《生物化学》课程教学资源：试题库（共十四章，含知识要点）.doc_大学文库

第一章蛋白质化学知识要点 (一)氨基酸的结构蛋白质是重要的生物大分子,其组成单位是氨基酸。组成蛋白质的氨基酸有20种,均为a-氨基酸。每个氨基酸的α-碳上连接一个羧基,一个氨基,一个氢原子和一个侧链R 基团。20种氨基酸结构的差别就在于它们的R基团结构的不同根据20种氨基酸侧链R基团的极性,可将其分为四大类:非极性R基氨基酸(8种) 不带电荷的极性R基氨基酸(7种);带负电荷的R基氨基酸(2种):带正电荷的R基氨基酸(3种) (二)氨基酸的性质氨基酸是两性电解质。由于氨基酸含有酸性的羧基和碱性的氨基,所以既是酸又是碱, 是两性电解质。有些氨基酸的侧链还含有可解离的基团,其带电状况取决于它们的pK值由于不同氨基酸所带的可解离基团不同,所以等电点不同。除甘氨酸外,其它都有不对称碳原子,所以具有D-型和L-型2种构型,具有旋光性天然蛋白质中存在的氨基酸都是L-型的。酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸具有紫外吸收特性在280nm处有最大吸收值,大多数蛋白质都具有这些氨基酸,所以蛋白质在280mm处也有特征吸收,这是紫外吸收法定量测定蛋白质的基础。氨基酸的a-羧基和a-氨基具有化学反应性,另外,许多氨基酸的侧链还含有羟基、氨基、羧基等可解离基团,也具有化学反应性。较重要的化学反应有:(1)茚三酮反应,除脯氨酸外,所有的α一氨基酸都能与茚三酮发生颜色反应,生成蓝紫色化合物,脯氨酸与茚三酮生成黄色化合物。(2) Sanger反应,a-NH2与2,4-二硝基氟苯作用产生相应的DNB-氨基酸。(3) Edman反应,α-NH2与苯异硫氰酸酯作用产生相应的氨基酸的苯氨基硫甲酰衍生物(PIT-氨基酸)。 Sanger反应和 Admen反应均可用于蛋白质多肽链N端氨基酸的测定氨基酸通过肽键相互连接而成的化合物称为肽,由2个氨基酸组成的肽称为二肽,由3 个氨基酸组成的肽称为三肽,少于10个氨基酸肽称为寡肽,由10个以上氨基酸组成的肽称为多肽 (三)蛋白质的结构蛋白质是具有特定构象的大分子,为研究方便,将蛋白质结构分为四个结构水平,包括级结构、二级结构、三级结构和四级结构。一般将二级结构、三级结构和四级结构称为」维构象或高级结构级结构指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序。肽键是蛋白质中氨基酸之间的主要连接方式,即由一个氨基酸的α-氨基和另一个氨基酸的α-之间脱去一分子水相互连接。肽键具有部分双键的性质,所以整个肽单位是一个刚性的平面结构。在多肽链的含有游离氨基的端称为肽链的氨基端或N端,而另一端含有一个游离羧基的一端称为肽链的羧基端或C端。蛋白质的二级结构是指多肽链骨架盘绕折叠所形成的有规律性的结构。最基本的二级结构类型有α-螺旋结构和β-折叠结构,此外还有β-转角和自由回转。右手α-螺旋结构是在纤维蛋白和球蛋白中发现的最常见的二级结构,每圈螺旋含有3.6个氨基酸残基,螺距为 0.54nm,螺旋中的每个肽键均参与氢键的形成以维持螺旋的稳定。β一折叠结构也是一种常见的二级结构,在此结构中,多肽链以较伸展的曲折形式存在,肽链(或肽段)的排列可以有平行和反平行两种方式。氨基酸之间的轴心距为0.35nm,相邻肽链之间借助氢键彼此连成片层结构。结构域是介于二级结构和三级结构之间的一种结构层次,是指蛋白质亚基结构中明显分开的紧密球状结构区域。超二级结构是指蛋白质分子中的多肽链在三维折叠中形成有规则的三级结构聚集体蛋白质的三级结构是整个多肽链的三维构象,它是在二级结构的基础上,多肽链进一步

1 第一章蛋白质化学知识要点（一）氨基酸的结构蛋白质是重要的生物大分子，其组成单位是氨基酸。组成蛋白质的氨基酸有 20 种，均为α-氨基酸。每个氨基酸的α-碳上连接一个羧基，一个氨基，一个氢原子和一个侧链 R 基团。20 种氨基酸结构的差别就在于它们的 R 基团结构的不同。根据 20 种氨基酸侧链 R 基团的极性，可将其分为四大类：非极性 R 基氨基酸（8 种）；不带电荷的极性 R 基氨基酸（7 种）；带负电荷的 R 基氨基酸（2 种）；带正电荷的 R 基氨基酸（3 种）。（二）氨基酸的性质氨基酸是两性电解质。由于氨基酸含有酸性的羧基和碱性的氨基，所以既是酸又是碱，是两性电解质。有些氨基酸的侧链还含有可解离的基团，其带电状况取决于它们的 pK 值。由于不同氨基酸所带的可解离基团不同，所以等电点不同。除甘氨酸外，其它都有不对称碳原子，所以具有 D-型和 L-型 2 种构型，具有旋光性，天然蛋白质中存在的氨基酸都是 L-型的。酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸具有紫外吸收特性，在 280nm 处有最大吸收值，大多数蛋白质都具有这些氨基酸，所以蛋白质在 280nm 处也有特征吸收，这是紫外吸收法定量测定蛋白质的基础。氨基酸的α-羧基和α-氨基具有化学反应性，另外，许多氨基酸的侧链还含有羟基、氨基、羧基等可解离基团，也具有化学反应性。较重要的化学反应有：（1）茚三酮反应，除脯氨酸外，所有的α-氨基酸都能与茚三酮发生颜色反应，生成蓝紫色化合物，脯氨酸与茚三酮生成黄色化合物。（2）Sanger 反应，α-NH2 与 2,4-二硝基氟苯作用产生相应的 DNB-氨基酸。（3）Edman 反应，α-NH2 与苯异硫氰酸酯作用产生相应的氨基酸的苯氨基硫甲酰衍生物（PIT-氨基酸）。Sanger 反应和 Edmen 反应均可用于蛋白质多肽链 N 端氨基酸的测定。氨基酸通过肽键相互连接而成的化合物称为肽，由 2 个氨基酸组成的肽称为二肽，由 3 个氨基酸组成的肽称为三肽，少于 10 个氨基酸肽称为寡肽，由 10 个以上氨基酸组成的肽称为多肽。（三）蛋白质的结构蛋白质是具有特定构象的大分子，为研究方便，将蛋白质结构分为四个结构水平，包括一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。一般将二级结构、三级结构和四级结构称为三维构象或高级结构。一级结构指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序。肽键是蛋白质中氨基酸之间的主要连接方式，即由一个氨基酸的α-氨基和另一个氨基酸的α-之间脱去一分子水相互连接。肽键具有部分双键的性质，所以整个肽单位是一个刚性的平面结构。在多肽链的含有游离氨基的一端称为肽链的氨基端或 N 端，而另一端含有一个游离羧基的一端称为肽链的羧基端或 C 端。蛋白质的二级结构是指多肽链骨架盘绕折叠所形成的有规律性的结构。最基本的二级结构类型有α-螺旋结构和β-折叠结构，此外还有β-转角和自由回转。右手α-螺旋结构是在纤维蛋白和球蛋白中发现的最常见的二级结构,每圈螺旋含有 3.6 个氨基酸残基，螺距为 0.54nm,螺旋中的每个肽键均参与氢键的形成以维持螺旋的稳定。β-折叠结构也是一种常见的二级结构，在此结构中，多肽链以较伸展的曲折形式存在，肽链（或肽段）的排列可以有平行和反平行两种方式。氨基酸之间的轴心距为 0.35nm,相邻肽链之间借助氢键彼此连成片层结构。结构域是介于二级结构和三级结构之间的一种结构层次，是指蛋白质亚基结构中明显分开的紧密球状结构区域。超二级结构是指蛋白质分子中的多肽链在三维折叠中形成有规则的三级结构聚集体。蛋白质的三级结构是整个多肽链的三维构象，它是在二级结构的基础上，多肽链进一步

折叠卷曲形成复杂的球状分子结构。具有三级结构的蛋白质一般都是球蛋白,这类蛋白质的多肽链在三维空间中沿多个方向进行盘绕折叠,形成十分紧密的近似球形的结构,分子内部的空间只能容纳少数水分子,几乎所有的极性R基都分布在分子外表面,形成亲水的分子外壳,而非极性的基团则被埋在分子内部,不与水接触。蛋白质分子中侧链R基团的相互作用对稳定球状蛋白质的三级结构起着重要作用蛋白质的四级结构指数条具有独立的三级结构的多肽链通过非共价键相互连接而成的聚合体结构。在具有四级结构的蛋白质中,每一条具有三级结构的皑链称为亚基或亚单位, 缺少一个亚基或亚基单独存在都不具有活性。四级结构涉及亚基在整个分子中的空间排布以及亚基之间的相互关系维持蛋白质空间结构的作用力主要是氢键、离子键、疏水作用力和范德华力等非共价键, 又称次级键。此外,在某些蛋白质中还有二硫键,二硫键在维持蛋白质构象方面也起着重要作用蛋白质的空间结构取决于它的一级结构,多肽离岸主链上的氨基酸排列顺序包含了形成复杂的三维结构(即正确的空间结构)所需要的全部信息。 (四)蛋白质结构与功能的关系不同的蛋白质,由于结构不同而具有不同的生物学功能。蛋白质的生物学功能是蛋白质分子的天然构象所具有的性质,功能与结构密切相关。 1.一级结构与功能的关系蛋白质的一级结构与蛋白质功能有相适应性和统一性,可从以下几个方面说明 1)一级结构的变异与分子病蛋白质中的氨基酸序列与生物功能密切相关,一级结构的变化往往导致蛋白质生物功能的变化。如镰刀型细胞贫血症,其病因是血红蛋白基因中的一个核苷酸的突变导致该蛋白分子中β-链第6位谷氨酸被缬氨酸取代。这个一级结构上的细微差别使患者的血红蛋白分子容易发生凝聚,导致红细胞变成镰刀状,容易破裂引起贫血,即血红蛋白的功能发生了变化。 (2)一级结构与生物进化研究发现,同源蛋白质中有许多位置的氨基酸是相同的,而其它氨基酸差异较大。如比较不同生物的细胞色素C的一级结构,发现与人类亲缘关系接近,其氨基酸组成的差异越小,亲缘关系越远差异越大 (3)蛋白质的激活作用在生物体内,有些蛋白质常以前体的形式合成,只有按一定方式裂解除去部分肽链之后才具有生物活性,如酶原的激活 2.蛋白质空间结构与功能的关系蛋白质的空间结构与功能之间有密切相关性,其特定的空间结构是行使生物功能的基础。以下两方面均可说明这种相关性。 (1).核糖核酸酶的变性与复性及其功能的丧失与恢复核糖核酸酶是由124个氨基酸组成的一条多肽链,含有四对二硫键,空间构象为球状分子。将天然核糖核酸酶在8mol/L脲中用β-巯基乙醇处理,则分子内的四对二硫键断裂,分子变成一条松散的肽链,此时酶活性完全丧失。但用透析法除去β-巯基乙醇和脲后,此酶经氧化又自发地折叠成原有的天然构象,同时酶活性又恢复。 (2)血红蛋白的变构现象血红蛋白是一个四聚体蛋白质,具有氧合功能,可在血液中运输氧。研究发现,脱氧血红蛋白与氧的亲和力很低,不易与氧结合。一旦血红蛋白分子中的一个亚基与O2结合,就会引起该亚基构象发生改变,并引起其它三个亚基的构象相继发生变化,使它们易于和氧结合,说明变化后的构象最适合与氧结合。从以上例子可以看出,只有当蛋白质以特定的适当空间构象存在时才具有生物活性 (五)蛋白质的重要性质蛋白质是两性电解质,它的酸碱性质取决于肽链上的可解离的R基团。不同蛋白质所含有的氨基酸的种类、数目不同,所以具有不同的等电点。当蛋白质所处环境的pH大于pl 时,蛋白质分子带负电荷,pH小于pl时,蛋白质带正电荷,pH等于p时,蛋白质所带净电荷为零,此时溶解度最小。蛋白质分子表面带有许多亲水基团,使蛋白质成为亲水的胶体溶液。蛋白质颗粒周围的

2 折叠卷曲形成复杂的球状分子结构。具有三级结构的蛋白质一般都是球蛋白，这类蛋白质的多肽链在三维空间中沿多个方向进行盘绕折叠，形成十分紧密的近似球形的结构，分子内部的空间只能容纳少数水分子，几乎所有的极性 R 基都分布在分子外表面，形成亲水的分子外壳，而非极性的基团则被埋在分子内部，不与水接触。蛋白质分子中侧链 R 基团的相互作用对稳定球状蛋白质的三级结构起着重要作用。蛋白质的四级结构指数条具有独立的三级结构的多肽链通过非共价键相互连接而成的聚合体结构。在具有四级结构的蛋白质中，每一条具有三级结构的皑链称为亚基或亚单位，缺少一个亚基或亚基单独存在都不具有活性。四级结构涉及亚基在整个分子中的空间排布以及亚基之间的相互关系。维持蛋白质空间结构的作用力主要是氢键、离子键、疏水作用力和范德华力等非共价键，又称次级键。此外，在某些蛋白质中还有二硫键，二硫键在维持蛋白质构象方面也起着重要作用。蛋白质的空间结构取决于它的一级结构，多肽离岸主链上的氨基酸排列顺序包含了形成复杂的三维结构（即正确的空间结构）所需要的全部信息。（四）蛋白质结构与功能的关系不同的蛋白质，由于结构不同而具有不同的生物学功能。蛋白质的生物学功能是蛋白质分子的天然构象所具有的性质，功能与结构密切相关。 1．一级结构与功能的关系蛋白质的一级结构与蛋白质功能有相适应性和统一性，可从以下几个方面说明：（1）一级结构的变异与分子病蛋白质中的氨基酸序列与生物功能密切相关，一级结构的变化往往导致蛋白质生物功能的变化。如镰刀型细胞贫血症，其病因是血红蛋白基因中的一个核苷酸的突变导致该蛋白分子中β-链第 6 位谷氨酸被缬氨酸取代。这个一级结构上的细微差别使患者的血红蛋白分子容易发生凝聚，导致红细胞变成镰刀状，容易破裂引起贫血，即血红蛋白的功能发生了变化。（2）一级结构与生物进化研究发现，同源蛋白质中有许多位置的氨基酸是相同的，而其它氨基酸差异较大。如比较不同生物的细胞色素 C 的一级结构，发现与人类亲缘关系接近，其氨基酸组成的差异越小，亲缘关系越远差异越大。（3）蛋白质的激活作用在生物体内，有些蛋白质常以前体的形式合成，只有按一定方式裂解除去部分肽链之后才具有生物活性，如酶原的激活。 2．蛋白质空间结构与功能的关系蛋白质的空间结构与功能之间有密切相关性，其特定的空间结构是行使生物功能的基础。以下两方面均可说明这种相关性。（1）.核糖核酸酶的变性与复性及其功能的丧失与恢复核糖核酸酶是由 124 个氨基酸组成的一条多肽链，含有四对二硫键，空间构象为球状分子。将天然核糖核酸酶在 8mol/L 脲中用β-巯基乙醇处理，则分子内的四对二硫键断裂，分子变成一条松散的肽链，此时酶活性完全丧失。但用透析法除去β-巯基乙醇和脲后，此酶经氧化又自发地折叠成原有的天然构象，同时酶活性又恢复。（2）血红蛋白的变构现象血红蛋白是一个四聚体蛋白质，具有氧合功能，可在血液中运输氧。研究发现，脱氧血红蛋白与氧的亲和力很低，不易与氧结合。一旦血红蛋白分子中的一个亚基与 O2 结合，就会引起该亚基构象发生改变，并引起其它三个亚基的构象相继发生变化，使它们易于和氧结合，说明变化后的构象最适合与氧结合。从以上例子可以看出，只有当蛋白质以特定的适当空间构象存在时才具有生物活性。（五）蛋白质的重要性质蛋白质是两性电解质，它的酸碱性质取决于肽链上的可解离的 R 基团。不同蛋白质所含有的氨基酸的种类、数目不同，所以具有不同的等电点。当蛋白质所处环境的 pH 大于 pI 时，蛋白质分子带负电荷，pH 小于 pI 时，蛋白质带正电荷，pH 等于 pI 时，蛋白质所带净电荷为零，此时溶解度最小。蛋白质分子表面带有许多亲水基团，使蛋白质成为亲水的胶体溶液。蛋白质颗粒周围的

水化膜(水化层)以及非等电状态时蛋白质颗粒所带的同性电荷的互相排斥是使蛋白质胶体系统稳定的主要因素。当这些稳定因素被破坏时,蛋白质会产生沉淀。高浓度中性盐可使蛋白质分子脱水并中和其所带电荷,从而降低蛋白质的溶解度并沉淀析出,即盐析。但这种作用并不引起蛋白质的变性。这个性质可用于蛋白质的分离蛋白质受到某些物理或化学因素作用时,引起生物活性的丧失,溶解度的降低以及其它性质的改变,这种现象称为蛋白质的变性作用。变性作用的实质是由于维持蛋白质高级结构的次级键遭到破坏而造成天然构象的解体,但未涉及共价键的断裂。有些变性是可逆的,有些变性是不可逆的。当变性条件不剧烈时,变性是可逆的,除去变性因素后,变性蛋白又可从新回复到原有的天然构象,恢复或部分恢复其原有的生物活性,这种现象称为蛋白质的复性 (六)测定蛋白质分子量的方法 1.凝胶过滤法凝胶过滤法分离蛋白质的原理是根据蛋白质分子量的大小。由于不同排阻范围的葡聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围,在此范围内,分子量的对数和洗脱体积之间成线性关系。因此,用几种已知分子量的蛋白质为标准,进行凝胶层析,以每种蛋白质的洗脱体积对它们的分子量的对数作图,绘制出标准洗脱曲线。未知蛋白质在同样的条件下进行凝胶层析,根据其所用的洗脱体积,从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应的分子量 2.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法蛋白质在普通聚丙烯酰胺凝胶中的电泳速度取决于蛋白质分子的大小、分子形状和所带电荷的多少。SDS(十二烷基磺酸钠)是一种去污剂,可使蛋白质变性并解离成亚基。当蛋白质样品中加入SDS后,SDS与蛋白质分子结合,使蛋白质分子带上大量的强负电荷,并且使蛋白质分子的形状都变成短棒状,从而消除了蛋白质分子之间原有的带电荷量和分子形状的差异。这样电泳的速度只取决于蛋白质分子量的大小,蛋白质分子在电泳中的相对迁移率和分子质量的对数成直线关系。以标准蛋白质分子质量的对数和其相对迁移率作图,得到标准曲线,根据所测样品的相对迁移率,从标准曲线上便可查出其分子质量。 3.沉降法(超速离心法) 沉降系数(S)是指单位离心场强度溶质的沉降速度。S也常用于近似地描述生物大分子的大小。蛋白质溶液经高速离心分离时,由于比重关系,蛋白质分子趋于下沉,沉降速度与蛋白质颗粒大小成正比,应用光学方法观察离心过程中蛋白质颗粒的沉降行为,可判断出蛋白质的沉降速度。根据沉降速度可求出沉降系数,将S带入公式,即可计算出蛋白质的分子质量。填空题 1氨基酸的结构通式为 2组成蛋白质分子的碱性氨基酸有。酸性氨基酸有和 3在下列空格中填入合适的氨基酸名称。(1) 是带芳香族侧链的极性氨基酸。(2) 和是带芳香族侧链的非极性氨基酸。 (3) 是含硫的极性氨基酸。(4) 或是相对分子质量小且不含硫的氨基酸,在一个肽链折叠的蛋白质中它能形成内部氢键。(5)在一些酶的活性中心中起作用并含羟基的极性较小的氨基酸是 4 Henderson- Hasselbalch方程为 5氨基酸的等电点(p是指 6氨基酸在等电点时,主要以离子形式存在,在pH>pl的溶液中大部分以离子形式存在,在pH-pl的溶液中,大部分以离子形式存在 7在生理条件下(pH70左右),蛋白质分子中的侧链和

3 水化膜（水化层）以及非等电状态时蛋白质颗粒所带的同性电荷的互相排斥是使蛋白质胶体系统稳定的主要因素。当这些稳定因素被破坏时，蛋白质会产生沉淀。高浓度中性盐可使蛋白质分子脱水并中和其所带电荷，从而降低蛋白质的溶解度并沉淀析出，即盐析。但这种作用并不引起蛋白质的变性。这个性质可用于蛋白质的分离。蛋白质受到某些物理或化学因素作用时，引起生物活性的丧失，溶解度的降低以及其它性质的改变，这种现象称为蛋白质的变性作用。变性作用的实质是由于维持蛋白质高级结构的次级键遭到破坏而造成天然构象的解体，但未涉及共价键的断裂。有些变性是可逆的，有些变性是不可逆的。当变性条件不剧烈时，变性是可逆的，除去变性因素后，变性蛋白又可从新回复到原有的天然构象，恢复或部分恢复其原有的生物活性，这种现象称为蛋白质的复性。（六）测定蛋白质分子量的方法 1．凝胶过滤法凝胶过滤法分离蛋白质的原理是根据蛋白质分子量的大小。由于不同排阻范围的葡聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围，在此范围内，分子量的对数和洗脱体积之间成线性关系。因此，用几种已知分子量的蛋白质为标准，进行凝胶层析，以每种蛋白质的洗脱体积对它们的分子量的对数作图，绘制出标准洗脱曲线。未知蛋白质在同样的条件下进行凝胶层析，根据其所用的洗脱体积，从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应的分子量。 2．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法蛋白质在普通聚丙烯酰胺凝胶中的电泳速度取决于蛋白质分子的大小、分子形状和所带电荷的多少。SDS（十二烷基磺酸钠）是一种去污剂，可使蛋白质变性并解离成亚基。当蛋白质样品中加入 SDS 后，SDS 与蛋白质分子结合，使蛋白质分子带上大量的强负电荷，并且使蛋白质分子的形状都变成短棒状，从而消除了蛋白质分子之间原有的带电荷量和分子形状的差异。这样电泳的速度只取决于蛋白质分子量的大小，蛋白质分子在电泳中的相对迁移率和分子质量的对数成直线关系。以标准蛋白质分子质量的对数和其相对迁移率作图，得到标准曲线，根据所测样品的相对迁移率，从标准曲线上便可查出其分子质量。 3．沉降法（超速离心法）沉降系数（S）是指单位离心场强度溶质的沉降速度。S 也常用于近似地描述生物大分子的大小。蛋白质溶液经高速离心分离时，由于比重关系，蛋白质分子趋于下沉，沉降速度与蛋白质颗粒大小成正比，应用光学方法观察离心过程中蛋白质颗粒的沉降行为，可判断出蛋白质的沉降速度。根据沉降速度可求出沉降系数，将 S 带入公式，即可计算出蛋白质的分子质量。一：填空题 1.氨基酸的结构通式为________________。 2.组成蛋白质分子的碱性氨基酸有________________、________________和 ________________。酸性氨基酸有________________和________________。 3.在下列空格中填入合适的氨基酸名称。(1)________________是带芳香族侧链的极性氨基酸。(2)________________和________________是带芳香族侧链的非极性氨基酸。 (3)________________是含硫的极性氨基酸。(4)________________或 ________________是相对分子质量小且不含硫的氨基酸，在一个肽链折叠的蛋白质中它能形成内部氢键。(5)在一些酶的活性中心中起作用并含羟基的极性较小的氨基酸是 ________________。 4.Henderson-Hasselbalch 方程为________________。 5.氨基酸的等电点(pI)是指________________。 6.氨基酸在等电点时，主要以________________离子形式存在，在 pH>pI 的溶液中，大部分以________________离子形式存在，在 pH<pI 的溶液中，大部分以________________ 离子形式存在。 7.在生理条件下(pH7.0 左右)，蛋白质分子中的________________侧链和

侧链几乎完全带正电荷,但是侧链则带部分正电荷 8脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生色的物质,而其它氨基酸与茚三酮反应产生色的物质。 9范斯莱克( VanSlyke)法测定氨基氮主要利用用生成 10.实验室常用的甲醛滴定是利用氨基酸的氨基与中性甲醛反应,然后用碱(NaOH) 来滴定上放出的 11通常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量,这是因为蛋白质分子中的和三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力 12寡肽通常是指由个到个氨基酸组成的肽。 13.肽链的形式有和种, 其中以最常见 14在一些天然肽中含有等特殊结构。这些结构在蛋白质中是不存在的。很可能这些结构上的变化可使这些肽免受蛋白水解酶的作用 15.1953年 _第一次用化学方法合成了具有生物活性的多肽-催产素, 因而获得诺贝尔奖。 16我国于年由和等单位在世界上首次合成了具有生物活性的蛋白质-牛胰岛素。 17.人工合肽时常用的氨基保护基有 18.人工合肽时常用的活化羧基的方法有 (1) 保护羧基的方法有 (1) 19.人工合肽时常用的缩合剂有 20.1962年提出了固相合肽的方法,因而获得1984年诺贝尔化学奖 21近年来的研究指出,肽也有构象。如脑啡肽是一个五肽,它有构象。但肽的构象易变,稳定性远不如蛋白质。 22在糖蛋白中,糖可与蛋白质的或残基以O一糖苷键相连,或与残基以N-糖苷键相连用酶酶裂解蛋白质分子时,它们的专一性不如胰蛋白酶和溴化氰强 24一般来说,用嗜热菌蛋白酶水解蛋白质所得到的片段,要比用胰蛋白酶所得的片段 25常用的拆开蛋白质分子中二硫键的方法有(1 法,常用的试剂为法,常用的试剂为或 26蛋白质之所以出现各种内容丰富的构象是因为键和键能有不同程度的转动。 27在蛋白质分子中相邻氨基酸残基的β-碳原子如具有侧链会使α-螺旋不稳定。因此当和三种氨基酸相邻时,会破坏α 螺旋

4 ________________侧链几乎完全带正电荷，但是________________侧链则带部分正电荷。 8.脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生________________色的物质，而其它氨基酸与茚三酮反应产生________________色的物质。 9.范斯莱克(VanSlyke)法测定氨基氮主要利用________________与________________作用生成________________。 10.实验室常用的甲醛滴定是利用氨基酸的氨基与中性甲醛反应，然后用碱(NaOH) 来滴定________________上放出的________________。 11.通常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量，这是因为蛋白质分子中的 ________________、________________和________________三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。 12.寡肽通常是指由________________个到________________个氨基酸组成的肽。 13.肽链的形式有________________、________________、和________________三种，其中以________________最常见。 14.在一些天然肽中含有________________、________________、和________________ 等特殊结构。这些结构在蛋白质中是不存在的。很可能这些结构上的变化可使这些肽免受蛋白水解酶的作用。 15.1953 年________________第一次用化学方法合成了具有生物活性的多肽--催产素，因而获得诺贝尔奖。 16.我国于________________年由________________、________________和 ________________等单位在世界上首次合成了具有生物活性的蛋白质--牛胰岛素。 17.人工合肽时常用的氨基保护基有 (1)________________(2)________________(3)________________(4)________________。 18.人工合肽时常用的活化羧基的方法有 (1)________________(2)________________(3)________________。保护羧基的方法有 (1)________________ (2)________________。 19.人工合肽时常用的缩合剂有________________。 20.1962 年________________提出了固相合肽的方法，因而获得 1984 年诺贝尔化学奖。 21.近年来的研究指出，肽也有构象。如脑啡肽是一个五肽，它有________________构象。但肽的构象易变，稳定性远不如蛋白质。 22.在糖蛋白中，糖可与蛋白质的________________、________________、 ________________或________________残基以 O－糖苷键相连，或与________________残基以 N-糖苷键相连。 23.用________________酶、________________酶、________________酶裂解蛋白质分子时，它们的专一性不如胰蛋白酶和溴化氰强。 24.一般来说，用嗜热菌蛋白酶水解蛋白质所得到的片段，要比用胰蛋白酶所得的片段 ________________。 25.常用的拆开蛋白质分子中二硫键的方法有(1)________________法，常用的试剂为 ________________。(2)________________法，常用的试剂为________________或 ________________。 26.蛋白质之所以出现各种内容丰富的构象是因为________________键和 ________________键能有不同程度的转动。 27.在蛋白质分子中相邻氨基酸残基的β-碳原子如具有侧链会使α-螺旋不稳定。因此当 ________________、________________和________________三种氨基酸相邻时，会破坏α- 螺旋

28在α-螺旋中C=O和N-H基之间形成的氢键最稳定,因为这三个原子以 29 Pauling等人提出的蛋白质α-螺旋模型,每圈螺旋包含个氨基酸残基,高度为每个氨基酸残基沿轴上升 ,并沿轴旋 30胶原蛋白是由股肽链组成的超螺旋结构,并含有稀有的与残基 31.蛋白质的最低自由能构象,常常通过残基之间形成的共价键而稳 32当蛋白质的非极性侧链避开水相时,疏水作用导致自由能 33当疏水侧链折叠到蛋白质分子内部时,环境中水的熵 34.一般来说,球状蛋白质的性氨基酸侧链位于分子内部, 性氨基酸侧链位于分子表面 35两条相当伸展的肽链(或同一条肽链的两个伸展的片段)之间形成氢键的结构单元称为 36维持蛋白质构象的化学键有和 37最早提出蛋白质变性理论的是 38血红蛋白(Hb)与氧结合的过程呈现效应,是通过Hb的现象实现的。 39当溶液中盐离子强度低时,可增加蛋白质的溶解度,这种现象称当溶液中盐离子强度高时,可使蛋白质沉淀,这种现象称 40DEAE纤维素是一种交换剂,CM纤维素是一种交换剂。 41.一个带负电荷的蛋白质可牢固地结合到阴离子交换剂上,因此需要一种比原来缓冲液和离子强度的缓冲液,才能将此蛋白质洗脱下来。 42胰岛素原转变为胰岛素的过程是在 (细胞器)进行。分泌颗粒中的胰岛素是通过离子与氨酸残基侧链上的氮原子配位,形成聚体。 43测定蛋白质浓度的方法主要有和 44肌球蛋白本身具有酶的活性,所以当AP释放能量时,就引起肌肉收缩 45酶蛋白的荧光主要来自氨酸氨酸。 46.凝集素能专一地识别细胞表面的并与之结合,从而使细胞与细胞相互凝集 47蛋白质的生理价值可用下式表示 48 R Yalow的主要贡献是建立了 49.抗体就是球蛋白用试剂可区分丙氨酸和色氨酸 51利用蛋白质不能通过半透膜的特性,使它和其他小分子物质分开的方法有和 52利用分配层析的原理进行氨基酸分析,常用的方法有和

5 28.在α-螺旋中 C＝O 和 N-H 基之间形成的氢键最稳定，因为这三个原子以 ________________排列。 29.Pauling 等人提出的蛋白质α-螺旋模型，每圈螺旋包含________________个氨基酸残基，高度为________________。每个氨基酸残基沿轴上升________________，并沿轴旋转________________度。 30.胶原蛋白是由________________股肽链组成的超螺旋结构，并含有稀有的 ________________与________________残基。 31.蛋白质的最低自由能构象，常常通过________________残基之间形成的共价键而稳定。 32.当蛋白质的非极性侧链避开水相时，疏水作用导致自由能________________。 33.当疏水侧链折叠到蛋白质分子内部时，环境中水的熵________________。 34.一般来说，球状蛋白质的________________性氨基酸侧链位于分子内部， ________________性氨基酸侧链位于分子表面。 35.两条相当伸展的肽链(或同一条肽链的两个伸展的片段)之间形成氢键的结构单元称为________________。 36.维持蛋白质构象的化学键有________________、________________、 ________________、________________、________________和________________。 37.最早提出蛋白质变性理论的是________________。 38.血红蛋白(Hb)与氧结合的过程呈现________________效应，是通过 Hb 的 ________________现象实现的。 39.当溶液中盐离子强度低时，可增加蛋白质的溶解度，这种现象称________________。当溶液中盐离子强度高时，可使蛋白质沉淀，这种现象称________________。 40.DEAE-纤维素是一种________________交换剂，CM-纤维素是一种 ________________交换剂。 41.一个带负电荷的蛋白质可牢固地结合到阴离子交换剂上，因此需要一种比原来缓冲液 pH________________和离子强度________________的缓冲液，才能将此蛋白质洗脱下来。 42.胰岛素原转变为胰岛素的过程是在________________(细胞器)进行。分泌颗粒中的胰岛素是通过________________离子与________________氨酸残基侧链上的氮原子配位，形成 ________________聚体。 43.测定蛋白质浓度的方法主要有________________、________________、 ________________和________________。 44.肌球蛋白本身具有________________酶的活性，所以当 ATP 释放能量时，就引起肌肉收缩。 45.酶蛋白的荧光主要来自________________氨酸与________________氨酸。 46.凝集素能专一地识别细胞表面的________________并与之结合，从而使细胞与细胞相互凝集。 47.蛋白质的生理价值可用下式表示：________________×100。 48.R.YaloW 的主要贡献是建立了________________。 49.抗体就是________________球蛋白。 50.用________________试剂可区分丙氨酸和色氨酸。 51.利用蛋白质不能通过半透膜的特性，使它和其他小分子物质分开的方法有 ________________和________________。 52.利用分配层析的原理进行氨基酸分析，常用的方法有________________、 ________________、________________和________________等

53实验室中常用的测定相对分子质量的方法有等 54羧肽酶B专一地从蛋白质的C端切下氨基酸。 55糖蛋白的糖基大多结合在蛋白质的残基残基残基上不是a-氨基酸,它经常改变肽链折叠的方式。 57维持蛋白质构象的次级键主要有和 58羧肽酶A不能水解C端是残基、 _残基和残基的肽键 59常用的肽链N端分析的方法有法、法、法和法。C端分析的方法有法和 60.多聚L谷氨酸的比旋光度随pH改变是因为 ,而L谷氨酸的比旋光度随pH改变则是由于 61胰岛素是胰岛β-细胞分泌的,它是由前胰岛素原经专一性蛋白水解,失去N端的成为再经类胰蛋白酶和类羧肽酶的作用失去肽,形成具有生物活性的胰岛素。 62影响血红蛋白与氧结合的因素有和等 63蛋白质的超二级结构是指 ,其基本组合形式为 64蛋白质的二级结构有和等几种基本类型 65凝集素是一类能与相互作用的蛋白质。 66许多钙结合蛋白都存在有图象,即它们的钙结合位点都由一个的结构单位构成 67确定蛋白质中二硫键的位置,一般先采用然后用技术分离水解后的混合肽段。二:是非题 1.[]天然氨基酸都具有一个不对称a-碳原子 2[]亮氨酸的疏水性比丙氨酸强 3.[]蛋白质分子中所有的氨基酸(除甘氨酸外)都是左旋的 4[]自然界的蛋白质和多肽类物质均由L型氨基酸组成。 5[]只有在很高或很低pH时,氨基酸才主要以非离子化形式存在 6[]当溶液的pH大于某一可解离基团的pKa值时,该基团有一半以上被解离 7[]一个化合物如能和茚三酮反应生成紫色,说明这化合物是氨基酸、肽或蛋白质 8[]一个蛋白质样品经酸水解后,能用氨基酸自动分析仪准确测定它的所有氨基酸 9[]用纸电泳法分离氨基酸主要是根据氨基酸的极性不同 10.[]组氨酸是人体的一种半必需氨基酸。 11]CNBr能裂解Gly- Met-Pro三肽 12·[]用化学修饰法能使一个肽只在精氨酸和半胱氨酸残基处被胰蛋白酶水解

6 53.实验室中常用的测定相对分子质量的方法有________________、________________ 和________________等。 54.羧肽酶 B 专一地从蛋白质的 C 端切下________________氨基酸。 55.糖蛋白的糖基大多结合在蛋白质的________________残基、________________残基与________________残基上。 56.________________不是α-氨基酸，它经常改变肽链折叠的方式。 57.维持蛋白质构象的次级键主要有________________、________________、 ________________和________________。 58.羧肽酶 A 不能水解 C 端是________________残基、________________残基和 ________________残基的肽键。 59.常用的肽链 N 端分析的方法有________________法、________________法、 ________________法和________________法。C 端分析的方法有________________法和 ________________法等。 60.多聚 L-谷氨酸的比旋光度随 pH 改变是因为________________，而 L-谷氨酸的比旋光度随 pH 改变则是由于________________。 61.胰岛素是胰岛β-细胞分泌的，它是由前胰岛素原经专一性蛋白水解，失去 N 端的 ________________成为________________。再经类胰蛋白酶和类羧肽酶的作用失去 ________________肽，形成具有生物活性的胰岛素。 62.影响血红蛋白与氧结合的因素有________________、________________、 ________________和________________等。 63.蛋白质的超二级结构是指________________，其基本组合形式为________________、 ________________、________________、________________、________________和 ________________等。 64.蛋白质的二级结构有________________、________________、________________、 ________________和________________等几种基本类型。 65.凝集素是一类能与________________相互作用的蛋白质。 66.许多钙结合蛋白都存在有________________图象，即它们的钙结合位点都由一个 ________________的结构单位构成。 67.确定蛋白质中二硫键的位置，一般先采用________________，然后用 ________________技术分离水解后的混合肽段。二：是非题 1.[ ]天然氨基酸都具有一个不对称α-碳原子。 2.[ ]亮氨酸的疏水性比丙氨酸强。 3.[ ]蛋白质分子中所有的氨基酸(除甘氨酸外)都是左旋的。 4.[ ]自然界的蛋白质和多肽类物质均由 L-型氨基酸组成。 5.[ ]只有在很高或很低 pH 时，氨基酸才主要以非离子化形式存在。 6.[ ]当溶液的 pH 大于某一可解离基团的 pKa 值时，该基团有一半以上被解离。 7.[ ]一个化合物如能和茚三酮反应生成紫色，说明这化合物是氨基酸、肽或蛋白质。 8.[ ]一个蛋白质样品经酸水解后，能用氨基酸自动分析仪准确测定它的所有氨基酸。 9.[ ]用纸电泳法分离氨基酸主要是根据氨基酸的极性不同。 10.[ ]组氨酸是人体的一种半必需氨基酸。 11.[ ]CNBr 能裂解 Gly-Met-Pro 三肽。 12.[ ]用化学修饰法能使一个肽只在精氨酸和半胱氨酸残基处被胰蛋白酶水解

13.[Jys- LyS-Lys三肽的pl必定大于个别Lys的pKa值。 14[]从理论上说,可用 Edman降解法测定任何非封闭多肽的全部氨基酸顺序, 15.[]从某些微生物中分离得到的多肽抗菌素往往为环状肽链,并含有D-型氨基酸 6.[]双缩脲反应是肽和蛋白质特有的反应,所以二肽也有双缩脲反应。 17.[]热力学上最稳定的蛋白质构象自由能最低。 l8.[]测定焦谷-组-腩酰胺三肽的游离氨基与羧基时呈阴性 19.[]可用8moL尿素拆开蛋白质分子中的二硫键。 20[]如果多肽链C-末端的第二个氨基酸不是脯氨酸,则羧肽酶A或B中至少有一种能切下C-末端氨基酸。 21![]在一次实验中,蛋白质顺序仪可测定肽链长度为200个氨基酸残基的氨基酸顺序。 22[]脯氨酸不能参与α-螺旋,它使α-螺旋弯曲(bend,在肌红蛋白和血红蛋白的多肽链中,每一个弯曲处并不一定有脯氨酸,但是每个脯氨酸却产生一个弯曲 23[]水溶液中蛋白质分子表面的氢原子相互形成氢键。 24[]胰岛素的生物合成途径是先分别合成A、B两条链,然后通过S-S键相连 25[]维持蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键。 26[]疏水蛋白质的折叠伴随着多肽链熵的增加。 27[]多数蛋白质的主要带电基团是由它N末端的氨基和C-末端的羧基组成 28[]蛋白质的氨基酸顺序(一级结构)在很大程度上决定它的构象(三维结构) 29[]羧肽酶A的分子外部主要是α-螺旋构象,分子内部主要是β-折叠的构象。 30[]蛋白质的亚基(或称亚单位)和肽链是同义的 31[]在水溶液中,蛋白质溶解度最小时的pH值通常就是它的等电点 32.[]变性蛋白质溶解度降低是因为蛋白质分子的电荷被中和以及除去了蛋白质外面的水化层所引起的 33[]血红蛋白的a-链、B-链和肌红蛋白的肽链在三级结构上很相似,所以它们都有结合氧的能力。血红蛋白与氧的亲和力较肌红蛋白更强 34[]血红蛋白与肌红蛋白均为氧载体,前者是一个典型的别构(或变构蛋白,因而与氧结合过程中呈现协同效应,而后者却不是 35[]生活在空气稀薄的高山地区的人和生活在平地上的人比较,高山地区的人血液中 2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG的浓度较低。 36[]测定别构酶的相对分子质量可以用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳 37[]胰岛素原( Proinsulin是信使核糖核酸(mRNA)翻译后的原始产物 38[]蛋白质所含的天冬酰胺及谷氨酰胺两种残基是生物合成时直接从模板中译读而来 39[]球蛋白与球状蛋白质是不同的 40[]等电点不是蛋白质的特征参数 41[]免疫球蛋白是一种糖蛋白,它由两条重链和两条轻链组成 42.[]蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和圆盘电泳是两种完全不同的技术。 43[]在多肽分子中只存在一种共价键即肽键 44[]人绒毛膜促性腺激素(HCG)是一种糖蛋白 45[]血红蛋白和肌红蛋白的功能都是运输氧 46[]逆流分溶和纸层析这两个分离氨基酸的方法是基于同一原理。 47[]溶液的p可以影响氨基酸的等电点 48[]在生理条件下,氧和二氧化碳均与血红蛋白血红素中的二价铁结合。 49[]如用阳离子交换树脂分离D、K和M三种氨基酸,用pH70的缓冲溶液洗脱时, 先下来的氨基酸为D

7 13.[ ]Lys－Lys-Lys 三肽的 pI 必定大于个别 Lys 的 pKa 值。 14.[ ]从理论上说，可用 Edman 降解法测定任何非封闭多肽的全部氨基酸顺序。 15.[ ]从某些微生物中分离得到的多肽抗菌素往往为环状肽链，并含有 D-型氨基酸。 16.[ ]双缩脲反应是肽和蛋白质特有的反应，所以二肽也有双缩脲反应。 17.[ ]热力学上最稳定的蛋白质构象自由能最低。 18.[ ]测定焦谷-组-脯酰胺三肽的游离氨基与羧基时呈阴性。 19.[ ]可用 8mol/L 尿素拆开蛋白质分子中的二硫键。 20.[ ]如果多肽链 C-末端的第二个氨基酸不是脯氨酸，则羧肽酶 A 或 B 中至少有一种能切下 C-末端氨基酸。 21.[ ]在一次实验中，蛋白质顺序仪可测定肽链长度为 200 个氨基酸残基的氨基酸顺序。 22.[ ]脯氨酸不能参与α-螺旋，它使α-螺旋弯曲(bend)，在肌红蛋白和血红蛋白的多肽链中，每一个弯曲处并不一定有脯氨酸，但是每个脯氨酸却产生一个弯曲。 23.[ ]水溶液中蛋白质分子表面的氢原子相互形成氢键。 24.[ ]胰岛素的生物合成途径是先分别合成 A、B 两条链，然后通过 S-S 键相连。 25.[ ]维持蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键。 26.[ ]疏水蛋白质的折叠伴随着多肽链熵的增加。 27.[ ]大多数蛋白质的主要带电基团是由它 N-末端的氨基和 C-末端的羧基组成。 28.[ ]蛋白质的氨基酸顺序(一级结构)在很大程度上决定它的构象(三维结构)。 29.[ ]羧肽酶 A 的分子外部主要是α-螺旋构象，分子内部主要是β-折叠的构象。 30.[ ]蛋白质的亚基(或称亚单位)和肽链是同义的。 31.[ ]在水溶液中，蛋白质溶解度最小时的 pH 值通常就是它的等电点。 32.[ ]变性蛋白质溶解度降低是因为蛋白质分子的电荷被中和以及除去了蛋白质外面的水化层所引起的。 33.[ ]血红蛋白的α-链、β-链和肌红蛋白的肽链在三级结构上很相似，所以它们都有结合氧的能力。血红蛋白与氧的亲和力较肌红蛋白更强。 34.[ ]血红蛋白与肌红蛋白均为氧载体，前者是一个典型的别构(或变构)蛋白，因而与氧结合过程中呈现协同效应，而后者却不是。 35.[ ]生活在空气稀薄的高山地区的人和生活在平地上的人比较，高山地区的人血液中 2, 3-二磷酸甘油酸(2，3-DPG)的浓度较低。 36.[ ]测定别构酶的相对分子质量可以用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳。 37.[ ]胰岛素原(Proinsulin)是信使核糖核酸(mRNA)翻译后的原始产物。 38.[ ]蛋白质所含的天冬酰胺及谷氨酰胺两种残基是生物合成时直接从模板中译读而来。 39.[ ]球蛋白与球状蛋白质是不同的。 40.[ ]等电点不是蛋白质的特征参数。 41.[ ]免疫球蛋白是一种糖蛋白，它由两条重链和两条轻链组成。 42.[ ]蛋白质的 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和圆盘电泳是两种完全不同的技术。 43.[ ]在多肽分子中只存在一种共价键即肽键。 44.[ ]人绒毛膜促性腺激素(HCG)是一种糖蛋白。 45.[ ]血红蛋白和肌红蛋白的功能都是运输氧。 46.[ ]逆流分溶和纸层析这两个分离氨基酸的方法是基于同一原理。 47.[ ]溶液的 pH 可以影响氨基酸的等电点。 48.[ ]在生理条件下，氧和二氧化碳均与血红蛋白血红素中的二价铁结合。 49.[ ]如用阳离子交换树脂分离 D、K 和 M 三种氨基酸，用 pH7.0 的缓冲溶液洗脱时，先下来的氨基酸为 D