第14章核酸的物理化学性质 (Physical and chemical properties of nucleic acid) 、核酸的水解 核酸的酸碱性质 核酸的紫外吸收 四、核酸的变性、复性及杂交
第14章 核酸的物理化学性质 (Physical and chemical properties of nucleic acid) 一、核酸的水解 二、核酸的酸碱性质 三、核酸的紫外吸收 四、核酸的变性、复性及杂交
核酸的酸水解 嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键对酸更不稳 定,对酸最不稳定的是嘌呤与脱氧核糖之间的糖苷 键。DNA在pH1.6于37℃对水透析可完全除去嘌呤 碱;在pH2.8于100℃加热Ih,也可完全除去嘌呤碱。 为了水解嘧啶糖苷键,需要较高的温度。用甲 酸(98%~100%)密封加热至175℃2h,无论 RNA或DNA都可以完全水解,产生嘌呤碱和嘧啶 碱,缺点是尿嘧啶的回收率较低。改用三氟乙酸在 155℃加热60mn(对DNA)或80min(对RNA), 嘧啶碱的回收率显著提髙
核酸的酸水解 嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键对酸更不稳 定,对酸最不稳定的是嘌呤与脱氧核糖之间的糖苷 键。DNA在pH1.6于37℃对水透析可完全除去嘌呤 碱;在pH2.8于100℃加热1h,也可完全除去嘌呤碱。 为了水解嘧啶糖苷键,需要较高的温度。用甲 酸(98%~100%)密封加热至175℃ 2h,无论 RNA或DNA都可以完全水解,产生嘌呤碱和嘧啶 碱,缺点是尿嘧啶的回收率较低。改用三氟乙酸在 155℃加热60min(对DNA)或80min(对RNA), 嘧啶碱的回收率显著提高
核酸的碱水解 RNA的磷酸酯键易被碱水解,产生核苷酸。 DNA的磷酸酯键则不易被碱水解。这是因为RNA 的核糖上有2’—OH,在碱作用下形成磷酸三酯。 磷酸三酯极不稳定,随即水解,产生核苷2’,3 环磷酸酯。该环磷酸酯继续水解产生2一核苷 酸和3—核苷酸。 DNA一般对碱稳定,若在1mo/ L Naoh中加 热至100℃4h,可以得到小分子的寡聚脱氧核苷 酸
核酸的碱水解 RNA的磷酸酯键易被碱水解,产生核苷酸。 DNA的磷酸酯键则不易被碱水解。这是因为RNA 的核糖上有2’-OH,在碱作用下形成磷酸三酯。 磷酸三酯极不稳定,随即水解,产生核苷2’ ,3’ -环磷酸酯。该环磷酸酯继续水解产生2’-核苷 酸和3’-核苷酸。 DNA一般对碱稳定,若在1mol/L NaOH中加 热至100℃ 4h,可以得到小分子的寡聚脱氧核苷 酸
核酸的酶水解 水解核酸的酶种类很多。非特异性水 解磷酸二酯键的酶为磷酸二酯酶,如蛇毒 磷酸二酯酶和牛脾磷酸二酯酶。专一水解 核酸的磷酸二酯酶称为核酸酶。另外还有 非特异水解糖苷键的糖苷酶
核酸的酶水解 水解核酸的酶种类很多。非特异性水 解磷酸二酯键的酶为磷酸二酯酶,如蛇毒 磷酸二酯酶和牛脾磷酸二酯酶。专一水解 核酸的磷酸二酯酶称为核酸酶。另外还有 非特异水解糖苷键的糖苷酶
核酸酶的分类工 按底物专一性分类:作用于RNA的称为RNA酶 ( ribonuclease, RNase);作用于DNA的称为 DNA酶( deoxyribonuclease, DNase)。 按对底物作用的方式可分为核酸内切酶 ( endonuclease)和核酸外切酶( exonuclease) 少数核酸酶既可内切又可外切
核酸酶的分类Ⅰ ➢按底物专一性分类:作用于RNA的称为RNA酶 (ribonuclease,RNase);作用于DNA的称为 DNA酶(deoxyribonuclease,DNase)。 ➢按 对 底 物 作 用 的 方 式 可 分 为 核 酸 内 切 酶 (endonuclease)和核酸外切酶(exonuclease)。 少数核酸酶既可内切又可外切
核酸酶的分类Ⅱ 按磷酸二酯键断裂的方式可将核酸酶分为两类, 类断裂磷酸二酯键后磷酸保留在5’位,一类磷 酸保留在3位。 作用于双链的为双链酶,作用于单链的为单链 酶。核酸外切酶有5-3方向切割的,也有3’-5 方向切割的,分别称为5→3外切酶和35外切 酶。还有对特定核苷酸序列部位进行切割的
核酸酶的分类Ⅱ ➢按磷酸二酯键断裂的方式可将核酸酶分为两类, 一类断裂磷酸二酯键后磷酸保留在5’位,一类磷 酸保留在3’位。 ➢作用于双链的为双链酶,作用于单链的为单链 酶。核酸外切酶有5’→3’方向切割的,也有3’→5’ 方向切割的,分别称为5’→3’外切酶和3’→5’外切 酶。还有对特定核苷酸序列部位进行切割的