《饲料卫生检验》课程教学资源（教案讲义）第二章样品前处理.doc_大学文库

白提取方法的选择提取方法主要有振荡提取法、组织捣碎提取法和索氏提取法三种振荡提取法这是一种最为常用的有机毒物提取法。将样品粉碎,过筛后放入磨口具塞的三角烧瓶中,加入适宜的溶剂,置于电动振荡器中振荡提取半小时至1小时,然后用过滤的方法将残渣与提取液分开,残渣再用有机溶剂洗涤数次,合并到提取液中。 2、组织捣碎提取法本法主要用于新鲜蔬菜、牧草等含水量较多的样品。将样品切碎后放入组织捣碎机,加入适宜的溶剂,快速捣碎3~5分钟,然后过滤,残渣用溶剂洗涤数次, 合并到提取液中。此法提取效率高,但杂质的溶出也较多,在捣碎过程中所产生的乳化现象,可用离心法除去。 3、索氏提取法是一种应用索氏提取器进行连续回流提取的方法。索氏提取器又称脂肪提取器,有烧瓶、抽提筒和冷凝管三部分组成。将样品用滤纸包好,放在抽提筒内, 溶剂放在烧瓶内,抽提时,加热下端烧瓶内的溶剂,溶剂不断蒸发,进入冷凝器中,被冷凝成液体进入抽提管中对样品进行抽提,当溶剂达到一定高度后,就借助虹吸管流到烧瓶中,溶剂不断地蒸发、冷凝、抽提、回流,直到样品中的被测物质全部地被抽提出来。此法常用于谷类的提取。优点是溶剂的使用量少,提取完全,回收率高,但较费时,一般每个样品要抽提12小时以上灰化法本法是一种适用于分析样品中有毒矿物质的预处理方法。样品中的矿物质如 g、F、Pb等在饲料中与有机物结合形成稳定、牢固的难以解离的物质,故不能用一般的化学反应进行检测。在分析样品中的有毒矿物质时,需将样品灰化,破坏有机物质,使结合状态的金属或非金属转变成无机物的形式,以便进行检测。根据分析项目不同,破坏样品中有机物质的方法主要有灰化法和湿消化法两类。 l、干灰化法( Dry ashing 第2页共8页

- - 第 2 页共 8页㈡提取方法的选择提取方法主要有振荡提取法、组织捣碎提取法和索氏提取法三种。 1、振荡提取法这是一种最为常用的有机毒物提取法。将样品粉碎，过筛后放入磨口具塞的三角烧瓶中，加入适宜的溶剂，置于电动振荡器中振荡提取半小时至 1 小时，然后用过滤的方法将残渣与提取液分开，残渣再用有机溶剂洗涤数次，合并到提取液中。 2、组织捣碎提取法本法主要用于新鲜蔬菜、牧草等含水量较多的样品。将样品切碎后放入组织捣碎机，加入适宜的溶剂，快速捣碎 3～5 分钟，然后过滤，残渣用溶剂洗涤数次，合并到提取液中。此法提取效率高，但杂质的溶出也较多，在捣碎过程中所产生的乳化现象，可用离心法除去。 3、索氏提取法是一种应用索氏提取器进行连续回流提取的方法。索氏提取器又称脂肪提取器，有烧瓶、抽提筒和冷凝管三部分组成。将样品用滤纸包好，放在抽提筒内，溶剂放在烧瓶内，抽提时，加热下端烧瓶内的溶剂，溶剂不断蒸发，进入冷凝器中，被冷凝成液体进入抽提管中对样品进行抽提，当溶剂达到一定高度后，就借助虹吸管流到烧瓶中，溶剂不断地蒸发、冷凝、抽提、回流，直到样品中的被测物质全部地被抽提出来。此法常用于谷类的提取。优点是溶剂的使用量少，提取完全，回收率高，但较费时，一般每个样品要抽提 12 小时以上。㈡灰化法本法是一种适用于分析样品中有毒矿物质的预处理方法。样品中的矿物质如 Hg、F、Pb 等在饲料中与有机物结合形成稳定、牢固的难以解离的物质，故不能用一般的化学反应进行检测。在分析样品中的有毒矿物质时，需将样品灰化，破坏有机物质，使结合状态的金属或非金属转变成无机物的形式，以便进行检测。根据分析项目不同，破坏样品中有机物质的方法主要有灰化法和湿消化法两类。 1、干灰化法（Dry ashing）

- - 第 3 页共 8页简称灰化法或灼烧法，是一种常用的有机物质破坏法，适用于除汞、砷以外的各种金属类金属元素。 ⑴ 干灰化的方法根据灰化过程中是否加其它试剂，本法又分二种。 ① 直接灰化法：将样品放在坩埚中，在高温灼烧下，使样品脱水、焦化，在空气中氧的作用下，使样品中的有机物氧化分解成二氧化碳、水和其它气体而挥发，剩下无机物（盐类或氧化物），用适当溶剂溶解定容，供测定用。 ② 加助灰化剂灰化法：常用的助灰化剂有氧化镁、硝酸镁、氢氧化钠、氢氧化钙等。加入助灰化剂，可使样品呈疏松状态，加速灰化过程，并使灰化完全。此外，助灰化剂还可和被测物质结合成难挥发的盐类，防止灰化过程中被测物质的损失，如氧化镁或硝酸镁能使砷变成难挥发的焦砷酸镁（Mg2As2O7），氢氧化钙则转变成难挥发的 CaF2 等。 ⑵ 干式灰化法的优缺点优点： ① 其它试剂少，减少了操作过程污染的可能性，因而空白值较低； ② 样品分解彻底，操作简便，仪器设备简单，一次可以处理大量的样品。缺点： ① 干灰费时，一般 500～550℃需 4 hr，600℃需 1hr～2hr； ② 长时间的高温加热易使一些被测物质挥发； ③ 瓷坩埚能吸附金属，可造成结果偏低。 ⑶ 干灰化法操作的注意事项 ① 灰化前应进行样品的预炭化，预炭化系指将坩埚内的样品先放在文火上加热，直至样品变黑，然后转入控温茂福炉内 550℃灰化，预炭化的目的在于防止样品因急剧灼烧引起的残灰飞散。 ② 瓷坩埚对金属有吸附作用，特别是新的瓷坩埚，因此在使用时应选用用过的坩埚。 ③ 如果样品在灰化后仍不变白，可在冷却后沿坩埚边缘加入少量蒸馏水湿润，再使其充分干燥后继续灰化。加水的目的是有助于灰分溶解，解除低熔点灰

有机物的目的。下面介绍常用的两种湿消化方法。 ①硝酸硫酸湿消化法将5g样品置于100ml的凯氏烧瓶中,随之加入与浓硝酸等体积的蒸馏水, 缓缓加热至沸腾,继续加热至容积减半。冷却后逐渐加入lom硫酸,再加热,待内容物变黑,既加入少量浓硝酸,为防止过度炭化,加热必须适度,整个消化过程必须存在少量的硝酸,加热至发烟而不再变黑,最后至溶液无色,冷却、用蒸馏水稀释至一定体积备用本法可缩短炭化过程,减少消化时间,反应速度适中。但因消化过程中使用硫酸,而碱土金属的硫酸盐溶解度较小,故本法不宜作碱土金属的分析。硝酸高氯酸湿消化法将含有不超过2g干物质的样品至于200ml的凯氏烧瓶中,加入25m硝酸(相对密度为142)缓慢蒸煮沸30min,冷却、加l5ml高氯酸(60%ww)。缓慢煮沸至无色或近乎无色,继续沸腾Ihr(注意防止瓶中内容物蒸干)。冷却,用蒸馏水稀释至适当体积备用本法氧化能力强,反映速度快,炭化过程不明显;消化温度较低,挥发损失少。但由于硝酸和高氯酸加热后均容易挥发,故如温度过髙、加热时间过长,容易烧干,并可能引起残余物燃烧或爆炸。本法对某些还原性较强的样品,如酒精甘油、油脂和大量磷酸盐存在时,不宜采用。 (2)湿消化法的特点 ①优点:所用时间短,温度较低,因而挥发损失较少,同时应用玻璃仪器凯氏烧瓶),吸附损失也较少。 ②缺点:使用试剂较多,易造成高的试剂空白值,操作较复杂,危险性大, 不便于大量样品的处理。为此,美国分析化学家协会(AOAC)推荐一种湿消化法和干灰化法相结合的消化方法,其过程如下 lg样品置于上釉的高形陶瓷坩埚内,500℃灰化2hr,冷却,用10滴蒸馏水湿润,然后小心加入3~4m硝酸(1:1),100~200℃下蒸发除去多余的硝酸,将坩埚转至马福炉内,500℃灰化Ihr,冷却、用l00ml盐酸(1:1)溶解并定量转至第5页共8页

- - 第 5 页共 8页有机物的目的。下面介绍常用的两种湿消化方法。 ① 硝酸-硫酸湿消化法将 5g 样品置于 100ml 的凯氏烧瓶中，随之加入与浓硝酸等体积的蒸馏水，缓缓加热至沸腾，继续加热至容积减半。冷却后逐渐加入 10ml 硫酸，再加热，待内容物变黑，既加入少量浓硝酸，为防止过度炭化，加热必须适度，整个消化过程必须存在少量的硝酸，加热至发烟而不再变黑，最后至溶液无色，冷却、用蒸馏水稀释至一定体积备用。本法可缩短炭化过程，减少消化时间，反应速度适中。但因消化过程中使用硫酸，而碱土金属的硫酸盐溶解度较小，故本法不宜作碱土金属的分析。 ② 硝酸-高氯酸湿消化法将含有不超过 2g 干物质的样品至于 200ml的凯氏烧瓶中，加入 25ml硝酸（相对密度为 1.42）缓慢蒸煮沸 30min，冷却、加 15ml 高氯酸（60%w/w）。缓慢煮沸至无色或近乎无色，继续沸腾 1hr（注意防止瓶中内容物蒸干）。冷却，用蒸馏水稀释至适当体积备用。本法氧化能力强，反映速度快，炭化过程不明显；消化温度较低，挥发损失少。但由于硝酸和高氯酸加热后均容易挥发，故如温度过高、加热时间过长，容易烧干，并可能引起残余物燃烧或爆炸。本法对某些还原性较强的样品，如酒精、甘油、油脂和大量磷酸盐存在时，不宜采用。 ⑵ 湿消化法的特点 ① 优点：所用时间短，温度较低，因而挥发损失较少，同时应用玻璃仪器（凯氏烧瓶），吸附损失也较少。 ② 缺点：使用试剂较多，易造成高的试剂空白值，操作较复杂，危险性大，不便于大量样品的处理。为此，美国分析化学家协会（AOAC）推荐一种湿消化法和干灰化法相结合的消化方法，其过程如下： 1g 样品置于上釉的高形陶瓷坩埚内，500℃灰化 2hr，冷却，用 10 滴蒸馏水湿润，然后小心加入 3～4ml 硝酸（1:1），100～200℃下蒸发除去多余的硝酸，将坩埚转至马福炉内，500℃灰化 1hr，冷却、用 100ml 盐酸（1:1）溶解并定量转至

是利用物质在两种互不相溶的溶剂中溶解度不同,将被测的有机污染物从抽提液转移到另一种溶剂中(即萃取剂)而与干扰物质分离,达到纯化目的的一种方法。此法操作简便、快速、回收率高,因而被广泛应用。为了获得较好的分离效果,萃取剂的选择至关重要。萃取剂需要具备以下条 ①与抽提液互不相溶 ②对被测的有机毒物(农药、真菌毒素等)有较大的溶解性; ③对色素、脂肪、蜡质等杂质有较小的溶解性一般来说,农药、真菌毒素等的极性较色素、脂肪等杂质为大,即前者在强极性溶剂中溶解度大,而后者在弱极性溶剂中溶解度大。因而通常萃取是用极性较大的氯仿、甲醇等溶剂来萃取石油醚等极性较小的抽提液,这样,极性物质被转移到萃取液中,而杂质仍在抽提液中, 用强极性的溶剂萃取虽然能达到纯化的目的,但强极性溶剂往往沸点较髙, 不易浓缩,因而需要进行反萃取。反萃取就是将萃取剂中的被测物质再转移到易浓缩的低沸点的弱极性有机溶剂中。反萃取的操作方法是向萃取液中加入一定量水相溶液与极性溶剂互溶,使被测物质的溶解度降低,再用低沸点弱极性溶剂进行反萃取。在水相溶液中加入少量盐类可大大提高反萃取的效率,这种现象称为盐析作用柱层析法系利用抽提液中被测物质与干扰物质在固体吸附剂表面的吸附力不同,亦即它们在吸附剂与洗脱剂之间的分布情况不同而达到分离的目的。为了获得较好的分离效果,必须选择适当的吸附剂和洗脱剂常用的吸附剂有活性炭、硅胶、氧化铝等。一般而言,活性炭对色素的吸附力较强,而硅胶、氧化铝则对油脂等有较强的吸附力。吸附剂的选择,主要根据其特性,同时考虑被测物质和杂质的性质。在实际应用时,为了使色谱柱对各种杂质都有较好的吸附作用,集中吸附剂常以一定比例混合使用。吸附剂的吸附活性与其含水量有关,水分含量越高,活性越低,吸附力越弱,因此,可通过活化第7页共8页

- - 第 7 页共 8页是利用物质在两种互不相溶的溶剂中溶解度不同，将被测的有机污染物从抽提液转移到另一种溶剂中（即萃取剂）而与干扰物质分离，达到纯化目的的一种方法。此法操作简便、快速、回收率高，因而被广泛应用。为了获得较好的分离效果，萃取剂的选择至关重要。萃取剂需要具备以下条件： ① 与抽提液互不相溶； ② 对被测的有机毒物（农药、真菌毒素等）有较大的溶解性； ③ 对色素、脂肪、蜡质等杂质有较小的溶解性。一般来说，农药、真菌毒素等的极性较色素、脂肪等杂质为大，即前者在强极性溶剂中溶解度大，而后者在弱极性溶剂中溶解度大。因而通常萃取是用极性较大的氯仿、甲醇等溶剂来萃取石油醚等极性较小的抽提液，这样，极性物质被转移到萃取液中，而杂质仍在抽提液中。用强极性的溶剂萃取虽然能达到纯化的目的，但强极性溶剂往往沸点较高，不易浓缩，因而需要进行反萃取。反萃取就是将萃取剂中的被测物质再转移到易浓缩的低沸点的弱极性有机溶剂中。反萃取的操作方法是向萃取液中加入一定量水相溶液与极性溶剂互溶，使被测物质的溶解度降低，再用低沸点弱极性溶剂进行反萃取。在水相溶液中加入少量盐类可大大提高反萃取的效率，这种现象称为盐析作用。 2、柱层析法系利用抽提液中被测物质与干扰物质在固体吸附剂表面的吸附力不同，亦即它们在吸附剂与洗脱剂之间的分布情况不同而达到分离的目的。为了获得较好的分离效果，必须选择适当的吸附剂和洗脱剂。常用的吸附剂有活性炭、硅胶、氧化铝等。一般而言，活性炭对色素的吸附力较强，而硅胶、氧化铝则对油脂等有较强的吸附力。吸附剂的选择，主要根据其特性，同时考虑被测物质和杂质的性质。在实际应用时，为了使色谱柱对各种杂质都有较好的吸附作用，集中吸附剂常以一定比例混合使用。吸附剂的吸附活性与其含水量有关，水分含量越高，活性越低，吸附力越弱，因此，可通过活化

《饲料卫生检验》课程教学资源（教案讲义）第二章 样品前处理

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