园泰山医学院 省级精品课程申报 实验指导 实验采取每组34人制，在专门的实验指导老师指导下完成实验操作。学生在实验前后需 要撰写实验预习报告、实验记录和实验报告：由任课老师对实验报告进行批改并对学生讲解， 并计入期终考试成绩， 药理学实验采用药理学教研室主编《药理学实验讲义》教材。 实验课实验项目表 实验序号 内容 实验学时 备注 实验一 1.药理学实验研究 2录像：实验动物基本操作技术等 3 必开实验 实验二 1.戊巴比妥钠半数有效量测定 必开实验 2.硫酸镁导泻实验 实骏 呋塞咪和高渗葡萄糖对家免的利尿作用 必开实验（综合性） 实验四药物对麻醉动物血压的影响 3 必开实验（综合性） 实验五体外溶血实验、硫酸链霉素毒性实验 3 必开实验（设计性） 实验六 普萘洛尔提高心肌耐缺氧能力的作用 必开实验（设计性） 1利多卡因对氯化钡诱发心律失常的治疗作 3 2.甲硝唑药动学参数测定 综合性 3 3.有机磷药物中毒及解牧： 哌替啶和乙酰水杨酸的镇痛作用 3 实验七、八 4,香丹注射液对垂体后叶素致家免心肌缺血 3 设计性 的保护作用 5.肝功能对药物作用的彪响 3 6.处方、病例讨论 3 7录像：中枢神经系统药物实验方法：化分 药物实验研究：糖皮质激素类药物实验研究 总学时 24 实验一药理学实验研究简介、实验动物基本操作技术 实验二戊巴比妥钠半数有效量(ED)的测定 【目的】 测定戊心比妥钠腹腔注射对小鼠催眠作用的ED值。 【原理】 戊巴比妥钠为心比妥类镇静催眠药，用适当剂量给小鼠腹腔注射后产生的催眠效应，常用翻正反射的消
@泰山医学院 Medical Universit 省级精品课程申报 失来判断。该指标仪有阳性（催眠）和阴性（个催眠）两种现象，属于质反应。 质反应量效曲线的横座标为对数剂量，而纵坐标采用阳性反应发生的频数时，一般为常态分布曲线。如 改用累加阳性频数为纵坐标时，可以得到标准S型曲线。该曲线的中央部分(50%反应处)接近一条直线。 斜度最大，其相应的剂量也就是能使群体中半数个体出现某一效应的剂量，通常称为半数效应量，如效应为 疗效，则称半数有效量(ED):效应为死亡，则称为半数致死量(LD0)。这些数值是表达药物作用强度 的重要参数。 测定ED0和LD和的方法基本一致，只是所观察的指标不同。前者以药效为指标，后者以动物死亡为指 标。常用的测定方法有Bliss法（正规机率单位法），Litchfield-Wilcoxon机率单位图解法，Kaerber面积法， 孙瑞元改进的Kacrber法（点斜法）及Dixon-Mood法（序贯法）等，其中孙氏改进的Kaerber法因其简捷性 和精确性史为常用。 孙氏改进的的Kaerber法的设计条件是：各级实验动物数相等，各组剂量呈等比数列，各组动物的反应 率大致符合常态分布。若以Xm为最大反应率组剂量的对数，i为组间剂量比的对数，P为各组反应率，Pm 为最高反应率，Pm为最低反应率，n为每实验组动物数。 EDso=lg[Xm-i (P-0.5)ti/4 (1-Pm-Pn)1 (2-) 含0%反应率时： ED0=1g'[Km-i(P-0.5)1 (2-2) ED0的95%可信限=1g(1gED50士1.96·S) (2-3) 其中S= 【材料】 1.动物：小鼠60只，体重18-24g。 2.药品：戊巴比妥钠溶液(sodium pentobarbital solution)2.00mgml、2.40mgml、2.89mgml、4.16mg/ml. 5.00mg/ml. 3.器材：小鼠笼，天平，0.5ml或0.25ml注射器. 【方法】 1.确定给药剂量：先以少量动物做预试验，以获得小鼠对戊巴比妥纳催眠反应为100%的最小剂量 (ED1)和反应率为0%的最大剂量(ED)。然后在此剂量范围内，按等比数列分成几个剂量组（一般4-8 组)，各组剂量的公比()为： ED100 EDo 求得r后，自第一剂量组(ED)开始乘以，可得相邻的下一个组的剂量。若共分为6个组，各组剂量分别 为EDa、rEDo、rEDo、EDo、EDo、rEDO 2.给药：取体重18-22g的健康小鼠60只，查附录4，随机分为6个组，每组10只.按表10一3所列 的各月给药浓度分别腹腔注射10mlkg:
网泰山医学院 省级精品课程申报 3.记录结果：以翻正反射消失为入睡指标，观察药物的催眠效应，记录各组腹腔注射后15m内睡眠鼠 数，填入表2。 【结果整理】依表2所列，分别计算各组P和P2。再按(2-2)或(2-3)式计算ED0及ED0的95%可信限。 表2戊巴比妥钠ED0计算用表 药物浓度 给药剂量 组别小鼠数 对数剂量 催晒 P （mg/ml) (mg/kg) 限数 30 13010 28g 289 1460 45 347 1.5398 50.0 1609 【注意本项】 1,若用50只小鼠，随机分为5个剂量组进行实验，各组动物可参照20mgkg,25mgkg、31mgkg、39mgkg、 49mgkg给药，（药物浓度为2.45mgml、1.96mgml、1.57mg/ml、125mgml、1.00mgml)以20mlkg腹腔注 射。 2随机分组时，可先称各个小鼠体重，将体重相同小鼠放一笼，分别做好标记。再按确定组数查随机数 字表分组，使各组半均体重及体重分布尽可能一致。 3.本实验为定量实验，注射量必须准确。给药后要仔细观察药物反应，但不可过多翻动小鼠，以免影响 实验结果。 【讨论题】测定ED0的意义何在？ 实验三硫酸镁对小鼠的导泻作用 【目的 观察硫酸镁对肠管活动的影响，分析其导泻作用机理。 原理 口服硫酸镁后，因Mg+、SO2不易被胃肠吸收，在肠管内形成高渗透压，阻止水分的吸收， 使肠腔容积增大，从而刺激肠壁，引起肠推进性蠕动增强，呈现导泻作用。本实验以墨汁为指 示剂，通过肠膨胀、肠蠕动、粪便性状及墨汁在肠道内的推进速度等指标，观察了硫酸镁的导 泻作用。 材料 1.动物：小鼠16只，体重18-24g 2.药品：墨汁氯化钠溶液、10%墨汁硫酸镁溶液。 3.器材：小鼠笼，小鼠灌胃管，小剪刀，眼科镊子，尺子，搪瓷盘。 【方法]
图泰山医学院 省级精品课程申报 1.禁食与给药：每组取已禁食6-8h体重相似的小鼠2只，其中1只灌胃墨汁氯化钠，另 只灌胃墨汁硫酸镁，剂量为0.2m/10g。 2.观察结果：20min或30mim后，将小鼠颈椎脱白处死，立即剖腹暴露胃肠，比较两鼠肠 蠕动及膨胀情况。然后分离幽门至直肠的肠系膜，将肠拉直，测量幽门至墨汁前沿的距离及幽 门至直肠末端的距离，并计算二者的比值。最后剪开肠腔，观察各鼠粪便性状有何不同。 【结果整理] 将观察结果填入表3中，分析硫酸镁的作用。 表3硫酸镁对小鼠肠道的作用 观察项目 给药鼠 对照鼠 肠蠕动情况 肠膨胀情况 幽门-墨汁前沿距离 啪门-直肠木端距离 二者之比 粪便性状 注意事项 1给药量力求准确，实验操作时间尽量一致，以减少条件不同带来的误差 2.分离肠系膜及测量肠段时应轻拉，以免影响肠内容物的观察， 3.指示剂也可选择卡红或炭末等。 讨论题1 硫酸镁的导泻作用原理及临床应用。 实验四呋塞咪和高渗葡萄糖对家兔的利尿作用 【目的】 观察呋塞咪和高渗葡萄糖对家免尿量及电解质排泄的影响 【原理】 利尿药和脱水药均可引起动物尿量增加，但其作用机理及作用强度不同。利尿药的利尿效 力与Na、C「的排泄量是一致的，而高渗葡萄糖则不同，通过测定尿中离子浓度可加以鉴别。 【材料】
@秦山医学院 省级精品课程申报 1.动物：家兔12只。 2.药品：10mgml失塞咪溶液(furoseoide solution):0.5gml葡萄糖溶液(glucose solution): 30mg/ml戊巴比妥钠溶液(sodium pentobarbital solution):生理盐水(normal saline)。 3.器材：免手术台，磅秤，手术器械，开口器，导尿管，膀胱套管，注射器，量筒烧杯，滴定 管，滴定管夹，铁支架，三角烧瓶，1ml吸管，滴管等。 【方法】 1.灌水：取家兔12只，于实验前30min,按30mkg分别给兔灌水，然后随机分为甲、乙、丙 3组。 2.麻醉：在兔耳外缘静脉注射30mgml戊巴比妥钠溶液1mlkg(30mgkg)。麻醉后将兔仰位固 定于手术台上。 3,插膀胱套管：下腹部剃毛，在耻骨联合上缘沿正中线做长约5cm的皮肤切口再沿腹白线剪 开腹壁及腹膜，暴露膀胱在其腹侧面避开血管作一长1cm的切口，插入己充满液体的膀胱套管 (应对淮输尿管口)。然后结扎固定，松开夹在套管橡皮管上的血管钳，尿液即经橡皮管滴出。 将膀胱回纳腹腔（切勿扭曲），用盐水纱布覆盖切口。 4.甲组静脉注射10mg/ml速尿溶液0.5mlkg(5mgkg:乙组静脉注射0.5g/ml的葡萄糖溶液 3mlkg(1.5gkg):丙组静脉注射生理盐水3mlkg。给药后每隔5min收集一次尿液，连续6次， 合并各次尿液，记录药后3min总尿量，并测定尿中Cr或Na的含量（测定方法见附1、2）. 【结果整理】 1.综合各组实验数据，计算不同时间尿量的均数(X)及标准差(SD),并将尿量及尿中离子 测定结果填入表4内 表10-8 药物对家免尿量及尿中高子含量的影响（仅SD) 药后尿量（1） 总尿C1量 5m1n10m1n15m1n20m1n25m1n30m1n总尿量(ag/m1)(mg) 10amg/m1速尿 0.5g/m1葡萄糖 生理盐水 2.以尿量为纵座标，时间为横座标作直方图 注：本实验亦可选用下列方法： 输尿管插管法：将免剖腹暴露膀胱后，在其底部两侧找出输尿管，轻轻分离一侧输尿管，近膀 胱处结扎。在其上端输尿管壁剪一小口，向肾脏方向插入一细塑料管，结扎固定后收集尿液
@泰山医学院 省级精品课程申报 兔导尿管法：选用维性家兔，麻醉后由尿道插入导尿管（管顶端应先涂抹液体石蜡，以保证顺 利插入)，压迫下腹排空膀胱后再收集尿液 附1尿中氯离子测定法 【原理】先用硝酸银(AgNO)结合尿中氯离子(Cr),略过量的硝酸银便与铬酸钾(K2CO) 作用，生成桔红色的铬酸银(AgCO4)。以消耗硝酸银的多少来计算尿中氯离子含量。反应式 如下： +agC1+aN 2AgN03+K2Cr0a—→Ag2Cr04↓+2XN02 【试剂】 1.硝酸银标准液（每ml相当于C10.606mg):准确称取硝酸银2.9063g,置1000ml容量瓶中， 加少许蒸馏水溶解，再加蒸馏水至刻度。 2.0.29g/ml铬酸钾溶液：取铬酸钾20g,以新鲜蒸馏水溶解并稀释至100ml。 【方法】用吸量管准确吸取尿液ml,置于三角烧瓶内，再加蒸馏水10ml和0.29g/ml的铬酸 钾2滴，摇匀。读出并记录滴定管内硝酸银的ml数。向三角烧瓶内慢慢滴入硝酸银标准液，边 滴边摇。至原颜色渐退时，一滴一滴缓慢加入，直至出现不退色的桔红色。读出滴定管内所余 硝酸银的数量，计算出硝酸银消耗的ml数。计算公式为： C1~含量(ag/al)=滴定时消耗硝酸银标准液的m1数×0.606 总尿c1量=30ain内尿量(al)×c1含量(ag/al) 附2尿钠测定（比浊法）： 【原理】用无水乙醇沉淀尿中蛋白，得出无蛋白尿滤液，与焦性锑酸钾(K(Sb(OH%)作用 生成焦性锑酸钠沉淀，与标准管比较求尿钠含量。其化学反应式如下： NaCl+K[Sb(OH)J- →[S5(OHa】+Kc 【试剂】 1.20mg/ml焦性锑酸钾溶液：称取焦性锑酸钾(KSb(O6])10g溶于沸蒸馏水500ml内：煮 沸3~5min,流水冷却，加100mgml氢氧化钾15ml,过滤后储存于塑料瓶或涂有石蜡的棕色 玻璃瓶中备用。 2.钠标准液(1ml0.15mg钠)：取分析纯氯化钠置于110~120℃烤箱内烘烤15h以上。称取 此干燥氯化钠0.3815g,用50ml蒸馏水溶解，再以无水乙醇加至1000ml并充分混匀
网泰山医学院 省级精品课程申报 3.无水乙醇 【方法】取尿0.1ml加入无水乙醇1.9ml后用力震摇。放置10min,离心沉淀蛋白，取上清液按 下法操作： 比浊法尿钠测定操作顺序表 测定管标准管空白管 尿上清液(m1) 0.5 钠标准液(@) 0.5 墓窗水(1) 、 0.5 2%焦性佛酸钾（▣1） 55 5 注：焦性锑酸钾需对准管底吹入，操作完毕后混匀，立即比浊，以空白管调零点，波长520m。 计算： 测定管光密度0.075 尿Na*含量(g/ml) 标准管光密度0.025 总尿Na(og)=尿Na含量(eg/al)×30ain尿量(ml) 式中：0.075表示标准液中实际含钠数(1ml=0.15mg钠，0.5ml=0.075ml钠)：0.025表示测定液 含尿量(0.1ml尿加无水乙醇1.9ml,稀释至2ml,实际仅取0.5ml供测定用，故为0.025)。 【注意事项】 1,尿液中加入无水乙醇后应用力振摇，以使之快速沉淀，且蛋白沉淀颗粒均匀。2.标准液应 临用现配，否则，光密度增高影响结果。 3.操作完毕后应立即比浊，否则，久置颗粒变粗姥响结果。 【讨论题】 1.利尿药和脱水药的定义，利尿作用及临床应用有何不同？ 2.比较各类利尿药对尿电解质排泄影响。 实验五药物对麻醉动物动脉血压的影响 [实验目的 1观察传出神经系统药物对动物（免、猫或大鼠）动脉血压的影响以及药物之间的相互作
@泰山医学院 省级精品课程申报 2.分析药物的作用机制。 【实验原理] 传出神经系统药物通过作用于心脏和血管平滑肌上相应的受体（激动和阻断受体）产生心 血管效应，导致动脉血压的变化 实验材料 1.动物：猫（体重3kg左右）或大鼠（体重400g左右）或兔（体重2~3kg左右）。 2.药品：0.01mg/ml、lmg/ml氯化乙酰胆碱溶液(acetylcholine chloride solution:0.5mg/ml 甲基硫酸新斯的明碱溶液(neostigmine methylsulfate solution):10mg/ml硫酸阿托品溶液(atropine sulfate solution):0.lmg/ml盐酸肾上腺素溶液(adrenaline hydrochloride solution):0.lmg/ml重 酒石酸去甲肾上腺素溶液(noradrenaline bitarteate soution):0.05mg/ml硫酸异丙肾上腺素溶液 (isoprenaline sulfate solution):0mg/ml甲a磺酸酚妥拉明溶液(phentolamine methamesulfonate solution):10nmg/ml盐酸普萘洛尔溶液(propranolol oution):30mg/ml戊巴比妥钠溶液(sodiun pentobarbital solution)或200mg/ml乌拉坦(urethane solution):50oU/ml肝素溶液(heparin solution):生理盐水(normal saline)。 3器材：BL410生物机能实验系统，手术台，手术器械，动脉插管，动脉夹，静脉插管（或 代有三通的头皮针)，气管插管，压力换能器，注射器(1ml、2m、20ml),三通活塞，纱布， 丝线，玻璃分针等。 方法脚 1.动物的麻醉与固定：取动物免（或猫或大鼠）1只，称重，耳缘静脉注射乌拉坦溶液1gkg (或30mgkg戊巴钠比妥溶液，猫30mgkg、大鼠40mg/kg),仰卧位固定于手术台上。 2.手术 ()气管插管用普通剪刀剪去颈部毛，正中切开颈部皮肤，分离气管，并做一倒T形切 口，插入气管插管并结扎固定，以保持呼吸畅通。 (2动脉插管在气管旁向下分离出一侧颈总动脉，将远心端用线节扎，近心端用动脉夹夹 闭，以阻断血流。在动脉夹与结扎线之间剪一v形口，向心方向插入与压力换能器相连并充满 肝素溶液的动脉插管（大鼠用细塑管），用线结扎固定。压力换能器与事先调试好的多媒体化生 物机能实验系统相连，打开动脉夹及换能器上的三通活塞，描记动脉血压变化情况。 3给药：在“记录状态”下，先记录一段正常血压曲线，然后依次由耳缘静脉分别注入下列 三组药物。每注入一种药物后，立即注入3ml生理盐水，将残留在管道内的药物全部输入到动 物体内。待血压基本恢复原水平或血压基本稳定后再注入下一种药物
网泰山医学院 省级精品课程申报 A组观察拟肾上腺素药对血压的作用及α-R阻断药对该作用的影响。 ①0.1mg/ml盐酸肾上腺素溶液10ugkg(0.1mkg) ②0.1mg/ml重酒石酸去甲肾上腺素溶液10ugkg(0.1mlkg) ③0.05mg/ml硫酸异丙肾上腺素溶液5ugkg(0.1mlg ①10mgml甲磺酸酚妥拉明溶液2mgkg(0.2mlg)缓慢注入 ⑤5min后，依次重复①、②、③ B组观察拟肾上腺素药对血压的作用及B-R阻断药对该作用的影响： ①0.1mgml盐酸肾上腺索溶液10ugkg(0.1mlkg) ②0.1mgml重酒石酸去甲肾上腺素溶液10μgkg(0.1mlkg) ③0.05mgml硫酸异丙肾上腺素溶液5μgkg(0.1mlkg) ④10mg/ml盐酸酚普萘洛尔溶液1mgkg(0.1mlg)缓慢注入 ⑤5mim后，依次重复①、②、③ C组：观察拟胆碱药对血压的作用及抗胆碱药对该作用的影响。 ①0.1mgml氯化乙酰胆碱溶液1μgkg(0.1mlkg） ②0.5mg/ml甲基硫酸新斯的明碱溶液50ugkg(0.1mlkg ③重复① ④10mg/ml硫酸阿托品溶液2mg/kg(0.2ml/kg) ⑤重复① ⑥1mgkg氯化乙酰胆碱溶液500gkg(0.5mlkg) 结果整理] 将描记血压曲线剪切、打印，分析药物作用。 【注意事项] 1.给药剂量可随动物实际反应情况酌情增减。 2.三组药物分别在三组动物上进行实验，效果更好。 3选用猫作实验的剂量与家兔基本相同。大鼠的剂量：肾上腺素30μgkg:去甲肾上腺素 30μgkg:异丙肾上腺素7.5ugkg:酚妥拉明3mgkg:普萘洛尔1.5mgkg:乙酰胆碱5μgkg:新 斯的明250ugkg:阿托品1mgkg 讨论题 根据实验结果，讨论所用药物对动物血压的影响及其作用机理
@泰山医学院 省级精品课程申报 实验六体外溶血实验 实验目的] 通过本实验认识溶血现象，并掌握溶血性试验的基本操作。 [实验原理] 溶血系指红细胞破裂、溶解的一种现象。多种中草药（如党参、桔梗、夹竹桃、远志、 三七等)含有皂苷，皂苷是一类表面活性剂，有很强的乳化力，具有溶血作用。另外，大 量输入低渗溶液以及含有某些甾体化合物的注射液也可以引起溶血。在溶血性检查中尚可 附带观察供试品有无红细胞凝集作用。 [实验材料] 家兔1只，体重2.53.0kg,唯雄不限（共采血之用）。 烧杯、竹签（去纤维蛋白用）、试管、试管架、滴管、吸管、离心机、恒温水浴。 5%远志煎剂或4%桔梗片煎剂。 方法与步骤剧 1.2%红细胞悬液的制备取新鲜兔血10一20ml,用竹签搅拌以除去纤维蛋白，再用生理 盐水冲洗3~5次。每次加生理盐水5~10ml,混匀后离心，弃去上清液，再加入生理盐水， 离心，直至上清液不呈红色为止。然后按所得红细胞的容积，用生理盐水配成2%的悬液： 2.取相同规格试管7支，编号，按表6依次加入各种溶液，第6管不加供试品，作为空白对 照，第7管不加供试品且用蒸馏水代替生理盐水，作为完全溶血对照。轻轻摇匀后置37℃ 的水浴中保温，观察0.5、1、2、3小时内各管的溶血情况 表6溶血实验加样表 试管 2 3 4 5 6 7 远志溶液(ml) 0.10.20.30.40.5 生理盐水(ml) 2.42.32.22.1 2.02.5 蒸馏水2.5 2%红细胞悬液(ml) 2.52.52.52.52.52.5 2.5 【结果处理] 全溶血：溶液澄明，红色，管底无红细胞残留 部分溶血：溶液澄明，红色或棕色，底部尚有少量红细胞残留。镜检红细胞稀少或变形。 不溶血：红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。镜检红细胞不凝集。 凝集：业不溶血，但出现红细胞凝集，经振摇后不能分散，或出现药物性沉淀