仪器分析（含实验） 《仪器分析实验》 实险10分子荧光分析法 Molecular Fluorimetry For short:M-F Evident Technologies'quantum dots come in many colours 编写日期.2006年9月
编写日期：2006年9月 《仪器分析实验》 实验10 分子荧光分析法 Molecular Fluorimetry For short: M-F 仪器分析(含实验)
一、分子荧光分析法简介 原子光谱（略） 光谱分析 UV-Vis(紫外-可见) 分子吸收 (对光的吸收) IR（红外) 分子 光谱 光致发光 分子发光 荧光、磷光 其它发光形式 如：化学发光等 编写日期：2006年9月
编写日期：2006年9月 一、分子荧光分析法简介 光 谱 分 析 原子光谱（略） 分子 光谱 分子吸收 UV-Vis（紫外-可见） IR（红外） 分子发光 光致发光 其它发光形式 如：化学发光等 荧光、磷光 (对光的吸收)
11荧光的产生 激发态能量的跃迁与转 发生激发 化的形式和速率： 态反应 A1,A2吸收：105s R isc VR振动松弛：≤1012s ic内转化：≤101s isc系间窜越： 10-6~102s F荧光：109~106s P磷光：10-6~100s 分子内的激发和衰变过程 编写日期：2006年9月
编写日期：2006年9月 2 1 V=0 3 2 1 V=0 2 1 V=0 S0 S1 S2 T1 发生激发 态反应 分子内的激发和衰变过程 1.1 荧光的产生 2 1 V=0 A1 A2 VR F ic isc P VR 激发态能量的跃迁与转 化的形式和速率： A1,A2 吸收: 10-15 s VR 振动松弛： 10-12 s ic 内转化： 10-11 s isc 系间窜越： 10-6 ~ 10-2 s F 荧光： 10-9 ~ 10-6 s P 磷光： 10-6 ~ 100 s
1.2荧光光谱 任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发 射光谱。 激发光谱 发射光谱 组成、结构与衍化信息 800 ☆物质的化学结构 600 8 ☆环境与介质条件 400 ☆与其它溶质的相互作用 200 ☆反应动力学 250300350400450500550 600 Wavelength(nm) 编写日期：2006年9月
编写日期：2006年9月 250 300 350 400 450 500 550 600 0 200 400 600 800 Ex. Wavelength (nm) Relative Fluorescence Intensity 激发光谱 发射光谱 1.2 荧光光谱 任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发 射光谱。 组成、结构与衍化信息 ☆ 物质的化学结构 ☆ 环境与介质条件 ☆ 与其它溶质的相互作用 ☆ 反应动力学
1)共轭结构 萘紫外区 蕙蓝区 丁省绿区 2)刚性的平面结构 0 c00 C00 就光朝会发爱光 酚酞不发荧光 3)取代基 NH2 编写日期：2006年9月
编写日期：2006年9月 O -O COO - O -O COO - NH2 萘 紫外区 蒽 蓝区 丁省 绿区 1）共轭结构 2）刚性的平面结构 荧光黄会发荧光 酚酞不发荧光 3）取代基
1.3荧光定量 4800 4200 3600 F=K·I·p·C 3000 2400 1800 6:光源强度； 1200 p:荧光量子产率； 600 0 550 560570580590600610620 C:荧光体浓度) Wavelength(nm) (☆注意：在一定浓度范围内适用) ?问题： 1)影响相对荧光强度的因素有哪些？ 2)试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。 编写日期：2006年9月
编写日期：2006年9月 1.3 荧光定量 F = K﹒I0﹒φf﹒C I0：光源强度； φf：荧光量子产率； C：荧光体浓度） 1）影响相对荧光强度的因素有哪些？ 2）试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。 ? 问题： 550 560 570 580 590 600 610 620 0 600 1200 1800 2400 3000 3600 4200 4800 C Fluorescence Intensity Wavelength(nm) （☆注意：在一定浓度范围内适用）
1.4荧光仪的基本构造 光电倍增管显示器 电源 类缝一 发射单色器 狭缝 赤 光源 滋发单色器 问题：荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置 上有什么不同？为什么？ 编写日期，2006年9月
编写日期：2006年9月 1.4 荧光仪的基本构造 ？问题：荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置 上有什么不同？为什么？
1.5分子荧光分析法的应用简介 ★常规分析应用： ☆定性分析：pr;)ex;入em;峰形等 ☆定量检测：F=K.·p·C 女其它（略） ★高端生化研究： ☆分子相互作用研究： ☆代谢动力学跟踪； ☆显微成像（物理迁移与化学衍化的原位“显迹”) 编写日期：2006年9月
编写日期：2006年9月 1.5 分子荧光分析法的应用简介 ★ 常规分析应用： ☆ 定性分析：φf；λex；λem；峰形等 ☆ 定量检测： F = K﹒I0﹒φf﹒C ☆ 其它（略） ★ 高端生化研究： ☆ 分子相互作用研究； ☆代谢动力学跟踪； ☆ 显微成像（物理迁移与化学衍化的原位“显迹”）
千4500 28062/05 8ug1205 编写日期：2006年9月
编写日期：2006年9月
二、维生素B6注射液中维生素B6含量的 荧光法测定 2.1实验原理 HO CH>OH ★在近中性的水溶液中 有较强的荧光发射： (323nm/392nm附近) H3C R=CH2NH2,CH2OH,CHO. ★在碱性介质中不稳定 VB。的化学结构 ☆易发生光降解 编写日期：2006年9月
编写日期：2006年9月 二、维生素B6注射液中维生素B6含量的 荧光法测定 2.1 实验原理 N HO CH2OH H3C R R = CH2NH2 , CH2OH, CHO. ★ 在近中性的水溶液中 有较强的荧光发射: （323nm/392nm 附近） ★在碱性介质中不稳定 VB6 的化学结构 ★易发生光降解