第三节蛋白质的鉴定 一、蛋白质分子量的测定 (一)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS-PAGE 变性电泳 在巯基乙醇存在下，蛋白质亚基分开，多 肽链伸展；然后SDS与多肽链以1.4：1的重量 比结合成复合物
第三节 蛋白质的鉴定 一、蛋白质分子量的测定 （一）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS－PAGE 变性电泳 在巯基乙醇存在下， 蛋白质亚基分开，多 肽链伸展；然后SDS与多肽链以1.4:1的重量 比结合成复合物
SDS与蛋白质的结合改变了蛋白质分 子的带电情况和分子形状 因此当蛋白质在电场中移动时，其迁 移率仅与其分子量有关
SDS与蛋白质的结合改变了蛋白质分 子的带电情况和分子形状 因此当蛋白质在电场中移动时，其迁 移率仅与其分子量有关
蛋白质分子量M与迁移率u的关系式： LogM=a-bμu 用已知分子量的标准蛋白在同样条件下 电泳，分别测其迁移率，做成标准曲线。 测出未知蛋白质的迁移率，从图上查得蛋 白质分子量
蛋白质分子量M与迁移率的关系式： Log M = a - b 用已知分子量的标准蛋白在同样条件下 电泳，分别测其迁移率，做成标准曲线。 测出未知蛋白质的迁移率，从图上查得蛋 白质分子量
Myosin 200,000 B-Galactosidase 116,250 Phosphorylase b 97,400 Bovine serum albumin 66,200 Ovalbumin 45,000 Carbonic anhydrase 31,000 Unknown protein Soybean trypsin inhibitor 21,500 Lysozyme 14,400 Mr Unknown standards protein Relative migration (a) h
SDS-PAGE测定蛋白质分子量的特点： 蛋白质已变性； 对多亚基蛋白，测定的是亚基的分子量
SDS-PAGE测定蛋白质分子量的特点： 蛋白质已变性； 对多亚基蛋白，测定的是亚基的分子量
(二)凝胶过滤 蛋白质分子量与洗脱体积 关系式： Log M=k1-k2Ve Porous polymer beads Protein mixture is added 标准蛋白洗脱曲线 Protein molecules separate by size:larger molecules 0n ore freely.appearing in the earlier fractions
（二）凝胶过滤 蛋白质分子量与洗脱体积 关系式： Log M = k1 -k2Ve 标准蛋白洗脱曲线
测出未知蛋白质的洗脱体积，从图上查 出蛋白质分子量。 特点： 测的是天然蛋白质分子量； 适合球状分子
测出未知蛋白质的洗脱体积，从图上查 出蛋白质分子量。 特点： 测的是天然蛋白质分子量； 适合球状分子
(三)沉降速度法 蛋白质在离心力作用下发生沉降，沉降速度与 蛋白质分子分子量、密度、形状有关。 对特定蛋白质来讲，单位离心力场的沉降速 度为一定值，称为沉降系数(sedimentation coefficient)。 沉降系数通常用Svedberg单位(S)表示。 一个S等于1013秒
（三）沉降速度法 蛋白质在离心力作用下发生沉降，沉降速度与 蛋白质分子分子量、密度、形状有关。 对特定蛋白质来讲，单位离心力场的沉降速 度为一定值，称为沉降系数（sedimentation coefficient）。 沉降系数通常用Svedberg 单位（S）表示。 一个S等于10-13秒
斯维得贝格(Svedberg)方程： 沉降系数越大 分子量越大
斯维得贝格（Svedberg）方程： 沉降系数越大 分子量越大
(四)蛋白质分子量测定新技术 1.Recombinant DNA technology 2.Electrospray Mass Spectrometry
（四）蛋白质分子量测定新技术 1. Recombinant DNA technology 2. Electrospray Mass Spectrometry