第六章酶分析 在生产实践和基础理论研究中往往离不开生化分 析,而酶分析是其中一个重要方面。酶分析包括两 种类型:一种是以酶为分析对象的分析,这就是通 常所说的酶活力测定”;一种是以酶为分析工具 或分析试剂的分析,一般可称为“酶法分析”。前 者的目的在于检知样品中某种酶的含量或活性,后 者则主要用于测定与生物学有关的样品中酶以外其 它物质的含量。二者检测的对象虽有所不同,但原 理和方法都是以酶能专一而高效地催化化学反应为 基础通过酶反应速度的测定而检测相应物质的含
第六章 酶分析 在生产实践和基础理论研究中往往离不开生化分 析，而酶分析是其中一个重要方面。酶分析包括两 种类型：一种是以酶为分析对象的分析，这就是通 常所说的‘酶活力测定”；一种是以酶为分析工具 或分析试剂的分析，一般可称为“酶法分析”。前 者的目的在于检知样品中某种酶的含量或活性，后 者则主要用于测定与生物学有关的样品中酶以外其 它物质的含量。二者检测的对象虽有所不同，但原 理和方法都是以酶能专一而高效地催化化学反应为 基础,通过酶反应速度的测定而检测相应物质的含 量
61酶活力测定 酶的含量和活性水平可通过特定系统的酶(促)反 应速度而加以测定 在进行这种测定时可采用两种方式 是测定完成一定量反应所需耍的时间; 二是测定单位时间内的酶促反应量。 前者常称为终点法,后者称为动力学法
6.1酶活力测定 酶的含量和活性水平可通过特定系统的酶(促)反 应速度而加以测定。 在进行这种测定时可采用两种方式： 一是测定完成一定量反应所需耍的时间； 二是测定单位时间内的酶促反应量。 前者常称为终点法，后者称为动力学法
终点法 这是在特定条件下,将样品中耍检测的酶作用 一定量的底物,然后根据反应进行到某、程度(即 达到某一指标所需要的时间长短来估计酶活力的 种方法。例如,工业生产α一淀粉酶时就是采 用这种方法
一 终点法 这是在特定条件下，将样品中耍检测的酶作用 一定量的底物，然后根据反应进行到某一程度(即 达到某一指标)所需要的时间长短来估计酶活力的 一种方法。例如，工业生产α—淀粉酶时就是采 用这种方法
二动力学法 1原理 这种测定法的原理是,在一定的条件下酶反 应速度和酶浓度成正比,因此测定酶反应速度就 可求得酶浓度
二 动力学法 1.原理 这种测定法的原理是，在一定的条件下，酶反 应速度和酶浓度成正比，因此测定酶反应速度就 可求得酶浓度
2.反应条件 选择反应条件的基本要求是,所有待测定的酶 分子都应该能够正常地发挥它的作用。这就是说, 反应系统中除了待测定的酶浓度时影响反应速度 的唯一因素外,其它因素都应处于最适于酶发挥 催化作用的水平 确定反应条件时应考虑以下因素 (1)底物;(2)Ph;(3)温度; (4)辅助因子;(5)样品
2. 反应条件 选择反应条件的基本要求是，所有待测定的酶 分子都应该能够正常地发挥它的作用。这就是说， 反应系统中除了待测定的酶浓度时影响反应速度 的唯一因素外，其它因素都应处于最适于酶发挥 催化作用的水平。 确定反应条件时应考虑以下因素: (1)底物；（2）Ph；（3）温度； (4)辅助因子；(5)样品
三测定方法 测定方法有取样法和连续法。 取样法是在酶反应开始后不同的时间,从反应 系统中取出一定量的反应液,并用适当的方法停 止其反应后,再根据产物和底物在化学性质上的 差别进行分析,求得单位时间内酶促反应变化量 的方法。 连续法则是基于底物和产物在物理化学性质上 的不同,在反应过程中对反应系统进行直接,连 续观察的方法。显然从准确性和测定效率看连续 法比较好
三 测定方法 测定方法有取样法和连续法。 取样法是在酶反应开始后不同的时间，从反应 系统中取出一定量的反应液，并用适当的方法停 止其反应后，再根据产物和底物在化学性质上的 差别进行分析，求得单位时间内酶促反应变化量 的方法。 连续法则是基于底物和产物在物理化学性质上 的不同，在反应过程中对反应系统进行直接，连 续观察的方法。显然从准确性和测定效率看连续 法比较好
常用的一些测定方法 1化学法 2光学法:(1)光吸收测定法; (2)荧光测定法 (3)旋光测定法 3电化学测定法:(1)离子选择性电极测定法 (2)氧电极测定法; (3)细电流电位测定法 (4)电流测定法 4放射化学测定法 5量气法 6酶偶联分析法
常用的一些测定方法： 1 化学法 2 光学法: (1)光吸收测定法; (2)荧光测定法 ; (3)旋光测定法 3 电化学测定法: (1)离子选择性电极测定法 ; (2)氧电极测定法; (3)细电流电位测定法; (4)电流测定法 4 放射化学测定法 5 量气法 6 酶偶联分析法
1化学法 这是种取样法,停止酶反应通常采用添 加酶的变性剂的办法,或加热使酶失效停 止反应 在化学法中应用何种具体的检测方法要根 据具体的酶反应而定
1.化学法 这是一种取样法，停止酶反应通常采用添 加酶的变性剂的办法，或加热使酶失效停 止反应。 在化学法中应用何种具体的检测方法要根 据具体的酶反应而定
优点:化学法比较古老,但目前仍广泛采用,这 是因为: ()它不需要特殊仪器; (i)几乎所有酶反应都可根据产物或底物的化学 性质找出具体的捡定方法; i)由于色源底物和荧光源底物的发展,可在原 来的底物分子上接上相应的有色基团、发色基团 或荧光基团。 缺点:化学法工作量大;本身包含一定的误差 对速度快的反应常不易得到十分准确的结果,所 以不是理想的测定方法
优点：化学法比较古老，但目前仍广泛采用，这 是因为： (i)它不需要特殊仪器； (ii）几乎所有酶反应都可根据产物或底物的化学 性质找出具体的捡定方法； (iii)由于色源底物和荧光源底物的发展，可在原 来的底物分子上接上相应的有色基团、发色基团 或荧光基团。 缺点：化学法工作量大；本身包含一定的误差， 对速度快的反应常不易得到十分准确的结果，所 以不是理想的测定方法
2光学法 (1)光吸收测定法 原理产物和底物在某一波长或波段上,有明显 的特征吸收差别而建立起来的连续观测方法。 光吸收测定法应用的范围很广,几乎所有氧化 还原酶都可用此法规定。 可以利用光吸收测定的还有那些催化双键饱和 化或双键形成的酶反应,以及那些催化环状结构 变化的酶反应 特点:灵敏度高简便易行,测定可在较短的时间 内完成
2 光学法 (1)光吸收测定法 原理:产物和底物在某一波长或波段上，有明显 的特征吸收差别而建立起来的连续观测方法。 光吸收测定法应用的范围很广，几乎所有氧化 还原酶都可用此法规定。 可以利用光吸收测定的还有那些催化双键饱和 化或双键形成的酶反应，以及那些催化环状结构 变化的酶反应。 特点: 灵敏度高简便易行，测定可在较短的时间 内完成