实验10分子荧光法测定奎宁的含量
实验10 分子荧光法测定 奎宁的含量
一、实验目的1、学会荧光分光光度法定量分析的原理和方法2、了解荧光分光光度计的使用方法和操作过程
一、实验目的 1、学会荧光分光光度法定量分析的原理和方法。 2、了解荧光分光光度计的使用方法和操作过程。 ◼
二、实验原理奎宁在稀酸溶液中是强荧光物质，它有两个激发波长250nm和350nm，荧光发射峰在450nm。在低浓度时，荧光强度与荧光物质量浓度呈正比。If=kC
二、实验原理 ◼ 奎宁在稀酸溶液中是强荧光物质，它有 两个激发波长250nm和350nm，荧光 发射峰在450nm。在低浓度时，荧光强 度与荧光物质量浓度呈正比。 If=kC
三、仪器与试剂1、仪器日本日立F-3010荧光分光光度计51000ml容量瓶2支100ml容量瓶3支10ml刻度移液管2支2.试剂（1）1mol.L-1H2SO4溶液的配制：将56ml的18mol/LH2SO4慢慢加到944ml去离子水中。（2）0.05mol.L-1H2SO4溶液的配制：取1mol/l25ml于500ml容量瓶中用去离子水稀释到刻度即可。（3）100.0ug.mL-1奎宁储备液：准确称取120.7mg硫酸奎宁二水化合物于250ml烧杯中，加50ml1mol/LH2S04溶液溶解，转移至1000ml棕色容量瓶中，用去离子水定容至1000ml
三、仪器与试剂 1、仪器 日本日立 F-3010 荧光分光光度计 1000ml容量瓶2 支 100ml容量瓶3支 10ml刻度移液管2支 2. 试剂 （1）1mol.L-1 H2SO4溶液的配制：将56ml的18mol/L H2SO4 慢慢加到944ml去离子水中。 （2）0.05 mol.L-1 H2SO4溶液的配制：取1 mol/l 25ml于 500ml容量瓶中用去离子水稀释到刻度即可。 （3）100.0μg. mL -1奎宁储备液 ： 准确称取120.7mg硫酸奎宁二 水化合物于250ml烧杯中，加50ml 1 mol/L H2SO4溶液溶解，转移至 1000ml棕色容量瓶中，用去离子水定容至1000ml
四、实验步骤1.10.0ug.mL-1奎宁储备液的配制：用10ml刻度移液管取10.00ml100.0ug.mL-1奎宁储备液于100ml容量瓶中，用0.05mol.L-1H2S04去离子水溶液稀释至刻度。2.1.0ug：mL-1奎宁标准溶液的配制：用10ml刻度移液管取10.00ml10μg.mL-1奎宁储备液于100ml容量瓶中，用0.05mol.L-1H2S04去离子水溶液稀释至刻度。3绘制激发光谱和荧光发射光谱：绘制激发光谱首先固定奎宁的荧光发射波长在450nm，然后奎宁激发光谱所出现的范围内（即220-400nm）扫其激光光谱，它激发峰分别出现在252nm和350nm；绘制荧光发射光谱，首先固定奎宁的激发波长在350nm或252nm，然后在奎宁荧光发射光谱所出现的范围内（即400-600nm）扫其荧光光谱，它的荧光峰出现在448nm。4.背景（空白）、标准及未知溶液荧光强度的测定：将激发波长固定在252nm或（350nm），荧光发射波长固定在448nm，测量空白标准及未知溶液荧光强度
四、实验步骤 1.10.0μg. mL -1奎宁储备液的配制：用10ml刻度移液管取10.00ml 100.0μg. mL -1 ◼ 奎宁储备液于100ml容量瓶中，用0.05 mol.L-1H2SO4 去离子水溶液 稀释至刻度。 ◼ 2. 1.0μg. mL -1奎宁标准溶液的配制：用10ml 刻度移液管取 10.00ml 10μg. mL -1 ◼ 奎宁储备液于100ml容量瓶中，用0.05 mol.L-1H2SO4 去离子水溶液 稀释至刻度。 ◼ 3. 绘制激发光谱和荧光发射光谱：绘制激发光谱首先固定奎宁的荧光 发射波长在450nm，然后奎宁激发光谱所出现的范围内（即220- 400nm）扫其激光光谱，它激发峰分别出现在252 nm和350 nm；绘 制荧光发射光谱，首先固定奎宁的激发波长在350nm或252nm，然后 在奎宁荧光发射光谱所出现的范围内(即400-600nm)扫其荧光光谱， 它的荧光峰出现在448nm。 ◼ 4. 背景（空白）、标准及未知溶液荧光强度的测定：将激发波长固定 在 252 nm或 ( 350 nm)，荧光发射波长固定在448 nm，测量空白、 标准及未知溶液荧光强度
五、实验数据纪录及处理溶液标准溶液未知溶液背景（空白）溶液浓度（μgmL-l）荧光强度（I）
五、实验数据纪录及处理 溶液 背景（空白） 溶液 标准溶液 未知溶液 浓度（μg. mL-1） 荧光强度（If）
六、问题讨论1.能用0.05mol/的盐酸来代替0.05mol/硫酸稀释溶液吗？为什么？2.如何绘制激发光谱和荧光发射光谱？
六、问题讨论 1.能用0.05mol/l的盐酸来代替0.05mol/l 硫酸稀释溶液吗？为什么？ 2.如何绘制激发光谱和荧光发射光谱？
■七．注意事项■1.实验中所用水是去离子水■2.溶液现配现用
◼ 七．注意事项 ◼ 1.实验中所用水是去离子水 ◼ 2.溶液现配现用