通用化学实验技术 物质的分离与提纯技术 实验10.叶绿素的柱色谱分离 10.1实验目的 (1)掌握柱色谱(LCC)分离叶绿素的原理： (2)掌握几种常见的装柱技术； (3)写出从白菜叶中提取叶绿素的工艺流程； (4)了解几种常见吸附剂（固定相）的性能和适用范围，了 解选择洗脱剂（流动相）的原则和方法； (5)要用试管按洗脱先后收集洗脱液，约每6ml支，并记 录各有色组分的洗脱时间(min),通过改变洗脱剂的极性 ,使各组分间要能较好的分离。 2024年11月18日星期一 上一页 返回本章首页
通用化学实验技术 2024年11月18日星期一 物质的分离与提纯技术 实验10.叶绿素的柱色谱分离 10.1实验目的 (1) 掌握柱色谱(LCC)分离叶绿素的原理； (2) 掌握几种常见的装柱技术； (3) 写出从白菜叶中提取叶绿素的工艺流程； (4) 了解几种常见吸附剂(固定相)的性能和适用范围，了 解选择洗脱剂(流动相)的原则和方法； (5) 要用试管按洗脱先后收集洗脱液，约每6ml/支，并记 录各有色组分的洗脱时间(min)，通过改变洗脱剂的极性 ，使各组分间要能较好的分离
通用化学实验技术 物质的分离与提纯技术 10.2实验原理 绿色植物的叶和茎中含有胡萝卜素(C40H6)、叶 黄素(C40Hs6O2)、叶绿素a(CssH2MgN,Os)和叶 绿素b(CssH0MgN4O6)。这些色素易被80%丙酮或 石油醚-乙醇混合液萃取，从植物茎、叶中浸提出来。 对于浸提出来的色素混合物，我们可以借助柱色谱 (LC℃)进行粗分离；若要研究洗脱的色素是否存在 同分异构体，则可用薄层色谱(TLC)法进一步分离、 分析。在柱色谱中，氧化铝对青菜叶中各色素的吸附 能力不同，故各组分在流动相里向下移动的速率不同， 各组分随溶剂以不同的时间从柱的下端流出。 2024年11月18日星期一 上一页 返回本章首页
通用化学实验技术 2024年11月18日星期一 物质的分离与提纯技术 10.2实验原理 绿色植物的叶和茎中含有胡萝卜素（C40H56）、叶 黄素（C40H56O2）、叶绿素a（C55H72MgN4O5）和叶 绿素b （C55H70MgN4O6） 。这些色素易被80%丙酮或 石油醚-乙醇混合液萃取，从植物茎、叶中浸提出来。 对于浸提出来的色素混合物，我们可以借助柱色谱 （LCC）进行粗分离；若要研究洗脱的色素是否存在 同分异构体，则可用薄层色谱（TLC）法进一步分离、 分析。在柱色谱中，氧化铝对青菜叶中各色素的吸附 能力不同，故各组分在流动相里向下移动的速率不同， 各组分随溶剂以不同的时间从柱的下端流出
通用化学实验技术 物质的分离与提纯技术 10.3操作流程 用20ml95% 提取液置于 乙醇浸泡8h 分液漏斗 称取青菜叶，切碎 过滤 加10ml石油醚 加50mlH20 加无水硫酸钠干燥←— 水洗醚层1次← 静置分层，放出水层 湿法 中性氧化铝为吸附剂，石油醚丙酮为溶剂 装 加石油醚-丙酮溶液洗脱 收集洗脱液 加样品 2024年11月18日星期 上一页
通用化学实验技术 2024年11月18日星期一 物质的分离与提纯技术 10.3操作流程 称取青菜叶，切碎 过滤 用20ml95% 乙醇浸泡8h 静置分层，放出水层 加10ml石油醚 加50mlH2O 加无水硫酸钠干燥 水洗醚层1次 中性氧化铝为吸附剂，石油醚-丙酮为溶剂 湿法 装柱 加样品 加石油醚-丙酮溶液洗脱 收集洗脱液 提取液置于 分液漏斗
通用化学实验技术 物质的分离与提纯技术 10.4注意事项 (1)柱色谱用氧化铝以通过80目-100目筛孔的颗 粒为宜； (2)填充柱要均匀，要赶走气泡； (3)操作全过程（装填、加样、洗脱分离）都要防柱 身干裂； (4)加样时，样品不要被溶剂或洗脱剂稀释。 2024年11月18日星期一 上一页 返回本章首页
通用化学实验技术 2024年11月18日星期一 物质的分离与提纯技术 10.4注意事项 (1) 柱色谱用氧化铝以通过80目-100目筛孔的颗 粒为宜； (2) 填充柱要均匀，要赶走气泡； (3) 操作全过程(装填、加样、洗脱分离)都要防柱 身干裂； (4) 加样时，样品不要被溶剂或洗脱剂稀释
通用化学实验技术 物质的分离与提纯技术 10.5思考题 (1)装柱不均匀或者有气泡、裂缝将会造成什么 后果？为什么？？ (2)极性大的组分为什么要用极性较大的溶剂 洗脱？？ 2024年11月18日星期一 上一页 回本章首页
通用化学实验技术 2024年11月18日星期一 物质的分离与提纯技术 10.5思考题 (1)装柱不均匀或者有气泡、裂缝将会造成什么 后果？为什么？ (2) 极性大的组分为什么要用极性较大的溶剂 洗脱？
通用化学实验技术 物质的分离与提纯技术 10.6参考文献 (1)罗庆锋叶绿素的研究进展及叶绿素铜钠的开发利用[J) 林产化工通讯，1995，《1). (2)黄辅云等.叶绿体中色素的提取和分离实验的改进.生物学教学，2004： (3)黄辅云等.叶绿体中色素的提取和分离实验的改进，生物学教学，2004. (④欧阳菲关于《叶绿体色素提取与分离》实验的难点分析及其改进方法 .伊犁教育学院学报，2001，(02) (⑤)杨建虹等.大量分离叶绿素a和b的法[J植物生理学通迅，20022)， (6)杨振德.分光光度法测定叶绿素含量的探讨计U亡西农业生物科兰1996，(2. 7 http://e181.cnki.net/cifd 8 http://202.192.89.2/kns50/scdbsearch/scBrief aspx 2024年11月18日星期一 上一页 返回本章首页
通用化学实验技术 2024年11月18日星期一 物质的分离与提纯技术 10.6参考文献 (1)罗庆锋.叶绿素的研究进展及叶绿素铜钠的开发利用[J]. 林产化工通讯,1995,(1). (2)黄辅云等.叶绿体中色素的提取和分离实验的改进.生物学教学,2004. (3)黄辅云等.叶绿体中色素的提取和分离实验的改进.生物学教学,2004. (4)欧阳菲.关于《叶绿体色素提取与分离》实验的难点分析及其改进方法 .伊犁教育学院学报,2001,(02) (5)杨建虹等.大量分离叶绿素a和b的方法[J].植物生理学通讯,2002,(2). (6)杨振德.分光光度法测定叶绿素含量的探讨[J].广西农业生物科学,1996,(2). (7) http://e181.cnki.net/cjfd (8) http://202.192.89.2/kns50/scdbsearch/scBrief.aspx
通用化学实验技术 物质的分离与提纯技术 5.7在线答疑 (1)E-mail: s54y@21cn.com vaniie0001@126.com (2)答疑人： 宋光泉(13694236236) 阎杰(02031728861) 2024年11月18日星期一 上一页 退回本章首页
通用化学实验技术 2024年11月18日星期一 物质的分离与提纯技术 5.7在线答疑 (1)E-mail： s54y@21cn.com yanjie0001@126.com (2)答疑人： 宋光泉(13694236236) 阎 杰(02031728861)
通用化学实验技术 物质的分离与提纯技术 造成沟流现象（谱带前沿一部分向前伸出 的现象)，结果显色不均匀，也产生不规则 的谱带。 2024年11月18日星期一 上一页 返回本章首页
通用化学实验技术 2024年11月18日星期一 物质的分离与提纯技术 造成沟流现象（谱带前沿一部分向前伸出 的现象），结果显色不均匀，也产生不规则 的谱带
通用化学实验技术 物质的分离与提纯技术 根据相似相溶原理。例如吸附在氧化铝上 的酮不能用己烷（非极性）溶剂除去，但可以 用氯仿（极性溶剂）除去。 ☑ 2024年11月18日星期一 【上一页 回本章首页
通用化学实验技术 2024年11月18日星期一 物质的分离与提纯技术 根据相似相溶原理。例如吸附在氧化铝上 的酮不能用己烷（非极性）溶剂除去，但可以 用氯仿（极性溶剂）除去