第四节酶促反应动力学(kinetics of enzyme 一、底物浓度对酶反应速率的影响 (一)V。-[S]曲线 1903年，Henry提出ES中间络合物学说： S+E←→ES>P+E 实验证据： E$复合物的电镜观察和晶体分析； E和S的共沉降
第四节 酶促反应动力学（kinetics of enzyme ） 一、底物浓度对酶反应速率的影响 （一）V0－[S]曲线 1903年，Henry 提出 ES 中间络合物学说： S+E ES→P+E 实验证据： ES复合物的电镜观察和晶体分析； E和S的共沉降
(二)米氏方程(Michaelis-Menten equation 1913年Michaelis and Menten的假设： (1)S+E←>ES迅速建立平衡 (2)E$形成P是限速步骤 1925年Briggs and Haldane提出稳态理论 当反应系统中的ES生成速率与ES分解速率相等 时，ES浓度保持不变
（二）米氏方程（Michaelis-Menten equation） 1913 年 Michaelis and Menten 的假设： (1) S+E ES 迅速建立平衡 (2) ES形成P是限速步骤 1925年 Briggs and Haldane 提出稳态理论 当反应系统中的ES生成速率与ES分解速率相等 时,ES浓度保持不变
1.米氏方程的推导
1. 米氏方程的推导
Vmax[S] Km+[S] ES米氏方程表明了酶反应速度与底物浓度 的定量关系。 [S]>Km时 V。=Vmax
ES米氏方程表明了酶反应速度与底物浓度 的定量关系。 [S]Km时 V0=K[S] [S] Km时 V0=Vmax
2.米氏常数的意义 (1)Km值的物理意义： 为酶反应速度达到最大反应速度一半时底 物的浓度。单位：mol/L
2. 米氏常数的意义 （1）Km值的物理意义： 为酶反应速度达到最大反应速度一半时底 物的浓度。单位：mol/L
是Vmax Km Substrate concentration,[S](mM)
(2)Km值是酶的一个特征常数（一定条件 下)； (3)Km值可用来确定酶的最适底物和专一 性(1/Km可以表示酶与底物的亲和力)方 (4)从Km可以推测某一底物浓度时Vo/Vms
（2）Km值是酶的一个特征常数（一定条件 下）; （3）Km值可用来确定酶的最适底物和专一 性(1/Km可以表示酶与底物的亲和力); （4）从Km可以推测某一底物浓度时V0 /Vmax
(5)利用Km值可以推断细胞内的反应情况 可逆反应的方向 连锁反应的限速步骤 交叉反应的途径 (6)Kcat/Km更适于比较不同酶的催化效率 Vmax=K3[E] K3=TN=Kcat(催化常数)
（5）利用Km值可以推断细胞内的反应情况 可逆反应的方向 连锁反应的限速步骤 交叉反应的途径 (6) Kcat/Km更适于比较不同酶的催化效率 Vmax=K3 [E] K3 =TN=Kcat(催化常数)
table 8-8 Enzymes for WhichsClose to the Diffusiond Limit (1) kal Enzyme Substrate 6 d s少 Acetstr Acetychoine 14x10 9x105 1.6x10 Canyrase 00 1×10 1.2x10 83×10 HCO3 4×10 2.6x10-2 1.5x10 Catalase H.O2 4×10 1.1 4x10 Crotonase Cotcny-CaA 5.7x10 2×105 28×10 Fumarase Fumarate 8X10 5X10 16×10 Malate 9x10 2.5x10-5 36x10 -Lactamase Benzyp 2.0×10 2x105 1x10 Tse phosphaem Glyceraldehydph 43×10 4.7x104 2.4X10 Source:Fersht,A.(1999)Stuctureand MchasPSncep.166.W.H.Freeman om New Yrk
3.Km和Vmax测定 双倒数作图法(Double-Reciprocal plot) 米氏方程两边取双倒数，转换成直线方程。 1V,为横坐标，1/S]为纵坐标
3. Km和Vmax测定 双倒数作图法（Double-Reciprocal plot） 米氏方程两边取双倒数，转换成直线方程。 1/V0 为横坐标， 1/[S]为纵坐标