第八章饲料中其它有毒成分分析 本章所介绍的饲料有毒成分包括两个方面的内容 1、饲料调制不当产生的有毒物质。例如:许多青绿饲料加工不得法,可产 生大量的亚硝酸盐;蛋白质含量高的饲料如果错误地进行发酵则可产生大量有毒 的蛋白质分解产物。这些有毒物质都可引起畜禽中毒。 2、饲料本身含有的少量有毒成分。如棉籽饼中的棉酚、髙梁苗中的氰甙等 这些饲料如果饲喂前不作去毒处理,长期大量饲喂,可引起中毒 有毒植物本身不作为饲料,故不列为本章的内容,但在兽医临床上,特别 在放牧家畜的疾病中,误食有毒植物引起的中毒时有发生,对此有兴趣的同学可 参阅家畜中毒学书籍。 由于饲料中有毒成分范围广、性质各不相同,故样品处理和分析方法也没 有规律性。本章将介绍亚硝酸盐、氰化物、硫甙、棉酚的分析。 第一节亚硝酸盐分析 、概述 青绿饲料(包括叶菜类、牧草、野菜等)及树叶类饲料,都不同程度地含 有硝酸盐,其中尤以叶菜类饲料,如小白菜、青菜等含量较髙,在新鲜的叶菜类 饲料中硝酸盐的含量可高达数千ppm,但一般不含亚硝酸盐或含量甚微,通常多 低于1ppm 对动物来说,硝酸盐是低毒的,而亚硝酸盐则是高毒的,临床上多见的畜 禽中毒都是由硝酸盐转化为亚硝酸盐而引起的。 ()硝酸盐转化为亚硝酸盐的条件 自然界很多细菌和真菌都含有硝酸盐还原酶,能将硝酸盐还原成亚硝酸盐 (通常将这些微生物称为硝酸盐还原菌)。硝酸盐还原菌的种类很多,广泛存在 于土壤、水等外界环境以及动物的胃肠道和口腔等器官中。体内外的硝酸盐还原 菌如遇到适宜的条件,可大量繁殖,将硝酸盐还原为亚硝酸盐。 饲料中的硝酸盐转化为亚硝酸盐,可发生于动物摄食硝酸盐以前(体外转
1 第八章 饲料中其它有毒成分分析 本章所介绍的饲料有毒成分包括两个方面的内容： 1、饲料调制不当产生的有毒物质。例如：许多青绿饲料加工不得法，可产 生大量的亚硝酸盐；蛋白质含量高的饲料如果错误地进行发酵则可产生大量有毒 的蛋白质分解产物。这些有毒物质都可引起畜禽中毒。 2、饲料本身含有的少量有毒成分。如棉籽饼中的棉酚、高梁苗中的氰甙等， 这些饲料如果饲喂前不作去毒处理，长期大量饲喂，可引起中毒。 有毒植物本身不作为饲料，故不列为本章的内容，但在兽医临床上，特别 在放牧家畜的疾病中，误食有毒植物引起的中毒时有发生，对此有兴趣的同学可 参阅家畜中毒学书籍。 由于饲料中有毒成分范围广、性质各不相同，故样品处理和分析方法也没 有规律性。本章将介绍亚硝酸盐、氰化物、硫甙、棉酚的分析。 第一节 亚硝酸盐分析 一、概述 青绿饲料（包括叶菜类、牧草、野菜等）及树叶类饲料，都不同程度地含 有硝酸盐，其中尤以叶菜类饲料，如小白菜、青菜等含量较高，在新鲜的叶菜类 饲料中硝酸盐的含量可高达数千 ppm，但一般不含亚硝酸盐或含量甚微，通常多 低于 1ppm。 对动物来说，硝酸盐是低毒的，而亚硝酸盐则是高毒的，临床上多见的畜 禽中毒都是由硝酸盐转化为亚硝酸盐而引起的。 ㈠ 硝酸盐转化为亚硝酸盐的条件 自然界很多细菌和真菌都含有硝酸盐还原酶，能将硝酸盐还原成亚硝酸盐 （通常将这些微生物称为硝酸盐还原菌）。硝酸盐还原菌的种类很多，广泛存在 于土壤、水等外界环境以及动物的胃肠道和口腔等器官中。体内外的硝酸盐还原 菌如遇到适宜的条件，可大量繁殖，将硝酸盐还原为亚硝酸盐。 饲料中的硝酸盐转化为亚硝酸盐，可发生于动物摄食硝酸盐以前（体外转
化),也可发生在摄入体内之后(即体内转化)。 体外转化 体外转化在生产实践中常见于如下两种场合 (1)青绿饲料长时间高温堆放 青绿饲料,尤其是经虫害、踏过的青绿饲料,堆放于潮湿闷热的环境中, 混杂于饲料中的某些硝酸盐还原菌得到适宜的温度、水分,大量繁殖,迅速将硝 酸盐还原成亚硝酸盐。 (2)青绿饲料用小火焖煮或煮后久置 青绿饲料用小火焖煮时,煮成半生半熟,混杂于饲料中的细菌不但大多未 被杀死,反而得到适宜的温度和水分。因此,与潮湿髙温堆放一样,极易促使硝 酸盐转化为亚硝酸盐。此外,煮熟的青绿饲料放在不清洁的容器中,如果温度较 高,存放时间过久,亚硝酸盐的含量也可增加 2、体内转化 即饲料中的硝酸盐被家畜采食后,经胃肠道中微生物的作用而转化为亚硝 酸盐。反刍动物(有时也见于单胃动物)在采食新鲜的青绿饲料后,有时发生亚 硝酸盐中毒,其原因就在于此 反刍动物在日粮搭配正常或富含碳水化合物的情况下,摄入的硝酸盐在瘤 胃微生物的作用下还原成亚硝酸盐,并进一步还原成氨而被利用。所以,只要摄 入的硝酸盐的量同瘤胃还原能力保持平衡,则不会引起中毒。但是当反刍动物瘤 胃的pH值、还原所需的氢供给及微生物群发生变化,亚硝酸盐还原氨的速度受 到限制时,摄入过多的硝酸盐,就极易引起亚硝酸盐的积累而导致中毒。 亚硝酸盐中毒机理和临床症状 亚硝酸盐毒性程度主要取决于其数量。食欲越好,吃得越多的动物,中毒 机会也越多。 不同动物对亚硝酸盐的敏感性有很大的差异,其中猪最敏感,牛、羊次之。 亚硝酸盐中毒机理
2 化），也可发生在摄入体内之后（即体内转化）。 1、体外转化 体外转化在生产实践中常见于如下两种场合： ⑴ 青绿饲料长时间高温堆放 青绿饲料，尤其是经虫害、踏过的青绿饲料，堆放于潮湿闷热的环境中， 混杂于饲料中的某些硝酸盐还原菌得到适宜的温度、水分，大量繁殖，迅速将硝 酸盐还原成亚硝酸盐。 ⑵ 青绿饲料用小火焖煮或煮后久置 青绿饲料用小火焖煮时，煮成半生半熟，混杂于饲料中的细菌不但大多未 被杀死，反而得到适宜的温度和水分。因此，与潮湿高温堆放一样，极易促使硝 酸盐转化为亚硝酸盐。此外，煮熟的青绿饲料放在不清洁的容器中，如果温度较 高，存放时间过久，亚硝酸盐的含量也可增加。 2、体内转化 即饲料中的硝酸盐被家畜采食后，经胃肠道中微生物的作用而转化为亚硝 酸盐。反刍动物（有时也见于单胃动物）在采食新鲜的青绿饲料后，有时发生亚 硝酸盐中毒，其原因就在于此。 反刍动物在日粮搭配正常或富含碳水化合物的情况下，摄入的硝酸盐在瘤 胃微生物的作用下还原成亚硝酸盐，并进一步还原成氨而被利用。所以，只要摄 入的硝酸盐的量同瘤胃还原能力保持平衡，则不会引起中毒。但是当反刍动物瘤 胃的 pH 值、还原所需的氢供给及微生物群发生变化，亚硝酸盐还原氨的速度受 到限制时，摄入过多的硝酸盐，就极易引起亚硝酸盐的积累而导致中毒。 ㈡ 亚硝酸盐中毒机理和临床症状 亚硝酸盐毒性程度主要取决于其数量。食欲越好，吃得越多的动物，中毒 机会也越多。 不同动物对亚硝酸盐的敏感性有很大的差异，其中猪最敏感，牛、羊次之。 亚硝酸盐中毒机理：
(1)亚硝酸盐是一种血液毒,其进入血液后,与血红蛋白相互作用,使血 红蛋白中的二价铁氧化为三价铁而形成高铁血红蛋白( methemoglobin,简称 MHb),又称变性血红蛋白,使血液失去携氧能力,造成组织细胞缺氧 亚硝酸盐可直接作用于血管平滑肌,松驰血管平滑肌,导致血管扩张, 外周循环衰竭。 中毒家畜表现为一系列缺氧症状:高度呼吸困难,肌肉震颤,皮肤呈乌青 色,粘膜发绀,血液暗红色,凝固不良 白饲料中亚硝酸盐的卫生标准 饲料中亚硝酸盐允许含量(以亚硝酸钠计),在我国国家饲料卫生标准中作 了规定(表8-1) 饲料名称 亚硝酸盐允许量(mgkg) 鱼粉 ≤60 鸡配合饲料,猪配合、混合饲料 ≤15 二、样品处理 亚硝酸盐是一种水溶性毒物,所以样品处理比较简单, 取样品5~10g,研碎,加水至100m,振荡数分钟,过滤,取中间滤液10ml 作为供试液。如果滤液中色素含量较髙,可用活性炭脱色 三、亚硝酸盐定量分析 亚硝酸盐的定量分析常采用重氮偶合比色法。依据使用试剂不同分为盐酸 萘乙二胺法和α一萘胺比色法。两种方法均具有较好的准确度和精密度,可随意 选择。 ()a一恭胺法(格利斯法, Griess法 1、原理:亚硝酸盐在弱酸性条件下与对氨基苯磺酸反应,生成重氮盐后, 再与a一萘胺偶合形成紫红色染料,与标准系列比较定量 2、仪器与器皿 分光光度计,比色管。 3
3 ⑴ 亚硝酸盐是一种血液毒，其进入血液后，与血红蛋白相互作用，使血 红蛋白中的二价铁氧化为三价铁而形成高铁血红蛋白（methemoglobin，简称 MHb），又称变性血红蛋白，使血液失去携氧能力，造成组织细胞缺氧。 ⑵ 亚硝酸盐可直接作用于血管平滑肌，松驰血管平滑肌，导致血管扩张， 外周循环衰竭。 中毒家畜表现为一系列缺氧症状：高度呼吸困难，肌肉震颤，皮肤呈乌青 色，粘膜发绀，血液暗红色，凝固不良。 ㈢ 饲料中亚硝酸盐的卫生标准 饲料中亚硝酸盐允许含量（以亚硝酸钠计），在我国国家饲料卫生标准中作 了规定（表 8—1） 饲 料 名 称 亚硝酸盐允许量（mg/kg） 鱼粉 ≤60 鸡配合饲料，猪配合、混合饲料 ≤15 二、样品处理 亚硝酸盐是一种水溶性毒物，所以样品处理比较简单。 取样品 5~10g，研碎，加水至 100ml，振荡数分钟，过滤，取中间滤液 10ml 作为供试液。如果滤液中色素含量较高，可用活性炭脱色。 三、亚硝酸盐定量分析 亚硝酸盐的定量分析常采用重氮偶合比色法。依据使用试剂不同分为盐酸 萘乙二胺法和α—萘胺比色法。两种方法均具有较好的准确度和精密度，可随意 选择。 ㈠ α—萘胺法（格利斯法，Griess 法） 1、原理：亚硝酸盐在弱酸性条件下与对氨基苯磺酸反应，生成重氮盐后， 再与α—萘胺偶合形成紫红色染料，与标准系列比较定量。 2、仪器与器皿 分光光度计，比色管
3、试剂 (1)亚硝酸钠标准液:精密称取经115+-5℃千燥至恒重的分析纯亚硝酸钠 0.1495g,用水溶解,移入100m容量瓶中,加水稀释至刻度,此液每ml相当于 I moNo2。 (2)亚硝酸钠标准使用液:吸取亚硝酸钠标准贮备液lml,置于100m容量 瓶中,加水稀释至刻度,此标准液每m相当于10ugNO2-。 (3)对氨基苯磺酸溶液:取0.3g对氨基苯磺酸溶于150ml1%醋酸溶液中。 贮存于棕色瓶中。如溶液有颜色,临用时加入少许活性炭加热至80℃并进行过 滤,即可脱色。 (4)盐酸α一萘胺溶液:取02g盐酸α一萘胺溶于20m水中,加浓盐酸 05nl,微热溶解,加水稀释至100ml。贮存于棕色瓶中。如有颜色,可用活性炭 脱色 (5)醋酸钠缓冲液:取164g无水醋酸钠,溶于100ml水中 4、操作 取供试液2ml,标准液0.0、0.5、10、1.5、2.0、2.5ml,分别加入50m大 试管中,加水稀释至25ml。 于标准管和样品管中分别加λ.5m醋酸钠缓冲液,lm对氨基苯磺酸溶液 和lml盐酸α一萘胺溶液,摇匀放置10min,以零管作参比,lcm比色皿,于波 长525nm处测定吸光度。根据标准管各种浓度所测定的吸收度绘出标准曲线。 根据检液所测的吸收度从标准曲线上査出检液的含量(A),再算出样品中亚硝酸 盐的含量: 亚硝酸盐含量A×1 1000 ÷1000(mg 50A 2 式中:A—一样品管测得的含量(μg); m—一称取样品质量(g)。 盐酸萘乙二胺法(国家标准法) 1、原理在弱酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应,生成重氮化合
4 3、试剂 ⑴ 亚硝酸钠标准液：精密称取经 115+5℃干燥至恒重的分析纯亚硝酸钠 0.1495g，用水溶解，移入 100ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，此液每 ml 相当于 1mgNO2-。 ⑵ 亚硝酸钠标准使用液：吸取亚硝酸钠标准贮备液 1ml，置于 100ml 容量 瓶中，加水稀释至刻度，此标准液每 ml 相当于 10ugNO2-。 ⑶ 对氨基苯磺酸溶液：取 0.3g 对氨基苯磺酸溶于 150ml12%醋酸溶液中。 贮存于棕色瓶中。如溶液有颜色，临用时加入少许活性炭加热至 80℃并进行过 滤，即可脱色。 ⑷ 盐酸α—萘胺溶液：取 0.2g 盐酸α—萘胺溶于 20ml 水中，加浓盐酸 0.5ml，微热溶解，加水稀释至 100ml。贮存于棕色瓶中。如有颜色，可用活性炭 脱色。 ⑸ 醋酸钠缓冲液：取 16.4g 无水醋酸钠，溶于 100ml 水中。 4、操作 取供试液 2ml，标准液 0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分别加入 50ml 大 试管中，加水稀释至 25ml。 于标准管和样品管中分别加入 0.5ml 醋酸钠缓冲液，1ml 对氨基苯磺酸溶液 和 1ml 盐酸α—萘胺溶液，摇匀放置 10min，以零管作参比，1cm 比色皿，于波 长 525nm 处测定吸光度。根据标准管各种浓度所测定的吸收度绘出标准曲线。 根据检液所测的吸收度从标准曲线上查出检液的含量（A），再算出样品中亚硝酸 盐的含量： 亚硝酸盐含量= A×100 2 × 1000 m ÷1000（mg/kg）= 50A m 式中：A——样品管测得的含量（g）； m——称取样品质量（g）。 ㈡ 盐酸萘乙二胺法（国家标准法） 1、原理 在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应，生成重氮化合
物,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料,与标准系列比色定量 2、仪器与器皿 分光光度计,比色管。 3、试剂 (1)0.4%对氨基苯磺酸溶液:取04g对氨基苯磺酸溶于100m120%盐酸中, 贮存于棕色瓶中。如溶液有颜色,临用时加入少许活性炭加热至80℃C并进行过 滤,备用。一周内使用。 (2)0.3%盐酸萘乙二胺盐溶液:取0.2g盐酸萘乙二胺溶于100m水中。贮 存于棕色瓶中。一日内使用 (3)亚硝酸钠标准液:精确称取.l00g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸 钠,加水溶解,置于500ml容量瓶中,加水稀释至刻度,此液每ml相当于200ug (4)亚硝酸钠标准使用液:吸取亚硝酸钠标准液500n,置于200m容量 瓶中,加水稀释至刻度。此液每m相当于5μgNO2-。 4、操作 取七只50m容量瓶按下表操作 6 标准液(ml) 000.51.01.5|2.02.5 样液(ml) 2.0 0.4%对氨基苯磺酸溶液(ml) 2.0 混匀,静置3~5min。 0.2%盐酸萘乙二胺盐溶液(m) 10 蒸馏水 至50ml。 混匀,静置15min。以零管调零,于波长538nm处测定吸光度,以吸光度 为纵坐标,各标准液中所含NO2.质量为横坐标,绘制标准曲线,或计算回归方 程,根据样液的吸光度,求样液中亚硝酸盐的含量
5 物，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准系列比色定量。 2、仪器与器皿 分光光度计，比色管。 3、试剂 ⑴ 0.4%对氨基苯磺酸溶液：取 0.4g 对氨基苯磺酸溶于 100ml20%盐酸中， 贮存于棕色瓶中。如溶液有颜色，临用时加入少许活性炭加热至 80℃并进行过 滤，备用。一周内使用。 ⑵ 0.2%盐酸萘乙二胺盐溶液：取 0.2g 盐酸萘乙二胺溶于 100ml 水中。贮 存于棕色瓶中。一日内使用。 ⑶ 亚硝酸钠标准液：精确称取 0.1000g 于硅胶干燥器中干燥 24h 的亚硝酸 钠，加水溶解，置于 500ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，此液每 ml 相当于 200g NO2-。 ⑷ 亚硝酸钠标准使用液：吸取亚硝酸钠标准液 5.00ml，置于 200ml 容量 瓶中，加水稀释至刻度。此液每 ml 相当于 5g NO2-。 4、操作 取七只 50ml 容量瓶按下表操作： 管 号 0 1 2 3 4 5 6 标准液（ml） 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 样液(ml) 2.0 0.4%对氨基苯磺酸溶液(ml) 2.0 混匀，静置 3~5min。 0.2%盐酸萘乙二胺盐溶液(ml) 1.0 蒸馏水 至 50ml。 混匀，静置 15min。以零管调零，于波长 538nm 处测定吸光度，以吸光度 为纵坐标，各标准液中所含 NO2-质量为横坐标，绘制标准曲线，或计算回归方 程，根据样液的吸光度，求样液中亚硝酸盐的含量
5、结果计算 50A 亚硝酸盐含量(mgkg) A×1001000 2 ÷1000(mg/kg) 式中:A—一样品管测得的含量(pg); m—一称取样品质量(g)。 四、亚硝酸盐的定性分析 亚硝酸盐的定性分析方法,常用格利斯法和联苯胺一冰醋酸法,有时也用 安替比林法。 ()对氨基苯磺酸重氮法(格利斯法, Griess法) 1、原理亚硝酸盐在弱酸性条件下与对氨基苯磺酸反应,生成重氮化盐后, 再与α一萘胺偶合形成紫红色染料。 2、试剂 (1)对氨基苯磺酸溶液:取0。5g对氨基苯磺酸溶于150ml30%醋酸中。 (2)α一萘胺溶液:取0.lg一萘胺溶于20m水中,过滤,滤液加入150ml30 醋酸,混匀 (3)格利斯试液:将(1)和(2)等量混合。 3、操作:取供试液1滴于白磁板上,加入1~2滴格利斯试液,如含亚硝酸 盐,则出现紫红色。 联苯胺一冰醋酸法 1、原理在酸性溶液中,亚硝酸盐能将联苯胺重氮化,然后水解并氧化成 棕色的联苯醌。用以鉴定有无亚硝酸盐存在 2、试剂 01%联苯胺一冰醋酸溶液:取θ.lg联苯胺溶于lom冰醋酸中,加水稀释至 l00ml。 3、操作取供试液1滴于白磁板上加联苯胺一冰醋酸溶液1滴,如含亚硝 酸盐,则出现棕红色。 白安替比林法 6
6 5、结果计算 亚硝酸盐含量（mg/kg）= A×100 2 × 1000 m ÷1000（mg/kg）= 50A m 式中：A——样品管测得的含量（g）； m——称取样品质量（g）。 四、亚硝酸盐的定性分析 亚硝酸盐的定性分析方法，常用格利斯法和联苯胺—冰醋酸法，有时也用 安替比林法。 ㈠ 对氨基苯磺酸重氮法（格利斯法，Griess 法） 1、原理 亚硝酸盐在弱酸性条件下与对氨基苯磺酸反应，生成重氮化盐后， 再与—萘胺偶合形成紫红色染料。 2、试剂 ⑴ 对氨基苯磺酸溶液：取 0。5g 对氨基苯磺酸溶于 150ml30%醋酸中。 ⑵ —萘胺溶液：取 0.1g—萘胺溶于 20ml 水中，过滤，滤液加入 150ml30% 醋酸，混匀。 ⑶ 格利斯试液：将⑴和⑵等量混合。 3、操作：取供试液 1 滴于白磁板上，加入 1~2 滴格利斯试液，如含亚硝酸 盐，则出现紫红色。 ㈡ 联苯胺—冰醋酸法 1、原理 在酸性溶液中，亚硝酸盐能将联苯胺重氮化，然后水解并氧化成 棕色的联苯醌。用以鉴定有无亚硝酸盐存在。 2、试剂 0.1%联苯胺—冰醋酸溶液：取 0.1g 联苯胺溶于 10ml 冰醋酸中，加水稀释至 100ml。 3、操作 取供试液 1 滴于白磁板上加联苯胺—冰醋酸溶液 1 滴，如含亚硝 酸盐，则出现棕红色。 ㈢ 安替比林法
1、原理在酸性条件下,亚硝酸盐使安替比林亚硝酸基化,溶液呈绿色 2、试剂 安替比林溶液:取5g安替比林,溶于100ml2N硫酸中 3、操作取供试液2滴于滴板上,加安替比林液2滴。如出现绿色,示有 亚硝酸盐存在 7
7 1、原理 在酸性条件下，亚硝酸盐使安替比林亚硝酸基化，溶液呈绿色。 2、试剂 安替比林溶液：取 5g 安替比林，溶于 100ml2N 硫酸中。 3、操作 取供试液 2 滴于滴板上，加安替比林液 2 滴。如出现绿色，示有 亚硝酸盐存在
第二节氰化物的分析 概述 氰化物系指含氰基(CN)的化合物。植物中的氰化物是以甙(配糖体)形 式存在的氢氰酸有机衍生物(即氰甙)。如苦杏仁中的苦杏仁甙;高梁和玉米新 鲜幼苗中的蜀黍甙。氰甙本身无毒性,但当其水解释放出游离的HCN后,就会 引起动物中毒。 ()氰甙水解产生氢氰酸的途径 氰甙水解产生氢氰酸的途径有两条 1、酶解含氰甙的植物中都存在水解酶。在完整的植物体内,由于氰甙与 其水解酶存在于同一器官的不同细胞中,氰甙不会受到水解酶的作用,故植物中 不存在游离的氢氰酸。只有当植物完整的细胞受到破坏,氰甙与其水解酶接触, 水解反应才回迅速进行 氰甙首先在β-葡萄糖甙酶的作用下,其糖甙键水解产生αx羟腈和葡萄糖。α 羟腈在羟腈裂解酶作用下裂解,释放出氢氰酸和相应的羰基化合物。 2、稀酸水解氰甙的β-糖甙键对酸不稳定,可被稀酸破坏,产生糖和α-羟 腈,后者由于性质不稳定,可进一步分解产生氢氰酸和相应的羰基化合物。 酶解与稀酸水解两者产物相同。 白富含氰甙的植物和青饲料 木薯、髙粱和玉米的幼苗、亚麻、络麻、海南刀豆、狗爪豆以及蔷薇科植物 (如桃、梨、梅、杏、枇杷、樱桃等)的叶子和种子。 氰甙中毒机理 氰基是一种非特异性的酶抑制剂,能抑制细胞内多种含金属离子的酶系统, 如细胞色素氧化酶、过氧化氢酶、接触酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶等共40 多种酶,其中最显著的是细胞色素氧化酶 氰基抑制细胞色素氧化酶的机制是氰基能迅速地同氧化型细胞色素氧化酶 的辅基三价铁离子结合,使其不能转变为具有二价铁离子辅基的还原型细胞色素
8 第二节 氰化物的分析 一、概述 氰化物系指含氰基（CN）的化合物。植物中的氰化物是以甙（配糖体）形 式存在的氢氰酸有机衍生物（即氰甙）。如苦杏仁中的苦杏仁甙；高梁和玉米新 鲜幼苗中的蜀黍甙。氰甙本身无毒性，但当其水解释放出游离的 HCN 后，就会 引起动物中毒。 ㈠ 氰甙水解产生氢氰酸的途径 氰甙水解产生氢氰酸的途径有两条： 1、酶解 含氰甙的植物中都存在水解酶。在完整的植物体内，由于氰甙与 其水解酶存在于同一器官的不同细胞中，氰甙不会受到水解酶的作用，故植物中 不存在游离的氢氰酸。只有当植物完整的细胞受到破坏，氰甙与其水解酶接触， 水解反应才回迅速进行。 氰甙首先在-葡萄糖甙酶的作用下，其糖甙键水解产生-羟腈和葡萄糖。- 羟腈在羟腈裂解酶作用下裂解，释放出氢氰酸和相应的羰基化合物。 2、稀酸水解 氰甙的-糖甙键对酸不稳定，可被稀酸破坏，产生糖和-羟 腈，后者由于性质不稳定，可进一步分解产生氢氰酸和相应的羰基化合物。 酶解与稀酸水解两者产物相同。 ㈡ 富含氰甙的植物和青饲料 木薯、高粱和玉米的幼苗、亚麻、络麻、海南刀豆、狗爪豆以及蔷薇科植物 （如桃、梨、梅、杏、枇杷、樱桃等）的叶子和种子。 ㈢ 氰甙中毒机理 氰基是一种非特异性的酶抑制剂，能抑制细胞内多种含金属离子的酶系统， 如细胞色素氧化酶、过氧化氢酶、接触酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶等共 40 多种酶，其中最显著的是细胞色素氧化酶。 氰基抑制细胞色素氧化酶的机制是氰基能迅速地同氧化型细胞色素氧化酶 的辅基三价铁离子结合，使其不能转变为具有二价铁离子辅基的还原型细胞色素
氧化酶,从而丧失传递电子、激活分子氧的作用,阻止组织对氧的吸收,破坏组 织内的氧化过程,导致机体内缺氧症。 口服氢氰酸2.3mgKg体重即可致死。对牛、马来说,采食含氰甙594%的 木薯块根皮1~1.5Kg即可引起死亡。空气中氢氰酸浓度超过0.2ng/L也可致死 所以,在做氰化物分析时应予以注意。 氢氰酸中毒发病迅速,当动物过食含氰甙的饲料15~20min,即可发生中毒 现象。中毒家畜表现为呼吸困难、呕吐、流涎、肌肉痉挛,可视粘膜鲜红色。剖 检血液鲜红色,胃肠有出血性炎症。(亚硝酸盐:高度呼吸困难,肌肉震颤,皮 肤呈鸟青色,粘膜发绀,血液暗红色,凝固不良。 饲料中氰化物的卫生标准 饲料中氰化物允许含量,在我国国家饲料卫生标准中作了规定( 饲料名称 氰化物允许量(mgkg) 木薯干 ≤100 胡麻饼粕 ≤350 鸡配合饲料 ≤50 猪配、混合饲料 ≤50 样品处理 由于干扰氰化物测定的物质很多,如金属离子、脂肪酸、硫化物、硫氰酸盐、 甘氨酸、尿素、氧化剂、还原剂等。因此,一般样品都用蒸馏法处理以除去干扰 物质后再进行测定。一些干扰物如用蒸馏法未能除去时,可在蒸馏前加入专门试 剂消除干扰,如脂肪酸可在pH6~7时,用异辛烷(己烷或氯仿)萃取;氧化剂 用亚硫酸钠还原等,然后再蒸馏处理 操作方法:取样品12g于500ml蒸馏瓶中,加水100ml,加酒石酸2g,然 后进行水蒸汽蒸馏,以装有5m0.IN氢氧化钠的100m容量瓶作接受瓶,蒸馏至 刻度,溜液供分析。 注意:氢氰酸是剧毒的挥发性毒物,因此,整个蒸馏装置应密闭,接受瓶最 9
9 氧化酶，从而丧失传递电子、激活分子氧的作用，阻止组织对氧的吸收，破坏组 织内的氧化过程，导致机体内缺氧症。 口服氢氰酸 2.3mg/Kg 体重即可致死。对牛、马来说，采食含氰甙 59.4%的 木薯块根皮 1～1.5Kg 即可引起死亡。空气中氢氰酸浓度超过 0.2mg/L 也可致死， 所以，在做氰化物分析时应予以注意。 氢氰酸中毒发病迅速，当动物过食含氰甙的饲料 15～20min，即可发生中毒 现象。中毒家畜表现为呼吸困难、呕吐、流涎、肌肉痉挛，可视粘膜鲜红色。剖 检血液鲜红色，胃肠有出血性炎症。（亚硝酸盐：高度呼吸困难，肌肉震颤，皮 肤呈乌青色，粘膜发绀，血液暗红色，凝固不良。） ㈣ 饲料中氰化物的卫生标准 饲料中氰化物允许含量，在我国国家饲料卫生标准中作了规定（。 饲 料 名 称 氰化物允许量（mg/kg） 木薯干 ≤100 胡麻饼粕 ≤350 鸡配合饲料 ≤50 猪配、混合饲料 ≤50 二、样品处理 由于干扰氰化物测定的物质很多，如金属离子、脂肪酸、硫化物、硫氰酸盐、 甘氨酸、尿素、氧化剂、还原剂等。因此，一般样品都用蒸馏法处理以除去干扰 物质后再进行测定。一些干扰物如用蒸馏法未能除去时，可在蒸馏前加入专门试 剂消除干扰，如脂肪酸可在 pH6～7 时，用异辛烷（己烷或氯仿）萃取；氧化剂 用亚硫酸钠还原等，然后再蒸馏处理。 操作方法：取样品 12g 于 500ml 蒸馏瓶中，加水 100ml，加酒石酸 2g，然 后进行水蒸汽蒸馏，以装有 5ml0.1N 氢氧化钠的 100ml 容量瓶作接受瓶，蒸馏至 刻度，溜液供分析。 注意：氢氰酸是剧毒的挥发性毒物，因此，整个蒸馏装置应密闭，接受瓶最
好放在冰浴中,瓶中预先加适量碳酸钠或氢氧化钠溶液,以使氢氰酸形成氰化钠 而减少挥发损失。 另外,氰化物性质不稳定,易反应生成氢氰酸而挥发,故样品应及时采集 尽快分析。 三、定性分析 氰化物的定性方法,常用普鲁士蓝法和苦味酸试纸法 ()普鲁士蓝法 本法灵敏度较高,常作为氰化物的确证试验。 1、原理氰化物在酸性,水解产生氢氰酸,氢氰酸在碱性溶液中,与亚铁 离子作用生成亚铁氰化钠,用盐酸酸化,进一步与三氯化铁反应,生成蓝色的亚 铁氰化铁,即普鲁士蓝,借以鉴定氰化物的存在。 2、试剂 (1)10%酒石酸溶液 (2)20%硫酸亚铁溶液(需临时配制); (3)10%氢氧化钠溶液; (4)10%盐酸; (5)1%三氯化铁溶液。 3、操作 取样品5~10g于150ml锥形凭中,加蒸馏水20~30ml调成糊状,再加入 5m110%酒石酸使呈酸性,立即于瓶口盖一滤纸,并迅速于滤纸中央滴加1~2滴 新配制的20%硫酸亚铁溶液,稍干后,再加1~2滴10%氢氧化钠溶液,然后将锥 形瓶置于60℃的热水中,加热20~30min,取下滤纸,在滤纸上滴加10%盐酸 滴、1%三氯化铁溶液1滴。如有氰化物存在,滤纸出现蓝色斑点。 苦味酸试纸法 1、原理氰化钠在酸性条件下,水解生成氢氰酸气体,与苦味酸试纸作用, 生成红色的异氰紫酸钠,可作定性鉴定
10 好放在冰浴中，瓶中预先加适量碳酸钠或氢氧化钠溶液，以使氢氰酸形成氰化钠 而减少挥发损失。 另外，氰化物性质不稳定，易反应生成氢氰酸而挥发，故样品应及时采集， 尽快分析。 三、定性分析 氰化物的定性方法，常用普鲁士蓝法和苦味酸试纸法。 ㈠ 普鲁士蓝法 本法灵敏度较高，常作为氰化物的确证试验。 1、原理 氰化物在酸性，水解产生氢氰酸，氢氰酸在碱性溶液中，与亚铁 离子作用生成亚铁氰化钠，用盐酸酸化，进一步与三氯化铁反应，生成蓝色的亚 铁氰化铁，即普鲁士蓝，借以鉴定氰化物的存在。 2、试剂 ⑴ 10%酒石酸溶液； ⑵ 20%硫酸亚铁溶液（需临时配制）； ⑶ 10%氢氧化钠溶液； ⑷ 10%盐酸； ⑸ 1%三氯化铁溶液。 3、操作 取样品 5～10g 于 150ml 锥形凭中，加蒸馏水 20～30ml 调成糊状，再加入 5ml10%酒石酸使呈酸性，立即于瓶口盖一滤纸，并迅速于滤纸中央滴加 1～2 滴 新配制的 20%硫酸亚铁溶液，稍干后，再加 1～2 滴 10%氢氧化钠溶液，然后将锥 形瓶置于 60℃的热水中，加热 20～30min，取下滤纸，在滤纸上滴加 10%盐酸 2 滴、1%三氯化铁溶液 1 滴。如有氰化物存在，滤纸出现蓝色斑点。 ㈡ 苦味酸试纸法 1、原理 氰化钠在酸性条件下，水解生成氢氰酸气体，与苦味酸试纸作用， 生成红色的异氰紫酸钠，可作定性鉴定
