药理学实验讲义 江汉大学医学与生命科学学院 药理教研室 二零零五年六月 PdfcreatedwithFineprintpdffactoryProtrialversionhttp://www.fineprint.com
药理学实验讲义 江汉大学医学与生命科学学院 药理教研室 二零零五年六月 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
录 药理学实验的基本知识和技术· 实验一剂量对药物作用的影响 实验二钡盐的溶解度与作用关系 实验三不同给药途径对药物作用的影响 实验四pA2的测定··· 实验五药物血浆半衰期及表观分布容积的测定 实验六有机磷农药中毒与解救· 实验七综合实验药物对家兔血压、心律的影响。···· 实验八综合实验:药物利尿作用观察· 实验九综合实验:药物对呼吸的抑制及兴奋作用观察····· 实验十病例讨论· PdfcreatedwithFineprintpdffactoryProtrialversionhttp://www.fineprint.com
目 录 药理学实验的基本知识和技术················ 实验一 剂量对药物作用的影响················ 实验二 钡盐的溶解度与作用关系··············· 实验三 不同给药途径对药物作用的影响············ 实验四 pA2的测定····················· 实验五 药物血浆半衰期及表观分布容积的测定········ 实验六 有机磷农药中毒与解救··············· 实验七 综合实验 药物对家兔血压、心律的影响······· 实验八 综合实验:药物利尿作用观察············· 实验九 综合实验：药物对呼吸的抑制及兴奋作用观察····· 实验十 病例讨论····················· PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
药理学实验的基本知识和技术 药理学实验目的 药理学实验是药理学教学的一个重要组成部分,它包括实验操作、整理分析并讨论实验 结果、正确书写实验报告。目的在于通过实验验证理论、巩固并加强对理论知识的理解;同 时通过实验,使学生掌握药理实验的基本方法和技能,培养对科学工作严肃的态度,严密的 方法和严格的要求,培养根据客观实际分析问题和解决问题的能力,为今后进行科学研究打 下初步基础 、药理学实验设计的基本知识 (一)基本要求 1、明确实验目的,立题即需达到什么学习或研究目的,选择合适研究课题。课题应 具有科学性、创新性、可行性等。 2、通过文献检索了解待研究内容的国内外研究现状 3、选择合适的实验动物及模型如在研究强心甙药理正肌作用时,常选用豚鼠或猫而 不选用大鼠,这是因为大鼠心肌Na-K'sm酶亚型对强心甙不敏感之故。 4、确定实验方法在整体水平还是离体器官、组织水平或细胞、分子水平进行实验, 宜根据实验室条件合理选择可行的实验方法 5、完整的实验设计应包括实验目的、方法、材料、指标、数据收集与分析、统计学处 理、预期结果等 (二)基本原则 药理学实验设计应遵循的基本原则是:随机、对照、重复 1、随机原则 药理学实验的对象是生物活体或组织标本,存在个体间差异,因此,采用随机原则, 可把实验对象在机会均等的条件下分配到实验各组,从而有效地消除分组时主观因素或其 它客观因素的干扰,排除偏因,减少误差。但应注意随机不等于随意 (1)完全随机化法 把实验对象完全随机地分配到各实验组中去,此法最简单、常用,一般适用于单因素大 样本实验。如随机数字法、抓阄等。 (2)均衡随机法 先将动物按性别、体重、或者其他因素加以均衡,将条件基本相同的动物随机分配于各 组中以减少组间的差异。 率较高。 2、对照原则 在药理学实验中,影响实验结果的因素很多,有些因素是可以控制的,有些则难以控 制,为了减少多因素及难以控制因素的影响,实验中应同时设立对照组,用对照组和实验组 PdfcreatedwithFineprintpdffactoryProtrialversionhttp://www.fineprint.com
药理学实验的基本知识和技术 一、药理学实验目的 药理学实验是药理学教学的一个重要组成部分，它包括实验操作、整理分析并讨论实验 结果、正确书写实验报告。目的在于通过实验验证理论、巩固并加强对理论知识的理解；同 时通过实验，使学生掌握药理实验的基本方法和技能，培养对科学工作严肃的态度，严密的 方法和严格的要求，培养根据客观实际分析问题和解决问题的能力，为今后进行科学研究打 下初步基础。 二、药理学实验设计的基本知识 （一）基本要求 1、 明确实验目的，立题 即需达到什么学习或研究目的，选择合适研究课题。课题应 具有科学性、创新性、可行性等。 2、 通过文献检索了解待研究内容的国内外研究现状。 3、 选择合适的实验动物及模型 如在研究强心甙药理正肌作用时，常选用豚鼠或猫而 不选用大鼠，这是因为大鼠心肌 Na+ -K+ ATP酶亚型对强心甙不敏感之故。 4、 确定实验方法 在整体水平还是离体器官、组织水平或细胞、分子水平进行实验， 宜根据实验室条件合理选择可行的实验方法。 5、 完整的实验设计应包括实验目的、方法、材料、指标、数据收集与分析、统计学处 理、预期结果等。 （二）基本原则 药理学实验设计应遵循的基本原则是：随机、对照、重复。 1、随机原则 药理学实验的对象是生物活体或组织标本，存在个体间差异，因此，采用随机原则， 可把实验对象在机会均等的条件下分配到实验各组，从而有效地消除分组时主观因素或其 它客观因素的干扰，排除偏因，减少误差。但应注意随机不等于随意。 ⑴ 完全随机化法 把实验对象完全随机地分配到各实验组中去，此法最简单、常用，一般适用于单因素大 样本实验。如随机数字法、抓阄等。 ⑵ 均衡随机法 先将动物按性别、体重、或者其他因素加以均衡，将条件基本相同的动物随机分配于各 组中以减少组间的差异。此法效率较高。 2、对照原则 在药理学实验中，影响实验结果的因素很多，有些因素是可以控制的，有些则难以控 制，为了减少多因素及难以控制因素的影响，实验中应同时设立对照组，用对照组和实验组 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
间的比较来消除各种无关因素的影响,使实验结果误差尽可能地缩小,达到正确评价药物效 果的目的。 没有比较就没有鉴别,对照是比较的基础。没有设立对照组的药理学实验就是缺乏科学 性的实验。根据实验研究内容不同,选用不同的对照形式,常用的有下列5种 ①空白对照指不加任何处理条件下进行观察的对照 ②阴性对照除不用被研究的药物外,对照组的动物要经受同样的处理,如给予生理盐水 或不含药物的溶媒 ③阳性对照指已知经典药物在标准条件下与实验药物进行的对照。它既可验证实验方法 是否可靠,又便于受试药与经典药比较,评价药物的效价强度等。 ④组间对照实验中设立若干个平行组,进行组间比较。如受试药分成若干剂量,分别给 予分组,进行组间比组,以便说明量效关系(或剂量依赖性)。一般至少设3个剂量组。 ⑤自身对照指对照与实验在同一受试对象上进行,观察同一受试者给药前后变化即为自 身对照,这一对照可以较好地减少个体差异的影响,省时节力 实验设计中,无论采用何种对照形式,其前提必须要符合“齐同对比”即同时、同地 同环境、同种、同重(或同体表面积)、同批号的要求,对照方才有意义 3、重复原则 其目的就是排除实验结果的偶然性,肯定其客观规律性。 由于生物个体差异和实验误差,仅根据一次实验或一个样本所得结果就草率下结论,是 不科学的,因而往往也是错误的,重复是指在类似的条件下,把实验结果重复(复制,重现) 出来,稳定的重复性是评价实验结果可靠性的重要依据,在具体应用重复原则指导实验设计 时,它主要有两方面的作用 (1)确定样本大小 一般情况下,小动物,每组10~30例,计量资料组间对比时,每组应不少于10例,计 数资料则每组不少于50例。中等动物每组8-12例,大动物每组5-15例 按照统计学原理,每组样本数相同时,实验效率最高:量反应比质反应指标效率高;自 体实验比分组实验效率高 (2)控制干扰因素 可从动物方面、测定仪器方面、药物方面减少不确定因素的影响。如药物结构或药物主要 成分含量能否明确和控制对实验能否重复至关重要,尤其是中药研究 三、实验动物用药量的计算 动物实验所用的药物剂量,一般按mg/kg体重或g/kg体重计算,应用时须从已知药液 的浓度换算出相当于每kg体重应注射的药液量(m1数),以便给药 例1:计算给体重1.8kg的家兔,静脉注射20%氨基甲酸乙酯溶液麻醉,按每kg体重 lg的剂量注射,应注射多少m1? PdfcreatedwithFineprintpdffactoryProtrialversionhttp://www.fineprint.com
间的比较来消除各种无关因素的影响，使实验结果误差尽可能地缩小，达到正确评价药物效 果的目的。 没有比较就没有鉴别，对照是比较的基础。没有设立对照组的药理学实验就是缺乏科学 性的实验。根据实验研究内容不同，选用不同的对照形式，常用的有下列 5 种 ①空白对照 指不加任何处理条件下进行观察的对照 ②阴性对照 除不用被研究的药物外，对照组的动物要经受同样的处理，如给予生理盐水 或不含药物的溶媒 ③阳性对照 指已知经典药物在标准条件下与实验药物进行的对照。它既可验证实验方法 是否可靠，又便于受试药与经典药比较，评价药物的效价强度等。 ④组间对照 实验中设立若干个平行组，进行组间比较。如受试药分成若干剂量，分别给 予分组，进行组间比组，以便说明量效关系（或剂量依赖性）。一般至少设 3 个剂量组。 ⑤自身对照 指对照与实验在同一受试对象上进行，观察同一受试者给药前后变化即为自 身对照，这一对照可以较好地减少个体差异的影响，省时节力。 实验设计中，无论采用何种对照形式，其前提必须要符合“齐同对比”即同时、同地、 同环境、同种、同重（或同体表面积）、同批号的要求，对照方才有意义。 3、重复原则 其目的就是排除实验结果的偶然性，肯定其客观规律性。 由于生物个体差异和实验误差，仅根据一次实验或一个样本所得结果就草率下结论，是 不科学的，因而往往也是错误的，重复是指在类似的条件下，把实验结果重复（复制，重现） 出来，稳定的重复性是评价实验结果可靠性的重要依据，在具体应用重复原则指导实验设计 时，它主要有两方面的作用。 ⑴ 确定样本大小 一般情况下，小动物，每组 10~30 例，计量资料组间对比时，每组应不少于 10 例，计 数资料则每组不少于 50 例。中等动物每组 8~12 例，大动物每组 5~15 例。 按照统计学原理，每组样本数相同时，实验效率最高；量反应比质反应指标效率高；自 体实验比分组实验效率高。 ⑵ 控制干扰因素 可从动物方面、测定仪器方面、药物方面减少不确定因素的影响。如药物结构或药物主要 成分含量能否明确和控制对实验能否重复至关重要，尤其是中药研究。 三、实验动物用药量的计算 动物实验所用的药物剂量，一般按 mg/kg 体重或 g/kg 体重计算，应用时须从已知药液 的浓度换算出相当于每 kg 体重应注射的药液量（ml 数），以便给药。 例 1：计算给体重 1.8kg 的家兔，静脉注射 20%氨基甲酸乙酯溶液麻醉，按每 kg 体重 1g 的剂量注射，应注射多少 ml？ PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
计算方法:家兔每kg体重需注射1g,注射液为20%,则氨基甲酸乙酯溶液的注射量应 为5ml/kg体重,现在兔体重为1.8kg,应注射20%氨基甲酸乙酯溶液用量=5×1.8=9ml 例2:计算给体重23g的小鼠,注射盐酸吗啡15ng/kg重,溶液浓度为0.1%,应注射多 少m1? 计算方法:小白鼠每kg体重需吗啡的量为15mg,则0.1%盐酸吗啡溶液的注射量应为 l5ml/kg体重,现小白鼠体重为23g,应注射0.1%盐酸吗啡溶液的用量=15×0.023=0.345ml PdfcreatedwithFineprintpdffactoryProtrialversionhttp://www.fineprint.com
计算方法：家兔每 kg 体重需注射 1g，注射液为 20％，则氨基甲酸乙酯溶液的注射量应 为 5ml/kg 体重，现在兔体重为 1.8kg，应注射 20%氨基甲酸乙酯溶液用量=5×1.8=9ml。 例 2：计算给体重 23g 的小鼠，注射盐酸吗啡 15mg/kg 重，溶液浓度为 0.1%，应注射多 少 ml？ 计算方法：小白鼠每 kg 体重需吗啡的量为 15mg，则 0.1%盐酸吗啡溶液的注射量应为 15ml/kg 体重，现小白鼠体重为 23g，应注射 0.1%盐酸吗啡溶液的用量=15×0.023=0.345ml。 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
实验一剂量对药物作用的影响 实验目的:观察不同剂量的戊巴比妥钠对小白鼠作用的差异。 实验方法:取三只小白鼠,编号1、2、3,称重并观察正常活动。然后 1号鼠腹腔注射(i.p)0.2%戊巴比妥钠溶液(0.1ml/10g) 2号鼠i.p0.4%戊巴比妥钠(0.1ml/10g) 3号鼠i.p0.8%戊巴比妥钠(0.lml/10g),给药后观察并比较小鼠活动情况, 翻正反射消失及恢复时间,以此计算药物作用维持时间 结果记录 号(g)(ng)|给药时向|翻正反射潜伏期翻正反射作用维持 鼠体重给药剂量 消失时间(分)恢复时间时间(分) 分析与讨论 思考题:1、决定药物作用潜伏期长、短的因素有哪些? 2、根据药代动力学方式分析,增加药物剂量能否成比例的延长作用时间? 实验二钡盐的溶解度与作用关系 实验目的:观察药物的理化性质对药物作用的影响。 实验方法:取体重相近(18-22g)的两只小鼠,先观察正常活动,然后一鼠用5%硫酸 钡溶液灌胃0.5m1,另一鼠用5%氯化钡灌胃0.5m1,分别置于小鼠笼中观察60min,有何反 应出现。 结果记录 鼠号药物给药量 PdfcreatedwithFineprintpdffactoryProtrialversionhttp://www.fineprint.com
实验一 剂量对药物作用的影响 实验目的：观察不同剂量的戊巴比妥钠对小白鼠作用的差异。 实验方法：取三只小白鼠，编号 1、2、3，称重并观察正常活动。然后 1 号鼠腹腔注射（i.p）0.2％戊巴比妥钠溶液(0.1m1/10g) 2 号鼠 i.p 0.4％戊巴比妥钠(0.1m1/10g) 3号鼠i.p 0.8％戊巴比妥钠(0.1m1/10g)，给药后观察并比较小鼠活动情况， 翻正反射消失及恢复时间，以此计算药物作用维持时间。 结果记录： 鼠 号 体 重 （g） 给药剂量 （mg） 给药时间 翻 正 反 射 消失时间 潜伏期 （分） 翻 正 反 射 恢复时间 作 用 维 持 时间（分） 分析与讨论： 思考题：1、决定药物作用潜伏期长、短的因素有哪些？ 2、根据药代动力学方式分析，增加药物剂量能否成比例的延长作用时间？ 实验二 钡盐的溶解度与作用关系 实验目的：观察药物的理化性质对药物作用的影响。 实验方法：取体重相近（18-22g）的两只小鼠，先观察正常活动，然后一鼠用 5%硫酸 钡溶液灌胃 0.5ml，另—鼠用 5%氯化钡灌胃 0.5m1，分别置于小鼠笼中观察 60min，有何反 应出现。 结果记录： 鼠号 药 物 给 药 量 结 果 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
分析与讨论 思考题:1、不溶于水的固态微粒,为什么不易被胃肠道吸收。 2、影响药物在胃肠道吸收的因素有哪些? 实验三不同给药途径对药物作用的影响 实验目的:观察不同给药途径对药物作用的影响。 实验方法:取体重相近的小白鼠二只,一鼠经口灌人20%硫酸镁溶液0.5ml,另一鼠皮 下注射等量硫酸镁溶液,分别置于笼中,观察有何反应出现。 结果记录 出现反应时 鼠号药物 给药量给药途径 结果 间及情况 分析与讨论 思考题 影响药物经过皮下或肌肉注射吸收的因素有哪些? PdfcreatedwithFineprintpdffactoryProtrialversionhttp://www.fineprint.com
分析与讨论 思考题：1、不溶于水的固态微粒，为什么不易被胃肠道吸收。 2、影响药物在胃肠道吸收的因素有哪些？ 实验三 不同给药途径对药物作用的影响 实验目的：观察不同给药途径对药物作用的影响。 实验方法：取体重相近的小白鼠二只，一鼠经口灌人 20%硫酸镁溶液 0.5m1，另一鼠皮 下注射等量硫酸镁溶液，分别置于笼中，观察有何反应出现。 结果记录： 鼠号 药 物 给药量 给药途径 出现反应时 间及情况 结 果 分析与讨论 思考题： 影响药物经过皮下或肌肉注射吸收的因素有哪些？ PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
实验四pA2的测定 实验目的:学习激动剂量效曲线的测定方法,拮抗剂对激动剂量效曲线的影响,以及竞 争性拮抗剂的pA值计算方法 实验方法: 实验装置及其连接 95%0 张力传感器 台氏平衡自 动记录仪 5%cO. 多媒体教学实 器官浴槽 验系统 标本制作 取体重2kg左右家兔,雌雄不拘,击昏后开胸剪取胸主动脉,立即置入通有95%02和5%CO2 混合气体的Kerb’s溶液中。仔细除去血管周围结缔组织,套在细棒上,剪成25×3cm的螺 旋条,两端分别结扎并留置一段线头。将标本放入盛有10 ml Kreb’s溶液的浴槽中(pH7.3 7.4,37℃通入混合气体1~2个气泡/秒)。一端固定于标本板小钩上,另一端与张力传感器 相连。负荷4g,平衡Ih,其间每15分钟换一次营养液。 给药:按以下顺序向浴槽内加入去甲肾上腺素(NA) 药液浓度 注药量 浴槽药物终浓度 (mo1/L) (m1) (mol/L) 0.01 02 3×10-9 10-8 3 10-5 0.02 3×10-8 10-7 10-4 0.02 3×10-7 0.07 10-6 10-3 0.07 10-5 10-2 0.02 3×10- 10-4 11 10-1 0.02 3×10-4 10-3 注:前次给药后如无反应或出现收缩达最大效应时给下一剂量。当给下一剂量后收缩反 PdfcreatedwithFineprintpdffactoryProtrialversionhttp://www.fineprint.com
实验四 pA2的测定 实验目的：学习激动剂量效曲线的测定方法，拮抗剂对激动剂量效曲线的影响，以及竞 争性拮抗剂的 pA2值计算方法。 实验方法： 实验装置及其连接： 标本制作： 取体重 2kg 左右家兔，雌雄不拘，击昏后开胸剪取胸主动脉，立即置入通有 95%O2和 5%CO2 混合气体的 Kerb’s 溶液中。仔细除去血管周围结缔组织，套在细棒上，剪成 25×3cm 的螺 旋条，两端分别结扎并留置一段线头。将标本放入盛有 10ml Kreb’s 溶液的浴槽中（pH7.3～ 7.4，37℃通入混合气体 1～2 个气泡/秒）。一端固定于标本板小钩上，另一端与张力传感器 相连。负荷 4g，平衡 1h，其间每 15 分钟换一次营养液。 给药：按以下顺序向浴槽内加入去甲肾上腺素（NA）。 药液浓度 （mol/L） 注药量 （ml） 浴槽药物终浓度 （mol/L） 1 2 2 3 10-6 10-5 0.01 0.02 0.07 0.02 10-9 3×10-9 10-8 3×10-8 4 0.07 10-7 5 10-4 0.02 3×10-7 6 0.07 10-6 7 10-3 0.02 3×10-6 8 0.07 10-5 9 10-2 0.02 3×10-5 10 0.07 10-4 11 10-1 0.02 3×10-4 12 0.07 10-3 注：前次给药后如无反应或出现收缩达最大效应时给下一剂量。当给下一剂量后收缩反 95%O2 5%CO2 恒 温 器 器官浴槽 多媒体教学实 验系统 张力传感器 台氏平衡自 动记录仪 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
应不再增加时,冲洗标本,直至回复到基线后加入a-受体阻断剂酚妥拉明( phentolamine Regitin),给药量为10-5mol/L0.03ml,即浴槽浓度3×10-8mol/1,15min后重复上述给 药步骤 绘制量效曲线 以对照曲线的最大反应为100%,分别求出给 phentolamine前后NA各剂量的反应百分 率。以 phentolamine克分子浓度的负对数为横座标,反应百分率为纵座标在坐标纸上绘出 量效曲线。 p2值计算 据公式: pA2=PAx+log(Ab/A-1) 式中:Pax:竞争性拮抗剂克分子浓度负对数。 Ab:竞争性拮抗剂存在时,激动剂引起50%反应的剂量(ED50) A:无拮抗剂时,激动剂引起50%反应所需剂量(ED50) 将各所得数据代入公式即得pA2值。 注意事项: (1)勿用力牵拉血管标本; (2)爱惜传感器,操作动作要轻 (3)加药应及时,准确。 思考题:竞争性拮抗剂与非竞争性拮抗剂对激动剂量效曲线的影响有何不同? PdfcreatedwithFineprintpdffactoryProtrialversionhttp://www.fineprint.com
应不再增加时，冲洗标本，直至回复到基线后加入α-受体阻断剂酚妥拉明（phentolamine， Regintin），给药量为 10-5mol/L 0.03ml，即浴槽浓度 3×10-8mol/l，15min 后重复上述给 药步骤。 绘制量效曲线： 以对照曲线的最大反应为 100%，分别求出给 phentolamine 前后 NA 各剂量的反应百分 率。以 phentolamine 克分子浓度的负对数为横座标，反应百分率为纵座标在坐标纸上绘出 量效曲线。 pA2值计算： 据公式： pA2=PAx＋log（Ab/A—1） 式中： Pax：竞争性拮抗剂克分子浓度负对数。 Ab：竞争性拮抗剂存在时，激动剂引起 50%反应的剂量（ED50’） A：无拮抗剂时，激动剂引起 50%反应所需剂量（ED50） 将各所得数据代入公式即得 pA2值。 注意事项： ⑴勿用力牵拉血管标本； ⑵爱惜传感器，操作动作要轻； ⑶加药应及时，准确。 思考题：竞争性拮抗剂与非竞争性拮抗剂对激动剂量效曲线的影响有何不同？ PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
实验五药物血浆半衰期及表观分布容积的测定 酚红的血药浓度测定及药动学参数的计算方法 实验目的:观察静脉注射酚红后,不同时间内血浆药物浓度的变化。掌握血浓测定方法, 血浆半衰期(tv)及表观分布容积(vd)的计算。 实验原理:酚红(PSP)为指示剂,在碱性环境中呈现紫红色。PSP静脉注射后,在体内不 代谢,其消除主要由肾脏近曲小管分泌.因此可通过比色测定不同给药时间血浆中PSP的光 密度值,定量计算血中PSP的浓度 实验动物:健康家兔一只,雌雄不拘,体重22.5kg 实验药品:1、2、4、8、l6umol·L-1酚红溶液,0.6%酚红溶液,稀释液,IN氢氧化钠 溶液,75%酒精,肝素钠1000u/ml,生理盐水 实验用品:分光光度计,离心机,兔台,兔固定绳,手术器械一套(十把),丝线,注 射器(5m1),针头(5-6号),抗凝试管,离心试管,动脉夹,擦镜纸,滤纸,定量加样器。 实验方法 1、麻醉并固定:取健康家兔一只,称重,3%戊巴比妥钠lml/kg耳缘静脉注射麻醉 仰卧位固定在兔台上。 2、手术:纵向切开颈部正中皮肤,分离颈下组织,找到气管,在气管一侧分离出颈总 动脉,从颈总动脉下穿两线待用。由耳缘静脉注射肝素钠lm/kg,结扎远心端,近心端用 动脉夹夹住,两端之间留2cm距离,用眼科剪在远心端朝近心端方向呈45度角剪小口,然 后朝向心方向插入塑料管,推进1~2cm结扎并固定,塑料管用止血钳夹住,松开动脉夹 3、取空白血:自动脉导管取血约lm,置于编号的干燥抗凝试管中,轻摇混匀。 4、给药及取血样:从耳缘静脉注射6ml/kg0.6%酚红溶液,给药后2、5、10、20和30 分钟分别取血约1m,置于编号的干燥抗凝试管中,轻摇混匀 5、离心和测定:各取定量血样于编号离心试管中,以3000转/分离心10分钟,分别取 血浆0.l皿l,加入清洁编号试管内,加稀释液各2,摇匀后静置5分钟,以给药前血样做 空白对照调零,于分光光度计560nm波长处进行比色测定,记录其光密度值。将给药后不同 时间的光密度输入计算器,计算出不同时间酚红的血浆浓度。 6、制作酚红溶液1、2、4、8、16umol·L'标准曲线(由老师率先绘制) 实验结果及分析 以浓度为横坐标,以光密度为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程。 以血浆药物浓度的对数值为纵坐标,时间为横坐标绘制时量曲线,一级消除动力学的时 量关系呈直线 该直线的方程式为10gC:=1gC-k/2.303·t 药物血浆半衰期T=0.693/k(单位:h或min) PdfcreatedwithFineprintpdffactoryProtrialversionhttp://www.fineprint.com
实验五 药物血浆半衰期及表观分布容积的测定 酚红的血药浓度测定及药动学参数的计算方法 实验目的：观察静脉注射酚红后，不同时间内血浆药物浓度的变化。掌握血浓测定方法， 血浆半衰期（t1/2）及表观分布容积（Vd）的计算。 实验原理:酚红(PSP)为指示剂,在碱性环境中呈现紫红色。PSP 静脉注射后，在体内不 代谢，其消除主要由肾脏近曲小管分泌.因此可通过比色测定不同给药时间血浆中 PSP 的光 密度值,定量计算血中 PSP 的浓度. 实验动物：健康家兔一只，雌雄不拘，体重 2~2.5kg 实验药品：1、2、4、8、16umol·L-1 酚红溶液，0.6%酚红溶液，稀释液，1N 氢氧化钠 溶液，75%酒精，肝素钠 1000u/ml，生理盐水， 实验用品：分光光度计，离心机，兔台，兔固定绳，手术器械一套（十把），丝线，注 射器（5ml），针头（5-6 号），抗凝试管，离心试管，动脉夹，擦镜纸，滤纸，定量加样器。 实验方法： 1、麻醉并固定：取健康家兔一只，称重， 3%戊巴比妥钠 1ml /kg 耳缘静脉注射麻醉， 仰卧位固定在兔台上。 2、手术：纵向切开颈部正中皮肤，分离颈下组织，找到气管，在气管一侧分离出颈总 动脉，从颈总动脉下穿两线待用。由耳缘静脉注射肝素钠 1ml /kg，结扎远心端，近心端用 动脉夹夹住，两端之间留 2cm 距离，用眼科剪在远心端朝近心端方向呈 45 度角剪小口，然 后朝向心方向插入塑料管，推进 1～2cm 结扎并固定，塑料管用止血钳夹住，松开动脉夹。 3、取空白血：自动脉导管取血约 1 ml，置于编号的干燥抗凝试管中，轻摇混匀。 4、给药及取血样：从耳缘静脉注射 6ml/kg 0.6%酚红溶液，给药后 2、5、10、20 和 30 分钟分别取血约 1ml，置于编号的干燥抗凝试管中，轻摇混匀。 5、离心和测定：各取定量血样于编号离心试管中，以 3000 转/分离心 10 分钟，分别取 血浆 0.1ml，加入清洁编号试管内，加稀释液各 2ml，摇匀后静置 5 分钟，以给药前血样做 空白对照调零，于分光光度计 560nm 波长处进行比色测定，记录其光密度值。将给药后不同 时间的光密度输入计算器，计算出不同时间酚红的血浆浓度。 6、制作酚红溶液 1、2、4、8、16umol·L -1标准曲线（由老师率先绘制） 实验结果及分析： 以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程。 以血浆药物浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标绘制时量曲线，一级消除动力学的时 量关系呈直线。 该直线的方程式为 logCt=lgCO-k/2.303·t 药物血浆半衰期 T1/2=0.693/k(单位：h 或 min) PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com