第六章酶分析 在生产实践和基础理论硏究中往往离不开生化分析, 而酶分析是其中一个重要方面。酶分析包括两种类型 种是以酶为分析对象的分析,这就是通常所说的 酶活力测定 种是以酶为分析工具或分析试剂 的分析,一般可称为“酶法分析”。前者的目的在于 检知样品中某种酶的含量或活性,后者则主要用于测 定与生物学有关的样品中酶以外其它物质的含量 者检测的对象虽有所不同,但原理和方法都是以酶能 专一而高效地催化化学反应为基础,通过酶反应速度的 测定而检测相应物质的含量
第六章 酶分析 在生产实践和基础理论研究中往往离不开生化分析， 而酶分析是其中一个重要方面。酶分析包括两种类型： 一种是以酶为分析对象的分析，这就是通常所说的 ‘酶活力测定”；一种是以酶为分析工具或分析试剂 的分析，一般可称为“酶法分析”。前者的目的在于 检知样品中某种酶的含量或活性，后者则主要用于测 定与生物学有关的样品中酶以外其它物质的含量。二 者检测的对象虽有所不同，但原理和方法都是以酶能 专一而高效地催化化学反应为基础,通过酶反应速度的 测定而检测相应物质的含量
第一节酶活力测定 酶的含量和活性水平可通过特定系统的酶 (促)反应速度而加以测定 在进行这种测定时可采用两种方式 是测定完成一定量反应所需耍的时间 二是测定单位时间内的酶促反应量。 前者常称为终点法,后者称为动力学法
第一节 酶活力测定 酶的含量和活性水平可通过特定系统的酶 (促)反应速度而加以测定。 在进行这种测定时可采用两种方式： 一是测定完成一定量反应所需耍的时间； 二是测定单位时间内的酶促反应量。 前者常称为终点法，后者称为动力学法
点法 这是在特定条件下,将样品中要检测的酶作用 一定量的底物,然后根据反应进行到某一程度(即 达到某一指标)所需要的时间长短来估计酶活力的 种方法。例如,工业生产α-淀粉酶时就是采用 这种方法
一 终点法 这是在特定条件下，将样品中要检测的酶作用 一定量的底物，然后根据反应进行到某一程度(即 达到某一指标)所需要的时间长短来估计酶活力的 一种方法。例如，工业生产α-淀粉酶时就是采用 这种方法
动力学法 1原理 这种测定法的原理是,在一定的条件下,酶反 应速度和酶浓度成正比,因此测定酶反应速度就 可求得酶浓度
二 动力学法 1.原理 这种测定法的原理是，在一定的条件下，酶反 应速度和酶浓度成正比，因此测定酶反应速度就 可求得酶浓度
2.反应条件 选择反应条件的基本要求是,所有待测定的酶 分子都应该能够正常地发挥它的作用。这就是 说/反应系统中除了待测定的酶浓度是影响反 应速度的唯一因素外,其它因素都应处于最适 于酶发挥催化作用的水平。 确定反应条件时应考虑以下因素 (1)底物;(2)pH值;(3)温度; (4)辅助因子;(5样品
2. 反应条件 选择反应条件的基本要求是，所有待测定的酶 分子都应该能够正常地发挥它的作用。这就是 说，反应系统中除了待测定的酶浓度是影响反 应速度的唯一因素外，其它因素都应处于最适 于酶发挥催化作用的水平。 确定反应条件时应考虑以下因素: (1)底物；（2）pH值；（3）温度； (4)辅助因子；(5)样品
三、测定方法 测定方法有取样法和连续法。 取样法是在酶反应开始后不同的时间,从反应 系统中取出一定量的反应液,并用适当的方法 停止其反应后,再根据产物和底物在化学性质 上的差别进行分析,求得单位时间内酶促反应 变化量的方法。 连续法则是基于底物和产物在物理化学性质上 的不同,在反应过程中对反应系统进行直接 连续观察的方法。显然从准确性和测定效率看 连续法比较好
三、测定方法 测定方法有取样法和连续法。 取样法是在酶反应开始后不同的时间，从反应 系统中取出一定量的反应液，并用适当的方法 停止其反应后，再根据产物和底物在化学性质 上的差别进行分析，求得单位时间内酶促反应 变化量的方法。 连续法则是基于底物和产物在物理化学性质上 的不同，在反应过程中对反应系统进行直接， 连续观察的方法。显然从准确性和测定效率看 连续法比较好
常用的一些测定方法: 1化学法 2光学法:(1)光吸收测定法; (2)荧光测定法 (3)旋光测定法 3电化学测定法:(1)离子选择性电极测定法; (2)氧电极测定法; (3)细电流电位测定法 (4)电流测定法
常用的一些测定方法： 1 化学法 2 光学法: (1)光吸收测定法; (2)荧光测定法 ; (3)旋光测定法 3 电化学测定法: (1)离子选择性电极测定法 ; (2)氧电极测定法; (3)细电流电位测定法; (4)电流测定法
1化学法 这是种取样法,停止酶反应通常采 用添加酶的变性剂的办法,或加热使 酶失效停止反应
1.化学法 这是一种取样法，停止酶反应通常采 用添加酶的变性剂的办法，或加热使 酶失效停止反应
优 ()它不需要特殊仪器; 几乎所有酶反应都可根据产物或底物的化学 性质找出具体的捡定方法; ⅲ由于色源底物和荧光源底物的发展,可在原 来的底物分子上接上相应的有色基团、发色基团 反荧光基团。 缺点:化学法工作量大;本身包含一定的误差 对速度快的反应常不易得到十分准确的结果,所 以不是理想的测定方法
优点： (i)它不需要特殊仪器； (ii）几乎所有酶反应都可根据产物或底物的化学 性质找出具体的捡定方法； (iii)由于色源底物和荧光源底物的发展，可在原 来的底物分子上接上相应的有色基团、发色基团 或荧光基团。 缺点：化学法工作量大；本身包含一定的误差， 对速度快的反应常不易得到十分准确的结果，所 以不是理想的测定方法
2光学法 (1)光吸收测定法 原理产物和底物在某一波长或波段上,有明 显的特征吸收差别而建立起来的连续观测方法。 光吸收测定法应用的范围很广、几乎所有氧 化还原酶都可用此法规定。还有那些催化双键 饱和化或双键形成的酶反应,以及那些催化环 状结构变化的酶反应 特点:灵敏度高简便易行,测定可在较短的时 间内完成
2 光学法 (1)光吸收测定法 原理:产物和底物在某一波长或波段上，有明 显的特征吸收差别而建立起来的连续观测方法。 光吸收测定法应用的范围很广，几乎所有氧 化还原酶都可用此法规定。还有那些催化双键 饱和化或双键形成的酶反应，以及那些催化环 状结构变化的酶反应。 特点: 灵敏度高简便易行，测定可在较短的时 间内完成