ver 国 第十章色谱 1958 第三节高效液相色谱法 (High Performance Liquid Chromatography,HPLC) 主讲教师：吕超 北京化工大学理学院
第十章 色谱 第三节 高效液相色谱法 （High Performance Liquid Chromatography,HPLC） 北京化工大学理学院 主讲教师：吕超
主要内容 国 >高效液相色谱法的特点 >流程及主要部件 >固定相和流动相 >主要分离类型 >影响分离的因素
2 主要内容 高效液相色谱法的特点 流程及主要部件 固定相和流动相 主要分离类型 影响分离的因素
高效液相色谱的定义 sity of Che 1958 以液体作为流动相的色谱过程
3 以液体作为流动相的色谱过程 高效液相色谱的定义
高效液相色谱法的特点 y of Che 高压 150~350x105 Pa 高效 -一- 3万塔板/米 高灵敏度-一- 10-910-11g 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法
4 高压 --- 150 ~ 350 x 105 Pa 高效 --- 3万塔板/米 高灵敏度 --- 10-9-10-11 g 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法 一 、 高效液相色谱法的特点
GC与HPLC比较 sity of Che 国 195 GC HPLC 流动相 惰性气体（无亲和性，只 不同极性的液体（有一 起运载作用) 定亲和作用) 气体、沸点较低的化合物 高沸点、不稳定的天 分析对象 然产物、生物大分子、 高分子化合物 温度 较高 般室温
5 GC HPLC 流动相 惰性气体（无亲和性，只 起运载作用） 气体、沸点较低的化合物 不同极性的液体（有一 定亲和作用） 温 度 较 高 一般室温 分析对象 高沸点、不稳定的天 然产物、生物大分子、 高分子化合物 GC与HPLC比较
二、高效液相色谱法的类型 国 (一)分配色谱 (二)吸附色谱 (三)离子交换色谱法 (四)排阻色谱法
6 二、高效液相色谱法的类型 （一）分配色谱 （二）吸附色谱 （三）离子交换色谱法 （四）排阻色谱法
1、分配色谱法（Partition Chromatography) 198 液液分配色谱(LLPC) 液体固定相通过物理 分配色谱 吸附固定于载体表面 键合固定相分配色谱(LSPC) 有机分子通过化学反 应键合到载体表面
7 分配色谱 液液分配色谱(LLPC) 键合固定相分配色谱(LSPC) 液体固定相通过物理 吸附固定于载体表面 有机分子通过化学反 应键合到载体表面 1、分配色谱法（Partition Chromatography）
分配色谱分离原理 Li 国 195 不同组分在两相间分配系数不同
8 分配色谱分离原理 不同组分在两相间分配系数不同
分配色谱固定相 ver 1958 固定相 物理吸附 (担体+固 定液) 全多孔型担体 薄壳型微珠担体 固定相 --- 化学键合 R 一一极性基团疏水基团 离子交换基团 Si Si-O-Si(CHg)2R O HCI CI Si(CH3)2R 0 Si OH SiO-Si(CH3)2R
9 固定相 --- 物理吸附 （担体 + 固 定液） 全多孔型担体 薄壳型微珠担体 固定相 --- 化学键合 Si Si O O O HCl Si Si O OH OH Cl Si(CH3 )2R Si Si O O O Si(CH3 )2R Si(CH3 )2R R --- 极性基团 疏水基团 离子交换基团 分配色谱固定相
固定相的化学构造 国国 非键合相表面 AI-OH 键合相表面 ODC C18 0-Si(CH?17CH3 (CH32 Ca ⊙i-0-Si(CH,cH3 (CH2 c ⊙i-0-i(CH3 @t-0-sicH,26“s Phenyl (CHj)2 I--Si(CHNH3 -NH2 (CH2 ⊙i-0-Si(CH,,cN -CN OH (CH)2 ○i-0-5icH2gHcH,0H OH (CH),OH 10
10 固定相的化学构造 非键合相表面 键合相表面 ODC C18 C8 C1 Phenyl -NH2 -CN OH OH