应前后酶 活性的改变进行待检物质的测定。 四、问答题 1.（1）酶活性高，能对低浓度底物产生较高的催化反应率。（2）具有可与抗原、抗体 共价结合的基团，标记后酶活性保持稳定，而且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。（3） 酶催化底物后产生的信号产物易于判定或测量，且方法简单、敏感和重复性好。（4）酶活 性不受样品中其他成分（内源性酶、抑制物）的影响；用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗 体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。（5）酶、辅助因子及其底物均对人体无 危害，理化性质稳定，且价廉易得。 2.（1）酶免疫技术按实际用途，分为酶免疫组化和酶免疫测定两大类。（2）按抗原抗 体反应后是否需将结合的和游离的酶标记物分离，分为均相酶免疫测定和异相酶免疫测定， 异相酶免疫测定又可分为固相酶免疫测定和液相酶免疫测定。 3.酶标抗原（AgE）与 Ab 结合形成 AbAgE 后，其中的酶（E）活性将减弱或增强。因此， 不需对反应液中的 AbAgE 和 AgE 进行分离，直接测定反应系统中总酶活性的变化，即可推算 出被测样品中 Ag 的含量。 4.连接于固相载体上的抗体和酶标抗体，与待检抗原上两个不同的抗原决定基结合，形 成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待检抗 原是过量的，因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比。测定复合物中酶作用于加入的 底物后生成的有色物质量，即可确定待检抗原含量
5.(1)NC膜吸附蛋白力强，微量抗原吸附完全，故检出灵敏度可较普通的ELISA高6-8 倍：(2)试剂用量较ELISA省10倍：(3)操作简便，试验及结果判断不需特殊设备条件： (4)吸附抗原（抗体）或已有结果的NC膜可长期保存(-20℃可达半年)。 6.(1)基本原理：抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面：测定时，将受检样品（含 待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形 成抗原或抗体复合物：反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量（免疫复合物）即 与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例：经洗涤去除反应液中其他物质，加入底物进行显 色，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。 (2)方法类型及应用：①双抗体夹心法：用于检测抗原，适用于检测两个或两个以上 抗原决定基的多价抗原：②间接法：用于检测抗体：③竞争法：用于抗原和半抗原的定量测 定，也可对抗体进行测定：④捕获法：用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM)的测定。 7.具抗原及酶活性的Ag与Ab结合形成AgAb后，所标的酶(E)因与Ab接触紧密，空 间位阻影响了酶的活性中心，酶活性受到抑制。加入未标记抗原（标准或样品中的Ag)后， Ag即与Ab竞争结合反应系统中限量的Ab形成AbAg,从而使反应液中AgAb(酶活性被抑 制)的比例减少，具酶活性的游离Ab增多。最终测得的酶活性随着反应体系中未标记抗原 (Ag)浓度升高而增强。 8.DNA重组技术可分别合成某种功能性酶分子的两个片段，大片段为酶受体(EA),小 片段为酶供体(ED)。单独的EA和ED均无酶活性，但在一定条件下可结合形成具酶活性的四 聚体。CEDIA即是用ED标记抗原(AgD),反应系统中再加入相应的EA、Ab及样品抗原Ag(未 标记)，反应时由于抗原抗体间的亲和力大于ED与EA者，因此AgD和Ag易与Ab结合形成 复合物。而AbAg中的Ag”由于空间位阻的干扰不能与EA结合，游离的Ag"则可与EA结 合成具活性的全酶。由于反应属竞争结合，故反应液中游离的AgD随着未标记Ag量的增多 而增加，使最终加入底物后测得的酶活性与样品Ag含量成正比。 9.免疫印迹方法亦称Western blot,.由SDS-PAGE、蛋白质转印和酶免疫测定三项技术 结合而成。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，SDS-PAGE时从阴极向阳极泳动，分子 量小者，泳动速度快：将凝胶中已经分离的蛋白质条带在电场作用下转移至硝酸纤维素膜上： 将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用，加入能形成不溶 性显色物的酶反应底物，使区带染色：根据电泳时加入的分子量标准，可确定各组份的分子 量。 (秦东春)
5.（1）NC 膜吸附蛋白力强，微量抗原吸附完全，故检出灵敏度可较普通的 ELISA 高 6-8 倍；（2）试剂用量较 ELISA 省 10 倍；（3）操作简便，试验及结果判断不需特殊设备条件； （4）吸附抗原(抗体)或已有结果的 NC 膜可长期保存（-20℃可达半年）。 6.（1）基本原理：抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面；测定时，将受检样品（含 待测抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形 成抗原或抗体复合物；反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量（免疫复合物）即 与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例；经洗涤去除反应液中其他物质，加入底物进行显 色，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。 （2）方法类型及应用：①双抗体夹心法：用于检测抗原，适用于检测两个或两个以上 抗原决定基的多价抗原；②间接法：用于检测抗体；③竞争法：用于抗原和半抗原的定量测 定，也可对抗体进行测定；④捕获法：用于血清中某种抗体亚型成分（如 IgM）的测定。 7.具抗原及酶活性的 Ag-E 与 Ab 结合形成 AgAb-E 后，所标的酶(E)因与 Ab 接触紧密，空 间位阻影响了酶的活性中心，酶活性受到抑制。加入未标记抗原(标准或样品中的 Ag)后， Ag 即与 Ab-E 竞争结合反应系统中限量的 Ab 形成 AbAg，从而使反应液中 AgAb-E (酶活性被抑 制)的比例减少，具酶活性的游离 Ab-E 增多。最终测得的酶活性随着反应体系中未标记抗原 (Ag)浓度升高而增强。 8.DNA 重组技术可分别合成某种功能性酶分子的两个片段，大片段为酶受体( EA)，小 片段为酶供体(ED)。单独的 EA 和 ED 均无酶活性，但在一定条件下可结合形成具酶活性的四 聚体。CEDIA 即是用 ED 标记抗原(Ag-ED)，反应系统中再加入相应的 EA、Ab 及样品抗原 Ag (未 标记)，反应时由于抗原抗体间的亲和力大于 ED 与 EA 者，因此 Ag-ED和 Ag 易与 Ab 结合形成 复合物。而 AbAg-ED 中的 Ag-ED 由于空间位阻的干扰不能与 EA 结合，游离的 Ag-ED 则可与 EA 结 合成具活性的全酶。由于反应属竞争结合，故反应液中游离的 Ag-ED 随着未标记 Ag 量的增多 而增加，使最终加入底物后测得的酶活性与样品 Ag 含量成正比。 9.免疫印迹方法亦称 Western blot，由 SDS-PAGE、蛋白质转印和酶免疫测定三项技术 结合而成。抗原等蛋白样品经 SDS 处理后带负电荷，SDS-PAGE 时从阴极向阳极泳动，分子 量小者，泳动速度快；将凝胶中已经分离的蛋白质条带在电场作用下转移至硝酸纤维素膜上； 将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用，加入能形成不溶 性显色物的酶反应底物，使区带染色；根据电泳时加入的分子量标准，可确定各组份的分子 量。 (秦东春)