第十八章荧光免疫技术 Chapter 18 Fluorescence Immunoassay 第一部分教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：荧光免疫技术原理、类型及临床应用，常用的荧光物质：熟悉：荧光免疫技术 的技术要点。了解：荧光素标物的制备与保存，镧系稀土元素标记物的制备，荧光免疫技术 主要类型的技术要点。 二、教学内容 1.荧光标记物的制备：荧光和荧光物质，荧光标记物的制备。 2.荧光免疫显微技术：基本原理，技术类型，技术要点，方法评价，临床应用。 3.荧光免疫测定技术：时间分辨荧光免疫测定（基本原理，技术类型，技术要点，方 法评价和临床应用)：荧光偏振免疫测定（基本原理，技术类型，技术要点，方法评价和临 床应用)。 第二部分测试题 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1.如下有关荧光免疫技术完整正确的提法 A.直观性检测抗原和抗体 B.直观性检测抗原 C.直观性检 测抗体 D.间接检测抗原或抗体 E.间接检测抗原和抗体 2.荧光素易受温度影响，操作时通常选择较佳的温度 A.10℃~15℃B.15℃~20℃C.20℃~25℃D.25℃-30℃E.30℃~35℃ 3.荧光抗体保存3~4年，应选择 A.小量分装、4℃ B.瓶分装、4℃ C.瓶分装、-10℃ D.瓶分装、-20℃ E.小量分装、-20℃ 4.下列组成荧光显微镜的结构中，与普通光学显微镜相同的是 A.光源 B.聚光器 C.目镜 D.物镜 E.滤光片
第十八章 荧光免疫技术 Chapter 18 F l uores cence I m m u noassa y 第一部分 教学内容和要求 一、目的要求 ·掌握：荧光免疫技术原理、类型及临床应用，常用的荧光物质；熟悉：荧光免疫技术 的技术要点。了解：荧光素标物的制备与保存，镧系稀土元素标记物的制备，荧光免疫技术 主要类型的技术要点。 二、教学内容 1．荧光标记物的制备：荧光和荧光物质，荧光标记物的制备。 2．荧光免疫显微技术：基本原理，技术类型，技术要点，方法评价，临床应用。 3．荧光免疫测定技术：时间分辨荧光免疫测定（基本原理，技术类型，技术要点，方 法评价和临床应用）；荧光偏振免疫测定（基本原理，技术类型，技术要点，方法评价和临 床应用）。 第二部分 测试题 一、选择题 （一）单项选择题（A 型题） 1．如下有关荧光免疫技术完整正确的提法 A．直观性检测 抗原和抗体 B．直观性检测抗 原 C．直观性 检 测抗体 D．间接检测抗原或抗体 E．间接检测抗原和抗体 2．荧光素易受温度影响，操作时通常选择较佳的温度 A. 10℃～15℃ B.15℃～20℃ C.20℃～25℃ D. 25℃～30℃ E. 30℃～35℃ 3．荧光抗体保存 3～4 年，应选择 A．小量分装、4℃ B．瓶分装、4℃ C．瓶分装、-10℃ D．瓶分装、-20℃ E．小量分装、-20℃ 4.下列组成荧光显微镜的结构中，与普通光学显微镜相同的是 A. 光源 B. 聚光器 C. 目镜 D. 物镜 E. 滤光片
5.下列哪项方法不属于荧光免疫显微技术类型 A.直接法 B.夹心法 C.间接法 D.补体法 E.双标记法 6.荧光抗体染色标本的观察时间： A。当天 B。第二天 C。第三天 D.1周内 E.5天 7.荧光抗体间接法应标记 A.抗原 B.抗体 C.补体 D.抗抗体 E.抗体及补体 8.荧光显微技术常用于检验血清中各种自身抗体和多种病原体抗体的方法是 A直接法 B间接法 C双抗体夹心法 D.补体法 E.双标记法 9.荧光抗体间接法可检测 A.抗原 B.抗体 C.补体 D.蛋白质 E.抗原和抗体 10.在荧光显微镜检查中直接影响检测结果的是 A.抗原荧光染色 B.抗体荧光染色 C.补体荧光染色 D.特异性荧光染色 E.非特异性荧光染色 11.主要用于测定各种激素、蛋白质、酶、药物及病毒抗原的技术 A.荧光偏振免疫测定 B.荧光免疫显微技术 C.时间分辨 荧光免疫测定 D.底物标记荧光免疫测定 E.流式荧光免疫技术 12.临床药物浓度检测的首选方法 A.时间分辨荧光免疫测定 B.荧光偏振免疫测定 C.荧光免疫显 微技术 D.流式荧光免疫技术 E.底物标记荧光免疫测定 13.最适合于时间分辨荧光免疫测定的荧光物质 A.异硫氰酸荧光素 B.四乙基罗丹明 C.四甲基异硫氰酸罗丹明 D.藻红蛋白 E.镧系稀土元素(Eu3) (二)多项选择题(X型题) 1.对荧光素影响的因素有 A.pH、温度 B.溴化物、碘化物等杂质 C.荧光素的浓度 D.细胞固定剂 E.化合物 2.常用的荧光素是指
5. 下列哪项方法不属于荧光免疫显微技术类型 A. 直接法 B. 夹心法 C. 间接法 D. 补体法 E. 双标记法 6. 荧光抗体染色标本的观察时间： A。当天 B。第二天 C。第三天 D．1 周内 E.5 天 7．荧光抗体间接法应标记 A．抗原 B．抗体 C．补体 D．抗抗体 E.抗体及补体 8．荧光显微技术常用于检验血清中各种自身抗体和多种病原体抗体的方法是 A 直接法 B 间接法 C 双抗体夹心法 D．补体法 E．双标记法 9．荧光抗体间接法可检测 A．抗原 B．抗体 C．补体 D． 蛋白质 E． 抗原和抗体 10．在荧光显微镜检查中直接影响检测结果的是 A．抗原荧光染色 B．抗体荧光染色 C．补体荧光染色 D．特异性荧光染色 E．非特异性荧光染色 11. 主要用于测定各种激素、蛋白质、酶、药物及病毒抗原的技术 A． 荧光偏振免疫测定 B． 荧光免疫 显微技术 C． 时间分辨 荧光免疫测定 D． 底物标记荧光免疫测定 E． 流式荧光免疫技术 12．临床药物浓度检测的首选方法 A． 时间分辨荧光免疫测定 B．荧 光偏振免疫测定 C．荧 光免疫显 微技术 D． 流式荧光免疫技术 E．底物标记荧光免疫测定 13．最适合于时间分辨荧光免疫测定的荧光物质 A．异硫氰酸荧光素 B．四乙基罗丹明 C．四甲基异硫氰酸罗丹明 D．藻红蛋白 E．镧系稀土元素（Eu3+） （二）多项选择题（X 型题） 1．对荧光素影响的因素有 A．pH、温度 B．溴化物、碘化物等杂质 C．荧光素的浓度 D．细胞固定剂 E．化合物 2.常用的荧光素是指
A.异硫氰酸荧光素B.四乙基罗丹明C.四甲基异硫氰酸罗丹明 D.藻红蛋白 E。镧系稀土元素(Eu") 3.有关荧光显微技术中制作组织标本过程要求 A.尽量保持抗原完整性 B.切片尽量薄 C.用丙酮或乙醇固定 D.制好的标本尽快染色 E.制好的标本无法及时染色、应置-20℃下低温干燥保存。 4.荧光免疫显微技术在临床可用于检测 A.血清中自身抗体的检测 B.各种微生物的快速检查和鉴定 C.寄生虫感染的诊断 D.白细胞分化抗原的检测 E.HLA分型检测 5。荧光显微技术在组织学检查中具有如下优点 A.抗原或抗体的定位 B.抗原或抗体的定性检查 C.抗原抗体反应的高度特异性 D.荧光标本能持久保存 E.能在荧光显微镜下清晰地显示其形态、直观性强 6。间接荧光免疫法的优点是 A.敏感性高于直接法 B.制备一种荧光抗体即可检测多种抗原或抗 体 C.操作时间较短 D.不易出现非特异荧光 E.反应参与的因素多 二、填空题 1.荧光免疫技术的主要类型包括 和 2.荧光物质有」 和 3.荧光抗体染色技术可分为 和 4.镧系稀土元素标记物制备的螯合剂有 袋 5.荧光免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游的荧光标记 物而分为_和 两种类型。 6.非均相荧光免疫测定法包括 和 7.均相荧光免疫测定法包括」 8.荧光素标记抗体的方法有 和
A．异硫氰酸荧光素 B．四乙基罗丹明 C．四甲基异硫氰酸罗丹明 D．藻红蛋白 E。镧系稀土元素（Eu3+） 3．有关荧光显微技术中制作组织标本过程要求 A．尽量保持抗原完整性 B．切片尽量薄 C．用丙酮或乙醇固定 D．制好的标本尽快染色 E．制好的标本无法及时染色、应置-20℃下低温干燥保存。 4．荧光免疫显微技术在临床可用于检测 A.血清中自身抗体的检测 B.各种微生物的快速检查和鉴定 C.寄生虫感染的诊断 D.白细胞分化抗原的检测 E.HLA 分型检测 5。荧光显微技术在组织学检查中具有如下优点 A．抗原或抗体的定位 B. 抗原或抗体的定性检查 C.抗原抗体反应的高度特异性 D.荧光标本能持久保存 E.能在荧光显微镜下清晰地显示其形态、直观性强 6。间接荧光免疫法的优点是 A．敏感性 高于 直接法 B．制备 一种荧 光抗体 即可检 测多种 抗原或 抗 体 C．操作时间较短 D．不易出现非特异荧光 E．反应参与的因素多 二、填空题 1. 荧光免疫技术的主要类型包括________ 和________。 2．荧光物质有________ 和________。 3．荧光抗体染色技术可分为________ 和________。 4. 镧系稀土元素标记物制备的螯合剂有________、________、________和________。 5．荧光免疫 测定根 据抗原抗 体反应 后是否需 要分离 结合的与 游的荧 光标记 物而分为________和________两种类型。 6．非均相荧光免疫测定法包括________ 和________。 7．均相荧光免疫测定法包括________和________。 8．荧光素标记抗体的方法有________和________
三、名词解释 1.荧光免疫技术(fluorescence immunoassay)) 2.荧光效率(fluorescent efficiency) 3.荧光寿命(fluorescence lifetime) 4.荧光的淬灭(fluorescent dyked) 5.荧光素(f1 uorescein) 6.荧光抗体(fluorescent antibody) 7.荧光免疫显微技术(immunofluorescence microscopy) 8.非均相荧光免疫测定法(aneven phas fluoroimmunoassay) 9.均相荧光免疫测定法(even phas fluoroimmunoassay) I0.时间分辨荧光免疫测定(time resolved fluorescence immunoassay, TR-FIA) Il.荧光偏振免疫测定(fluorescence polarization immunoassay) 四、问答题 1.试述用于标记的荧光素应具备什么条件？ 2.试述荧光免疫显微技术基本原理。 3.试述荧光免疫显微技术的临床应用。 4.试述荧光偏振免疫测定基本原理。 5.试述荧光免疫显微技术基本原理。 6.时间分辨荧光免疫测定法具有哪些优点？ 第三部分参考答案与题解 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1.A 2.B 3.E 4.D 5.B 6.A7.D 8.B 9.E 10.E11.C 12.B 13.E (二)多项选择题(X型题) 1.ABCDE 2.ABCD 3.ABCDE 4.ABCDE 5.ABCE 6.AB
三、名词解释 1．荧光免疫技术(fluorescence immunoassay) 2．荧光效率(fluorescent efficiency) 3．荧光寿命（fluorescence lifetime） 4．荧光的淬灭(fluorescent dyked) 5．荧光素(fluorescein) 6．荧光抗体(fluorescent antibody) 7．荧光免疫显微技术(immunofluorescence microscopy ) 8．非均相荧光免疫测定法(aneven phas fluoroimmunoassay) 9．均相荧光免疫测定法(even phas fluoroimmunoassay) 10．时 间分 辨荧 光免 疫测 定(time resolved fluorescence immunoassa y， TR-FIA) 11．荧光偏振免疫测定(fluorescence polarization immunoassay) 四、问答题 1．试述用于标记的荧光素应具备什么条件？ 2．试述荧光免疫显微技术基本原理。 3. 试述荧光免疫显微技术的临床应用。 4．试述荧光偏振免疫测定基本原理。 5．试述荧光免疫显微技术基本原理。 6．时间分辨荧光免疫测定法具有哪些优点？ 第三部分 参考答案与题解 一、选择题 （ 一 ） 单 项选择题 （A 型题） 1．A 2．B 3．E 4.D 5.B 6．A 7．D 8．B 9．E 10．E 11．C 12．B 13.E （ 二 ） 多 项选择题 （X 型题） 1．ABCDE 2．ABCD 3．ABCDE 4．ABCDE 5．ABCE 6．AB
二、填空题 1.荧光抗体染色技术、荧光免疫测定技术。 2.荧光素、其他荧光素物质（镧系稀土元素）。 3.荧光免疫显微技术、流式荧光免疫技术。 4.多羧基酸类螯合剂、B-二酮体类螯合剂、BCPDA和10菲洛林。 5.均相、非均相。 6.时间分辨荧光免疫测定、荧光酶免疫测定。 7.荧光偏振免疫测定、底物标记荧光免疫测定。 8.搅拌标记法、透析标记法。 三、名词解释 1.荧光免疫技术：是将抗原抗体反应的特异性与荧光物质检测的敏感性和直观性结合 起来的一种免疫分析技术。 2.荧光效率：是指荧光物质将吸收的光能转变成为荧光的百分率。 3.荧光寿命：指荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而衰减到一定程度 时所用的时间。 4.荧光的淬灭：指荧光分子在某些理化因素作用下、荧光分子的辐射能力受 到激发光较长时间的照射后会减弱的现象。 5.荧光素：是能产生荧光并能作为染料使用的有机化合物。 6.荧光抗体：荧光素与特异性抗体以化学共价键的方式结合而成，是免疫荧光技术的 关键试剂。 7.荧光免疫显微技术：是以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性 抗体或抗抗体，检测固定组织细胞上的抗原或血清中的抗体，常用于定性和定 位检查的一门技术。 8.非均相荧光免疫测定法：在抗原抗体反应后，先把AbAg与Ab分离，然 后测定AbAg或Ab中的标记物的量，从而推算出标本中的Ag量，该方法称非 均相荧光免疫测定法
二、填空题 1．荧光抗体染色技术、荧光免疫测定技术。 2．荧光素、其他荧光素物质（镧系稀土元素）。 3．荧光免疫显微技术、流式荧光免疫技术。 4．多羧基酸类螯合剂、β-二酮体类螯合剂、BCPDA 和 10 菲洛林。 5．均相、非均相。 6．时间分辨荧光免疫测定、荧光酶免疫测定。 7．荧光偏振免疫测定、底物标记荧光免疫测定。 8．搅拌标记法、透析标记法。 三、名词解释 1. 荧光免疫技术：是将抗原抗体反应的特异性与荧光物质检测的敏感性和直观性结合 起来的一种免疫分析技术。 2. 荧光效率：是指荧光物质将吸收的光能转变成为荧光的百分率。 3. 荧光寿命：指荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而衰减到一定程度 时所用的时间。 4. 荧光的淬灭：指荧光分子在 某些理化因素 作用下、荧 光分子的辐射 能力受 到激发光较长时间的照射后会减弱的现象。 5.荧光素：是能产生荧光并能作为染料使用的有机化合物。 6. 荧光抗体：荧光素与特异性抗体以化学共价键的方式结合而成，是免疫荧光技术的 关键试剂。 7. 荧光免疫显微技术 ：是以荧光显微 镜为检测工具，用荧光素标记特 异性 抗体或抗抗 体，检 测固定 组织细胞 上的抗 原或血 清中的抗 体，常 用于定 性和定 位检查的一门技术。 8. 非均相荧光免疫测定法：在抗原抗体反应后，先把 Ab* Ag 与 Ab*分离，然 后测定 Ab* Ag 或 Ab*中的标记物的量，从而推算出标本中的 Ag 量，该方法称非 均相荧光免疫测定法
9.均相荧光免疫测定法：在抗原抗体反应后AbAg中的标记物失去荧光特 性，则不需进行AbAg与Ab的分离，可以直接测定游离的Ab量，从而推算出 标本中的Ag量，该方法称为均相荧光免疫测定法。 10.时间分辨荧光免疫测定：时间分辨荧光免疫测定是用镧系稀土元素螯合 物（如u3螯合物）标记抗体或抗原，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫 测定技术。 11.荧光偏振免疫测定：是利用荧光素经偏振光照射而跃入激发态，在回复 至基态后可释出光子，经偏振仪形成偏振荧光，荧光偏振强度与荧光分子的大 小成正比的关系而建立的免疫分析技术。 四、问答题 1.用于标记的荧光素应符合以下要求：①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基 团，结合后不易解离，而未结合者易清除：②荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高 的荧光效率：③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明：④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有 的生化与免疫学性质：⑤标记方法简单、安全无毒：⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。 2.荧光免疫显微技术是以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性抗 体或抗抗体，检测固定组织细胞上的抗原或血清中的抗体，常用于定性和定位 检查的一门技术。 3.临床常应用于：①血清中自身抗体的检测；②各种微生物的快速检查和鉴定；③寄 生虫感染的诊断：④白细胞分化抗原的检测。 4.荧光偏振免疫测定基本原理：荧光偏振免疫测定是利用荧光素经偏振光 照射而跃入激发态，在回复至基态后可释出光子，经偏振仪形成偏振荧光，荧 光偏振强度与荧光分子的大小成正比的关系而建立的免疫分析技术。 5.荧光免疫显微技术是以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性抗 体或抗抗体，检测固定组织细胞上的抗原或血清中的抗体，常用于定性和定位 检查的一门技术。 6.时间分辨荧光免疫测定法具有特异性强，灵敏度高，标准曲线范围宽， 分析速度快，标记物制备较简便、有效使用期长，无放射性污染等优点，因此 是很有发展前途的超微量物质免疫分析技术。 (吕世静)
9. 均相荧光免疫测定法：在抗原抗体反 应后 Ab* Ag 中的标记物失 去荧光特 性，则不需进行 Ab* Ag 与 Ab*的分离，可以直 接测定游离的 Ab*量，从 而推算出 标本中的 Ag 量，该方法称为均相荧光免疫测定法。 10. 时间分辨荧光免疫测 定：时间 分辨荧光免疫测 定是用镧系稀土 元素螯合 物(如 Eu3 +螯合物)标记抗体 或抗原 ，检测标 本中的相 应抗原或 抗体的荧 光免疫 测定技术。 11. 荧光偏振免疫测定：是利 用荧光素经偏振 光照射而跃入激 发态，在回复 至基态后可 释出光 子，经 偏振仪形 成偏振 荧光， 荧光偏振 强度与 荧光分 子的大 小成正比的关系而建立的免疫分析技术。 四、问答题 1．用于标记的荧光素应符合以下要求：①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基 团，结合后不易解离，而未结合者易清除；②荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高 的荧光效率；③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明；④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有 的生化与免疫学性质；⑤标记方法简单、安全无毒；⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。 2．荧光免疫 显微技 术是以荧 光显微 镜为检测 工具， 用荧光素 标记特 异性抗 体或抗抗体 ，检测 固定组 织细胞上 的抗原 或血清 中的抗体 ，常用 于定性 和定位 检查的一门技术。 3．临床常应用于：①血清中自身抗体的检测; ②各种微生物的快速检查和鉴定; ③寄 生虫感染的诊断; ④白细胞分化抗原的检测。 4．荧光偏振 免疫测 定基本原 理：荧 光偏振免 疫测定 是利用荧 光素经 偏振光 照射而跃入 激发态 ，在回 复至基态 后可释 出光子 ，经偏振 仪形成 偏振荧 光，荧 光偏振强度与荧光分子的大小成正比的关系而建立的免疫分析技术。 5．荧光免疫 显微技 术是以荧 光显微 镜为检测 工具， 用荧光素 标记特 异性抗 体或抗抗体 ，检测 固定组 织细胞上 的抗原 或血清 中的抗体 ，常用 于定性 和定位 检查的一门技术。 6．时间分辨 荧光免 疫测定法 具有特 异性强， 灵敏度 高，标准 曲线范 围宽， 分析速度快 ，标记 物制备 较简便、 有效使 用期长 ，无放射 性污染 等优点 ，因此 是很有发展前途的超微量物质免疫分析技术。 （吕世静）