实验九双硫踪比色法测定镉的含量 一、实验目的 1.了解食品中微量元素检验的重要性： 2.掌握双硫腙比色法测定镉含量的原理及方法： 3.熟练掌握分光光度计的操作。 二、实验原理 在碱性条件下，镉离子与双硫腙生成红色络合物，可以用氯仿等有机溶剂提取比色。而加入酒石 酸钾钠溶液和控制H值可以隐蔽其他金属离子的干扰。 三、试剂与仪器 1.25%酒石酸钾溶液； 2.20%盐酸羟胺溶液； 3.2%酒石酸溶液（置于冰箱中保存）； 4.镉标准溶液：准确称取0.10g纯金属镉溶于25mL1:4盐酸溶液中，移入1000mL容量瓶中，用水稀 释到刻度，摇匀。此溶液每mL含有0.10mg镉，贮存在塑料瓶中，使用时稀释为每mL含有1ug的镉： 5.氢氧化钠一氰化钾（甲）液：称取400g优级纯氢氧化钠和10g氰化钾，溶于水中，稀释到 1000mL,贮于聚乙烯塑料瓶中，可稳定1-2个月： 6.氢氧化钠一氰化钾（乙）液：称取400g优级纯氢氧化钠和0.5g氰化钾，溶于水中，稀释到 1000mL,贮于聚乙烯塑料瓶中，可稳定1-2个月： (注：以上两种试剂剧毒，使用时应特别小心！) 7.0.01%双硫腙氯仿溶液：称取0.01g经提纯的双硫腙，溶于100L氯仿中，贮于棕色瓶中内，置于 冰箱中保存： 双硫腙的提纯方法：称取1.0g双硫腙，用200mL四氯化碳移入500mL分液漏斗中，加入1：100的氨水 溶液200mL,振摇数次，此时双硫腙进入氨水溶液中，而氧化物残留在四氯化碳层内。用1：100的氨 水溶液提取数次，合并氨水层，加入1：1盐酸中和并使其呈酸性，此时双硫腙沉淀析出，加入四氯化 碳20L抽提三次，收集抽提液于另一分液漏斗中，用水洗涤数次，然后将抽提液移入三角烧瓶中， 在水浴上蒸去四氯化碳后，置干燥器内干燥备用： 8透光率42±0.5%的双硫腙氯仿溶液：吸取适量的0.01%双硫腙氯仿溶液，用氯仿稀释，在分光光 度计上以氯仿为空白，用518nm波长校正溶液的透光率为42±0.5%，临用时配制。 9.氯仿： 10.分光光度计 四、操作步骤 1.样品处理：称取均匀样品10.0g于250mL凯氏烧瓶中，加入3粒玻璃珠，加10mL浓硫酸，摇匀，接 着添加4L过氧化氢，混摇片刻，使激烈反应停止后，小火加热，每当溶液即将转黑时，于冷却后加 入过氧化氢，直至消化溶液澄清无色为止。冷却后加l0mL水，摇动烧瓶，继续加热，煮沸5min。冷 却后移入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。或称取样品1.00g于50mL高型烧杯中，用少量水 润湿后，缓慢加热，滴加混合酸至3L左右以分解样品，必要时再滴加硝酸直至分解，使溶液澄清为 止，蒸干后冷却，加水溶解残渣即得样品溶液。同时作空白试验。 2.标准曲线的绘制：准确吸取mL相当于1μg镉的标准溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL,分别 移入125mL分液漏斗中，加水至25mL。加入至1mL酒石酸钾钠溶液、5mL氢氧化钠一氰化钾（甲） 液，1mL盐酸羟胺溶液（每加一种试剂时均需摇匀）。加0.01%双硫腙氯仿溶液15mL,振摇1min,此 步骤应迅速进行。将双硫腙放入另外已加有25L冷酒石酸溶液的分液漏斗中，用10mL氯仿洗涤第 个分液漏斗中溶液。氯仿液也并入第二个分液漏斗中，注意勿将水放入。将第二个分液漏斗振摇 2min,弃去双硫腙氯仿层，此时镉已进入酒石酸溶液中，再用5mL氯仿洗酒石酸溶液1次，弃去氯 仿。再于分液漏斗中加入0.25mL盐酸羟胺溶液、10mL透光率为42%的双硫腙氯仿溶液、5mL氢氧化 钠一氰化钾（乙）液，立即振摇1mi。然后将分液漏斗管颈内壁擦干，塞入少许脱脂棉，将双硫腙 氯仿层经棉花过滤，于分光光度计518m波长处测定光密度，绘制标准曲线。 3.样品分析：准确吸取样品溶液10mL,移入125mL分液漏斗中，加水至25mL,加入1mL酒石酸钾 钠，以下操作同标准曲线的绘制。根据测得样品溶液的光密度，从标准曲线查得相应的镉的含量。 五、计算 镉(mg/kg)=CW×1000 式中C一从标准曲线中查出相当于镉的标准量，g W一测定时所取样品溶液相当于样品的量，g
实验九 双硫腙比色法测定镉的含量 一、实验目的 1.了解食品中微量元素检验的重要性； 2.掌握双硫腙比色法测定镉含量的原理及方法； 3.熟练掌握分光光度计的操作。 二、实验原理 在碱性条件下，镉离子与双硫腙生成红色络合物，可以用氯仿等有机溶剂提取比色。而加入酒石 酸钾钠溶液和控制pH值可以隐蔽其他金属离子的干扰。 三、试剂与仪器 1.25%酒石酸钾溶液； 2.20%盐酸羟胺溶液； 3.2%酒石酸溶液（置于冰箱中保存）； 4.镉标准溶液：准确称取0.10g纯金属镉溶于25mL1:4盐酸溶液中，移入1000mL容量瓶中，用水稀 释到刻度，摇匀。此溶液每mL含有0.10mg镉，贮存在塑料瓶中，使用时稀释为每mL含有1µg的镉； 5.氢氧化钠－氰化钾（甲）液：称取400g优级纯氢氧化钠和10g氰化钾，溶于水中，稀释到 1000mL，贮于聚乙烯塑料瓶中，可稳定1-2个月； 6.氢氧化钠－氰化钾（乙）液：称取400g优级纯氢氧化钠和0.5g氰化钾，溶于水中，稀释到 1000mL，贮于聚乙烯塑料瓶中，可稳定1-2个月； （注：以上两种试剂剧毒，使用时应特别小心！） 7.0.01%双硫腙氯仿溶液：称取0.01g经提纯的双硫腙，溶于100 mL氯仿中，贮于棕色瓶中内，置于 冰箱中保存； 双硫腙的提纯方法：称取1.0g双硫腙，用200mL四氯化碳移入500mL分液漏斗中，加入1:100的氨水 溶液200mL，振摇数次，此时双硫腙进入氨水溶液中，而氧化物残留在四氯化碳层内。用1:100的氨 水溶液提取数次，合并氨水层，加入1:1盐酸中和并使其呈酸性，此时双硫腙沉淀析出，加入四氯化 碳20mL抽提三次，收集抽提液于另一分液漏斗中，用水洗涤数次，然后将抽提液移入三角烧瓶中， 在水浴上蒸去四氯化碳后，置干燥器内干燥备用； 8.透光率42±0.5%的双硫腙氯仿溶液：吸取适量的0.01%双硫腙氯仿溶液，用氯仿稀释，在分光光 度计上以氯仿为空白，用518nm波长校正溶液的透光率为42±0.5%，临用时配制。 9.氯仿； 10.分光光度计 四、操作步骤 1.样品处理：称取均匀样品10.0g于250mL凯氏烧瓶中，加入3粒玻璃珠，加10mL浓硫酸，摇匀，接 着添加4mL过氧化氢，混摇片刻，使激烈反应停止后，小火加热，每当溶液即将转黑时，于冷却后加 入过氧化氢，直至消化溶液澄清无色为止。冷却后加10mL水，摇动烧瓶，继续加热，煮沸5min。冷 却后移入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。或称取样品1.00g于50mL高型烧杯中，用少量水 润湿后，缓慢加热，滴加混合酸至3mL左右以分解样品，必要时再滴加硝酸直至分解，使溶液澄清为 止，蒸干后冷却，加水溶解残渣即得样品溶液。同时作空白试验。 2.标准曲线的绘制：准确吸取mL相当于1µg镉的标准溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，分别 移入125mL分液漏斗中，加水至25mL。加入至1mL酒石酸钾钠溶液、5mL氢氧化钠－氰化钾（甲） 液，1mL盐酸羟胺溶液（每加一种试剂时均需摇匀）。加0.01%双硫腙氯仿溶液15mL，振摇1min，此 步骤应迅速进行。将双硫腙放入另外已加有25mL冷酒石酸溶液的分液漏斗中，用10mL氯仿洗涤第一 个分液漏斗中溶液。氯仿液也并入第二个分液漏斗中，注意勿将水放入。将第二个分液漏斗振摇 2min，弃去双硫腙氯仿层，此时镉已进入酒石酸溶液中，再用5mL氯仿洗酒石酸溶液1次，弃去氯 仿。再于分液漏斗中加入0.25mL盐酸羟胺溶液、10mL透光率为42%的双硫腙氯仿溶液、5mL氢氧化 钠－氰化钾（乙）液，立即振摇1min。然后将分液漏斗管颈内壁擦干，塞入少许脱脂棉，将双硫腙 氯仿层经棉花过滤，于分光光度计518nm波长处测定光密度，绘制标准曲线。 3.样品分析：准确吸取样品溶液10mL，移入125mL分液漏斗中，加水至25mL，加入1mL酒石酸钾 钠，以下操作同标准曲线的绘制。根据测得样品溶液的光密度，从标准曲线查得相应的镉的含量。 五、计算 镉（mg/kg）＝C/W×1000 式中 C－从标准曲线中查出相当于镉的标准量，mg； W－测定时所取样品溶液相当于样品的量，g